多聚核苷酸對(duì)小鼠急性毒性和蓄積毒性研究

郭遠(yuǎn)奎 （山東省榮成市崖頭畜牧獸醫(yī)站 264300） 賈海洋 （榮成市寧津畜牧獸醫(yī)站）

張大林 （榮成市畜牧獸醫(yī)站）

多聚核苷酸是聚肌苷酸和聚胞嘧啶酸的共聚物，是一種高效干擾素誘生劑，具有廣譜抗病毒、抗腫瘤、抗某些細(xì)菌和原蟲感染、刺激吞噬、調(diào)整機(jī)體免疫功能等多種保護(hù)作用[1-4]。在獸醫(yī)臨床中，常用于豬瘟、鴨瘟和新城疫等疾病的治療[5-7]。盡管國內(nèi)外眾多學(xué)者曾在多聚核苷酸藥物治療方面進(jìn)行了諸多探討，但這些研究工作多集中在多聚核苷酸體內(nèi)、外誘導(dǎo)產(chǎn)生IFN及其抗病毒的效果、臨床藥效學(xué)等方面，而關(guān)于其毒理學(xué)的研究資料則極為匱乏。為此筆者進(jìn)行了多聚核苷酸注射液的一般毒性和蓄積毒性試驗(yàn)。

1 材料與方法

1.1 試劑 試驗(yàn)用多聚核苷酸注射液由瑞普(天津)動(dòng)物藥業(yè)有限公司生產(chǎn)，注射用環(huán)磷酰胺由江蘇恒瑞醫(yī)藥股份有限公司生產(chǎn)。

1.2 方法 （1）急性毒性試驗(yàn)。選用體重18～20g的昆明系小鼠60只，隨機(jī)分成6組，每組10只，雌雄各半。通過預(yù)試驗(yàn)測(cè)得多聚核苷酸注射液對(duì)小鼠的最高致死劑量為210mg·kg-1，最低致死劑量為35mg·kg-1，選取劑量比r＝1.4。采用倍比稀釋法將多聚核苷酸原液稀釋，分別腹腔注射實(shí)驗(yàn)小鼠。給藥后觀察動(dòng)物的反應(yīng)，連續(xù)觀察7d，記錄動(dòng)物的中毒癥狀和死亡動(dòng)物的分布情況。用改良寇氏法計(jì)算小鼠腹腔注射多聚核苷酸注射液的LD50及95%可信限[14,15]。（2）蓄積毒性試驗(yàn)。選用體重118～22g的昆明系小鼠20只，雌雄各半。定時(shí)腹腔注射1次/d。試驗(yàn)分為5期，每期4d，第1期劑量為0.100倍的LD50，以后幾期分別按LD50的0.150、0.225、0.338、0.506倍的劑量遞增。觀察和記錄動(dòng)物中毒表現(xiàn)及死亡情況，計(jì)算蓄積系數(shù)K= LD50(n)/LD50，式中LD50(n)為nd蓄積試驗(yàn)時(shí)出現(xiàn)半數(shù)動(dòng)物死亡時(shí)受試物的蓄積總劑量，用LD50的倍數(shù)表示；LD50為急性毒性試驗(yàn)的半數(shù)致死劑量)。當(dāng)K≥5時(shí)，為弱蓄積性；當(dāng)3≤K<5時(shí)，為中等蓄積性；當(dāng)1≤K＜3時(shí)，為強(qiáng)蓄積性[12]。

2 結(jié)果

2.1 急性毒性試驗(yàn) 各劑量組部分小鼠腹腔注射多聚核苷酸注射液后即可出現(xiàn)驚跳，隨后可見精神不振，體顫，四肢癱軟，少動(dòng)，部分小鼠排稀糞，肛門周圍有淺黃色稀糞污染。死亡多發(fā)生于給藥后約1～12h(表1)。對(duì)死亡小鼠進(jìn)行剖檢，肉眼觀察心、肝、脾、腎、肺等臟器未見明顯變化，腸道臌脹，剖開可見水樣內(nèi)容物。

用改良寇氏法計(jì)算動(dòng)物死亡的LD50及95%可信限，多聚核苷酸注射液的急性毒性試驗(yàn)結(jié)果顯示，多聚核苷酸對(duì)小鼠的LD50為0.0835g·kg-1，lgLD50及其95%可信限為-1.07808±1.00548，95%可信限為0.06628～0.10532(g·kg-1)。

表1 不同劑量多聚核苷酸注射液腹腔注射后致小鼠死亡情況

2.2 蓄積毒性試驗(yàn) 藥物注射20d后，實(shí)驗(yàn)小鼠的死亡總數(shù)為零，仍未過半數(shù)，而多聚核苷酸的累積總劑量已達(dá)到LD50的5.276倍。

3 討論

本試驗(yàn)的急性毒性結(jié)果，按國際急性毒性分級(jí)標(biāo)準(zhǔn)可判斷為中等毒性[12]。國內(nèi)外關(guān)于多聚核苷酸急性毒性的報(bào)道并不多，根據(jù)報(bào)道，國外生產(chǎn)的多聚核苷酸腹腔注射的LD50為34.7mg·kg-1[8]，國內(nèi)生產(chǎn)的多聚核苷酸腹腔注射的LD50為59.73mg·kg-1[9]，可見國內(nèi)生產(chǎn)的多聚核苷酸注射液急性毒性較小，本試驗(yàn)的結(jié)果與報(bào)道一致。

多聚核苷酸注射液對(duì)小鼠的蓄積系數(shù)K>5，根據(jù)蓄積毒性強(qiáng)度分級(jí)，為弱蓄積性，這可能與多聚核苷酸在體內(nèi)代謝較快有關(guān)。耐受性試驗(yàn)結(jié)果表明，小鼠對(duì)多聚核苷酸注射液小劑量長期染毒出現(xiàn)耐受現(xiàn)象。因此，多聚核苷酸使用過程中應(yīng)注意使用頻率和劑量。

[1]張秀國, 吳德政. 聚肌胞(多聚核苷酸)抗腫瘤作用和免疫調(diào)節(jié)作用[J]. 癌癥, 1991,. 10(3): 173-176.

[2]舒昌杰. 聚肌胞生物學(xué)功能與應(yīng)用[J]. 陜西醫(yī)學(xué)雜志, 1989, 18(10):40-43.

[3]Loseke S，Grage-Griebenow E，Heine H，et al.In vitro-generated viral double-stranded RNA in contrast to polyinosinic: polycytidylic acid induces interferon-alpha in human plasmacytoid dendritic cells[J]. Scand J Immunol, 2006, 63(4): 264-274.

[4]王春林. 聚肌胞的藥理和臨床應(yīng)用[J]. 江蘇醫(yī)藥, 1992, 18(5): 282-283.

[5]范琳, 呂清林. 聚肌胞(多聚核苷酸)治療鴨瘟試驗(yàn)報(bào)告[J]. 中國禽業(yè)導(dǎo)刊, 1998, 15(4): 81.

[6]趙振華, 羅家鑄, 皇甫玉珩等. 單純型豬瘟的病理學(xué)研究及干擾素誘導(dǎo)劑聚肌胞(polyI∶C)對(duì)豬瘟的保護(hù)性作用的探討[J]. 內(nèi)蒙古農(nóng)業(yè)大學(xué)學(xué)報(bào)自然科學(xué)版, 1983, 4(1): 47-57.

[7]李鳳艷, 葛銘, 董新榮等. 聚肌胞注射液對(duì)雞新城疫感染的保護(hù)率試驗(yàn)[J]. 甘肅畜牧獸醫(yī), 2007, 37(1): 17-19.

[8]Homan E R，Zendzian R P，Schott L D,et al. Studies on PolyI:C toxicity in experimental animals[J]. Toxicology Applied Pharmacology,1972, 23(4): 579-588.

[9]王磊, 覃少華, 愈吉杰等. 聚肌胞對(duì)小鼠的急性毒性和蓄積毒性[J]. 中國組織工程研究與臨床康復(fù), 2007, 2(15): 2826-2828, 2835.