基層醫(yī)院HIV抗體測定室內(nèi)質(zhì)控初探

丁順娥 施 煒

宜興市周鐵醫(yī)院檢驗(yàn)科（214261）

隨著艾滋病流行形勢的日趨嚴(yán)峻，新發(fā)現(xiàn)的感染者數(shù)量在成倍增加，艾滋病的檢測也顯得非常重要，國內(nèi)檢測HIV抗體的方法主要是酶聯(lián)免疫法，而其檢測結(jié)果受到試劑的質(zhì)量，檢驗(yàn)人員的操作水平以及實(shí)驗(yàn)室的操作條件如儀器的穩(wěn)定性、試劑盒的質(zhì)量、加樣操作、孵育溫度、顯色時間等諸多因素的影響，為保證檢測結(jié)果的穩(wěn)定性、準(zhǔn)確性，對艾滋病實(shí)驗(yàn)室進(jìn)行全面的質(zhì)量評價是必不可少的，多年以來，基層醫(yī)院檢驗(yàn)科對ELISA法檢測HIV抗體的室內(nèi)質(zhì)控一直不夠重視，認(rèn)為不像生化定量那樣有具體直觀的數(shù)據(jù)，且試劑盒內(nèi)已有陰陽性對照、結(jié)果明了，認(rèn)為沒有必要和沒有好辦法進(jìn)行質(zhì)控。眾所周知，Levey-Jenings質(zhì)控圖法都必須檢測20次，方可繪制質(zhì)控圖，其周期較長，一些不是每天檢測的如HIV抗體的檢測等項(xiàng)目的檢測質(zhì)控都會遇到困難，在基層實(shí)驗(yàn)室尤為如此，為此，本室采用即刻法質(zhì)控與Levey-Jenings質(zhì)控圖法相結(jié)合的方法實(shí)現(xiàn)室內(nèi)質(zhì)控，即將同一批外部質(zhì)控血清連續(xù)測定3次后，對第3次到第20次的所有檢驗(yàn)結(jié)果進(jìn)行即刻法質(zhì)控，20次以后采用Levey-Jenings質(zhì)控圖法進(jìn)行質(zhì)控。

1 材料與方法

表1 HIV抗體即刻法質(zhì)控自動判斷表[2]

1.1 儀器與試劑

北京普朗新技術(shù)有限公司酶標(biāo)儀DNM9602A，美國寶特ELX-50型洗板機(jī)，英科新創(chuàng)科技有限公司HIV（雙抗原夾心酶聯(lián)免疫法）ELISA抗體診斷試劑盒。

1.2 方法

1.2.1 首先必須購買同一批號的試劑盒兩盒以上，將同一批號的每盒內(nèi)陽性對照血清各吸400μL進(jìn)行混合，然后因?yàn)楸緦?shí)驗(yàn)臨介值（CO）為0.15，按照HIV抗體弱陽性（S/CO=2.0～2.9）的標(biāo)準(zhǔn)，以及弱陽性質(zhì)控的標(biāo)本的光密度應(yīng)是臨介值的2～3倍，稀釋后弱陽性的質(zhì)控標(biāo)本光密度應(yīng)在0.3～0.45，為此，本室將陽性對照混合血清用正常人體檢者血清（即乙型肝炎兩對半和HIV抗體陰性）進(jìn)行1∶2、1∶4、1∶8、1∶16、1∶24、1∶32稀釋[1]，然后56℃加熱30min滅活處理，每一個稀釋度吸兩孔，與標(biāo)本一起檢測，得出最適稀釋度為1∶24，將陽性對照混合血清用正常人血清稀釋后，按每天試驗(yàn)用量分裝，標(biāo)記，封口，-20℃保存于非自動除霜冰箱中，和標(biāo)本一起檢測，得到第一次和第二次的光密度值分別是0.352、0.370，S/CO值分別是2.33、2.46。

2 結(jié) 果

2.1 將質(zhì)控血清的測定值按測定次數(shù)從小到大排列

計(jì)算時OD值按X1、X2、X3、X4……，Xn，X1為最小值，Xn為最大值（表1）。

2.3 計(jì)算SI上限值和SI下限值。

2.5 將SI上限，SI下限與上表中n2s和n3s值中的數(shù)值比較。

2.5.1 當(dāng)SI上限和SI下限，＜n2s時表示處于控制范圍內(nèi)，可以繼續(xù)測定，繼續(xù)重復(fù)以上各項(xiàng)計(jì)算。當(dāng)SI上限和SI下限有一值處于n2s～n3S時說明該值在2S～3S范圍，處于告警狀態(tài)。當(dāng)SI上限和SI下限有一值＞n3s值時說明該值已在3S范圍之外，屬失控[3]。

2.5.2 繪制質(zhì)控圖

根據(jù)外部對照質(zhì)控血清連續(xù)檢測20次所測得的S/CO值計(jì)算出χ—平均值±2S，以試驗(yàn)日期為橫坐標(biāo)，以S/CO值為縱坐標(biāo)繪制質(zhì)控圖。從第21日起，將每次質(zhì)控血清的檢測結(jié)果（S/CO值）依次繪入該質(zhì)控框架圖中，檢驗(yàn)進(jìn)入Levey-Jenings質(zhì)控圖狀態(tài)。

2.6 從表1可以看出，即刻法質(zhì)控與Levey-Jenings質(zhì)控圖法質(zhì)控的標(biāo)準(zhǔn)差、平均值、變異系數(shù)分別是0.061（0.056）、2.40（2.397）、2.3%（2.5%），t=0.5907，P＞0.05，說明兩種方法數(shù)據(jù)構(gòu)成的樣本的平均值差異不明顯，兩種方法的結(jié)合對艾滋病實(shí)驗(yàn)室的質(zhì)量控制是可行的，彌補(bǔ)了彼此的不足，特別是能對第3次到第20次的檢測進(jìn)行質(zhì)量控制，經(jīng)過1年多的觀察，外部質(zhì)控血清穩(wěn)定性良好。

3 討 論

3.1 我們實(shí)驗(yàn)室一直采用S/CO值進(jìn)行室內(nèi)質(zhì)控并收到良好的效果，自行配制的外部質(zhì)控血清穩(wěn)定性良好，變異系數(shù)＜10%。

3.2 即刻法質(zhì)控與質(zhì)控圖法的質(zhì)控的聯(lián)合運(yùn)用，使檢測從第3次起就處于質(zhì)控狀態(tài)，有利于及時發(fā)現(xiàn)問題。

3.3 兩種方法的結(jié)合，降低了工作量和試劑消耗，結(jié)果可靠，適用于標(biāo)本量少，工作量小的基層醫(yī)院艾滋病初篩實(shí)驗(yàn)室。

3.4 質(zhì)量是臨床實(shí)驗(yàn)室的生命線，在開展質(zhì)量控制前，應(yīng)使每個工作人員對質(zhì)量控制的重要性，以及質(zhì)控知識和質(zhì)控作圖方法有充分的了解，并能通過對質(zhì)控圖形的的分析，及時發(fā)現(xiàn)工作中的問題，并有在失控后迅速查找原因的能力。使實(shí)驗(yàn)室工作中每個與質(zhì)量有關(guān)的問題都查有記錄，并有專人管理，有章可循。

3.5 此法缺憾是如前3次結(jié)果穩(wěn)定，精密度較好，方差S變異系數(shù)較小，對后續(xù)結(jié)果要求也高，易出現(xiàn)假失控。

[1]王錦恒,鄧梅英.初篩實(shí)驗(yàn)室 -HIV臨界值質(zhì)控血清的制備及應(yīng)用[J].華夏醫(yī)學(xué),2006,19(1):151.

[2]孫曉祥.EXCEL在HCV-Ab即刻法質(zhì)控中的應(yīng)用[J].當(dāng)代醫(yī)學(xué)(學(xué)術(shù)版),2008,14(23):180-182.

[3]疾控中心.全國艾滋病檢測技術(shù)規(guī)范[S].2009.