降酶靈膠囊對急性肝損傷的藥效研究

張俊明 鄭國安 方 鋁 李 良 郭 晟 吳金花

江西省南昌市藥物研究所（330029）

降酶靈膠囊是由江西銀濤藥業(yè)有限公司生產(chǎn)其由五味子提取物制成，其主要用于降低肝炎患者丙氨酸轉(zhuǎn)氨酶的作用，為了探索降酶靈膠囊對急性肝損傷的藥效作用，作者對其進(jìn)行了有關(guān)降酶的藥效學(xué)試驗，為降酶靈膠囊藥效作用提供依據(jù)。

1 材料與方法

1.1 材料

1.1.1 藥物

降酶靈膠囊：由江西銀濤藥業(yè)有限公司提供，規(guī)格：30粒/瓶，每粒膠囊含0.15g五味子提取物，批號：20020304。聯(lián)苯雙酯片：江蘇黃河藥業(yè)股份有限公司生產(chǎn)，批號：20010923。

1.1.2 實(shí)驗動物

昆明種小鼠：體質(zhì)量25～28g，60只，雌雄各半，SD大鼠：體質(zhì)量250～280g，雄性60只，購自上海斯萊克實(shí)驗動物有限責(zé)任公司，實(shí)驗動物生產(chǎn)許可證號：SCXK（滬）2003-0003，動物合格證號：SCXK（滬）：0002755、0003108。

1.1.3 試劑

ALT、TBIL：北京中生生物工程高技術(shù)公司生產(chǎn)；CCl4，上海試劑四廠生產(chǎn)；D-氨基半乳糖（D-Gal），Sigma 公司生產(chǎn)。

1.1.4 儀器

BT-224半自動生化儀，意大利產(chǎn)。

1.2 方法

1.2.1 對小鼠CCl4急性肝損傷模型的保護(hù)作用[1]

取小鼠60只，雌雄各半，按體質(zhì)量分層隨機(jī)分為6組，每組10只，即對照組、模型組、降酶靈膠囊0.135、0.270和0.540g/kg劑量組和聯(lián)苯雙酯15mg/kg組。連續(xù)7d灌胃給予相應(yīng)劑量的藥物，對照組和模型組給予等體積的蒸餾水，1次/d，末次給藥后1h，除對照組均腹腔注射0.1%CCl4麻油混懸液10mL/kg，然后禁食過夜，16h后摘眼球取血，分離血清，檢測血清ALT值。取血后處死小鼠立即剖腹，取同一部位的肝組織，用甲醛固定，包埋、切片，進(jìn)行病理學(xué)觀察，病理結(jié)果觀察分級[2]：匯管區(qū)肝細(xì)胞胞漿疏松，病變?yōu)?級；點(diǎn)狀壞死，肝小葉結(jié)構(gòu)無破壞，病變?yōu)?級；肝實(shí)質(zhì)內(nèi)累及數(shù)個肝細(xì)胞壞死小灶，病變?yōu)?級；灶性壞死，并部分結(jié)構(gòu)破壞，病變?yōu)?級；正常則為0級，取每組平均數(shù)作為該組動物的損傷程度，測得數(shù)據(jù)進(jìn)行組間t檢驗。

1.2.2 對大鼠D-Gal鹽急性肝損傷模型的保護(hù)作用[2]

取雄性大鼠60只，按體質(zhì)量分層隨機(jī)分為6組，每組10只，即對照組、模型組、降酶靈膠囊0.068、0.135、0.270g/kg劑量組和聯(lián)苯雙酯組7.5mg/kg。各組動物均于12h內(nèi)連續(xù)灌胃給藥3次，對照組和模型組給予等體積的蒸餾水，其他組給予相應(yīng)劑量的藥物，第1次給藥的同時腹腔注射D-Gal（800mg/kg），最后1次給藥后12h，摘眼球采血分離血清，測血清ALT與TBIL的含量，所測數(shù)據(jù)均進(jìn)行組間t檢驗。

2 結(jié) 果

2.1 降酶靈膠囊對CCl4致小鼠急性肝損傷的保肝作用

降酶靈膠囊組給藥后均能降低由CCl4所引起的小鼠急性肝損傷血清ALT值，與模型組比較差異有顯著性和非常顯著性意義（P＜0.05和P＜0.01），在光鏡下，給藥組的損傷度明顯較模型組小，見表1。

表1 降酶靈膠囊對CCl4誘導(dǎo)小鼠急性肝損傷的實(shí)驗結(jié)果（χ— ±s，n=10）

2.2 降酶靈膠囊對D-Gal致急性肝損傷大鼠模型的保護(hù)作用

降酶靈膠囊0.135、0.270g/kg均能明顯降低由D-Gal所致大鼠急性肝損傷血清ALT與TBIL，與模型組比較差異有顯著性和非常顯著性意義（P＜0.05和P＜0.01），見表2。

表2 降酶靈膠囊對D-半乳糖鹽酸鹽所致大鼠急性肝損傷的實(shí)驗結(jié)果（χ— ±s，n=10）

3 討 論

CCl4和D-Gal均可造成明顯的動物肝臟損傷[3,4]，CCl4致肝損傷是目前普遍應(yīng)用的實(shí)驗肝損傷模型，其進(jìn)入體內(nèi)經(jīng)肝酶P450激活產(chǎn)生自由基和三氯甲基自由基CCl3+，CCl3+和肝細(xì)胞內(nèi)質(zhì)網(wǎng)膜上的脂質(zhì)起過氧化反應(yīng)，引起細(xì)胞膜結(jié)構(gòu)和功能的損傷，而D-半乳糖胺鹽酸鹽是一種肝細(xì)胞磷酸尿嘧啶核苷干擾劑，通過競爭生成二磷酸尿苷半乳糖使磷酸尿苷耗竭，導(dǎo)致物質(zhì)代謝障礙，引起肝細(xì)胞變性、壞死。

實(shí)驗中我們通過制備不同的動物模型，觀察降酶靈膠囊的保肝降酶作用，結(jié)果顯示，降酶靈膠囊能夠明顯降低CCl4所致小鼠ALT的升高，使肝細(xì)胞的損傷度較模型組明顯減輕，能明顯降低D-半乳糖胺鹽酸鹽所致大鼠ALT的升高，使肝損傷后TBIL較模型組明顯降低，結(jié)果提示降酶靈膠囊具有改善CCl4和D-Gal所致肝損傷，具有明顯的保肝降酶 降低膽紅素的作用。

[1]羅先欽,徐曉玉,徐嘉紅.凈肝脂膠囊對小鼠急性肝損傷及脂肪肝的保護(hù)作用研究[J].中藥藥理與臨床,2007,23(2):62-64.

[2]應(yīng)用英.鴨乙型肝炎病毒感染的研究[J].中華病理學(xué)雜志,1989,18(1):2-5.

[3]張馨木,賀巾超,楊莉莉等. rhKD/APP對急性肝損傷小鼠的保護(hù)作用[J].吉林大學(xué)學(xué)報(醫(yī)學(xué)版),2007,33(1):51-54.

[4]李梅,谷淑玲,馬騰飛. D-氨基半乳糖致小鼠、大鼠肝損傷模型的實(shí)驗性研究[J].徐州醫(yī)學(xué)院學(xué)報,2007,27(2):86-88.