實驗動物飲用水機制無菌水與高壓滅菌水的對比效果觀察

吳金花，丁 琦

（江西省藥物研究所，江西南昌 330029）

隨著生命科學的不斷發(fā)展，人們對實驗動物的質(zhì)量要求也越來越高，清潔級以上的實驗動物使用量也隨之增大，清潔級實驗動物飲用水和屏障系統(tǒng)內(nèi)環(huán)境衛(wèi)生使用水用量越來越大，并要求達到無菌，應用純水機制無菌水是一個很好的思路。目前實驗動物飲用水一般采用高壓滅菌（121℃，30min），有的也應用純水機制水。高壓消毒滅菌效果好，但耗水、耗時、耗電，用水有限；制水機制無菌水取水方便，又省電，效果如何值得注意。為了實驗動物飲水安全，筆者對MN-LM-50J實驗動物飲用水機所制無菌水與高壓滅菌水進行了對比實驗。

1 材料與方法

1.1 實驗動物飲用水機

實驗動物飲用水機型號MN-LM-50J，生產(chǎn)單位：北京木牛流馬有限公司。實驗動物飲用水機放置在屏障系統(tǒng)外，與屏障系統(tǒng)內(nèi)以水管連接，屏障系統(tǒng)內(nèi)有一出水龍頭，供屏障內(nèi)使用。

1.2 高壓滅菌水

高壓滅菌水經(jīng)121℃、30 min高壓滅菌進入屏障環(huán)境內(nèi)，供屏障環(huán)境內(nèi)實驗動物飲用或使用。

1.3 培養(yǎng)基

營養(yǎng)瓊脂培養(yǎng)基，北京雙旋微生物培養(yǎng)基制品廠，批號20080302；硫乙醇酸鹽流體培養(yǎng)基，北京雙旋微生物培養(yǎng)基制品廠，批號20080516；營養(yǎng)肉湯培養(yǎng)基，杭州天和微生物試劑有限公司，批號20080105。

1.4 水樣的采集[1]

1.4.1 飲用水機水樣的采集 無菌操作，在屏障內(nèi)用酒精擦拭消毒實驗動物飲用水機龍頭，再將水龍頭打開，放水5 min后，用滅菌的三角燒瓶采集水樣，密封備用。

1.4.2 高壓滅菌水樣的采集 無菌操作，將屏障內(nèi)高壓滅菌水用酒精擦拭瓶口消毒，倒入已滅菌的三角燒瓶內(nèi)，密封備用。

1.5 實驗動物飲用水機水和高壓滅菌水檢驗[2]

在超凈臺內(nèi)用滅菌吸管分別吸取實驗動物飲用水機水和高壓滅菌水各1 ml檢樣，分別接種于肉湯培養(yǎng)基和硫乙醇酸鹽液體培養(yǎng)基上。37℃培養(yǎng)48 h，進行需氧菌和厭氧菌的檢驗。

1.6 細菌總數(shù)的測定

在超凈臺內(nèi)無菌操作用，將滅菌吸管分別吸取實驗動物飲用水機水及高壓滅菌水各1 ml，注入無菌平皿中，再傾注約15 ml置45℃左右的營養(yǎng)瓊脂培養(yǎng)基中，立即旋搖平皿使檢樣與培養(yǎng)基充分混勻。每個檢樣2個平皿。于37℃培養(yǎng)24 h后計數(shù)。

2 結(jié)果

無菌檢驗及細菌總數(shù)檢驗結(jié)果：實驗動物飲用水機制水在營養(yǎng)肉湯培養(yǎng)基、硫乙醇酸鹽流體培養(yǎng)基經(jīng)過48 h培養(yǎng)，結(jié)果均呈陽性；高壓滅菌水均呈陰性，見表1。實驗動物飲用水機制水在營養(yǎng)瓊脂培養(yǎng)基培養(yǎng)24 h菌落數(shù)和高壓滅菌水菌落數(shù)見表2。

表1實驗動物飲用水機水與高壓滅菌水無菌檢查對比觀察Tab.1 Observation of experimentals animals drinking water machine water and autoclave sterility test

3 討論

雷培琪等[3]報道機制純水效果好，能達到屏障系統(tǒng)動物飲用的無菌水的要求，但通過本對比實驗，MN-LM-50J實驗動物飲用水機所制飲用水并不能達到無菌效果；而高壓滅菌水能達到無菌要求，即使存放在儲水桶內(nèi)7 d仍未檢出菌落。通過對比實驗，筆者認為實驗動物飲用水采用高壓滅菌水更為安全，建議不能盲目使用機制飲用水，要注意機制飲用水機型及制水質(zhì)量[4]，做好對比實驗后再使用。

表2 實驗動物飲用水機水與高壓滅菌水細菌總數(shù)對比觀察Tab.2 Observation of the experimental animals drinking water and autoclave machine water of total bacteria ratio

[1]楊履渭.微生物學及檢驗技術——水的衛(wèi)生細菌學檢驗[M].廣州:廣東人民出版社,1985:477-480.

[2]國標GB/T5750-5750.13-2006生活飲用水標準檢驗方法[S].北京:中國標準出版社,2006.

[3]雷培琪,曾曉蘭,夏介英.實驗動物飲用純水機制無菌水的效果觀察[J].實驗動物科學,2009,26(1):63-64.

[4]趙明海,張瀟,譚德講,等.實驗動物飲用水質(zhì)量控制及處理方式的一些探討[J].實驗動物科學,2008,25(1):58-63.