骨髓鐵染色三種復(fù)染劑的方法學(xué)比較

張姝 劉詠酶 黃健

(貴陽(yáng)醫(yī)學(xué)院醫(yī)學(xué)檢驗(yàn)系臨床檢驗(yàn)教研室,貴州貴陽(yáng) 550004)

骨髓鐵染色三種復(fù)染劑的方法學(xué)比較

張姝 劉詠酶 黃健

(貴陽(yáng)醫(yī)學(xué)院醫(yī)學(xué)檢驗(yàn)系臨床檢驗(yàn)教研室,貴州貴陽(yáng) 550004)

目的探討不同的復(fù)染試劑對(duì)骨髓鐵染色效果的影響。方法每例患者收集三張骨髓涂片,分別用瑞氏、沙黃、核固紅三種復(fù)染劑進(jìn)行鐵染色,觀察骨髓小粒及幼紅細(xì)胞中鐵的分布情況。結(jié)果三種染色方法進(jìn)行比較,細(xì)胞外鐵的陽(yáng)性率相同,細(xì)胞內(nèi)鐵染色結(jié)果無(wú)顯著性差異。結(jié)論三種復(fù)染方法中推薦采用瑞氏復(fù)染,因其鐵顆粒較易觀察,且染色時(shí)間較短、操作簡(jiǎn)便。

復(fù)染試劑 鐵染色

骨髓鐵染色是評(píng)估鐵缺乏最實(shí)用的方法,臨床常被用作鑒別貧血類型。鐵染色對(duì)診斷缺鐵與非缺鐵、鐵負(fù)荷增加及鐵利用障礙等貧血具有重要價(jià)值[1]。臨床上常用核固紅作為鐵染色的復(fù)染試劑,而對(duì)其他復(fù)染試劑的相關(guān)報(bào)道較少見(jiàn)。為了探討不同的復(fù)染試劑對(duì)骨髓鐵染色效果的影響,現(xiàn)將我院2007年11～12月的30份骨髓標(biāo)本分別采用核固紅、瑞氏和沙黃三種不同的染液進(jìn)行復(fù)染結(jié)果報(bào)告如下。

1 對(duì)象與方法

1.1 對(duì)象 2007年11～12月在我院就診的30例血液病患者的骨髓標(biāo)本,男15例,女15例,年齡9～76歲,平均40.5歲。

1.2 方法

1.2.1 先將載玻片去鐵處理,分別采集患者骨髓液,制備三張骨髓涂片,用酸性的亞鐵氰化鉀染色,然后再用核固紅、瑞氏和沙黃三種不同的復(fù)染劑進(jìn)行復(fù)染,最后用顯微鏡觀察骨髓內(nèi)鐵和外鐵,將三種方法所得的結(jié)果分組記錄,診斷標(biāo)準(zhǔn)參考《臨床血液學(xué)和血液學(xué)檢驗(yàn)》[2]。

1.2.2 干燥骨髓涂片用甲醇固定10 min,待干;玻片上滴酸性亞鐵氰化鉀20滴,37℃染色30 min;用蒸餾水沖洗后分別用瑞氏染液、沙黃染液和核固紅染液復(fù)染;流水沖洗,待干,鏡檢。

1.3 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法 采用t檢驗(yàn)

2 結(jié)果

2.1 30例骨髓標(biāo)本分別用瑞氏、沙黃和核固紅三種復(fù)染試劑進(jìn)行復(fù)染后細(xì)胞外鐵的染色結(jié)果基本相同(表1)。

表1 三種復(fù)染方法細(xì)胞外鐵染色結(jié)果比較(例)

2.2 30例骨髓標(biāo)本細(xì)胞內(nèi)鐵陽(yáng)性率通過(guò)t檢驗(yàn)進(jìn)行比較,P值均＞0.05,故三種方法的細(xì)胞內(nèi)鐵染色結(jié)果差異均無(wú)顯著性意義(表2)

表2 三種復(fù)染方法細(xì)胞內(nèi)鐵染色結(jié)果比較

3 討論

骨髓內(nèi)外鐵染色是進(jìn)行貧血分類的常用組織化學(xué)染色方法,是評(píng)估鐵缺乏最實(shí)用的方法,儲(chǔ)存鐵(主要位于骨髓組織,又稱細(xì)胞外鐵)、幼紅細(xì)胞鐵(又稱細(xì)胞內(nèi)鐵),由于二者可通過(guò)染色識(shí)別,故被稱為可染鐵,臨床上常被用作鑒別貧血類型[3];缺鐵性貧血時(shí)骨髓外鐵陰性、內(nèi)鐵陽(yáng)性率低,而巨幼細(xì)胞性貧血時(shí)外鐵陽(yáng)性、內(nèi)鐵陽(yáng)性率高[4];鐵染色對(duì)貧血的鑒別診斷有非常重要的作用。因此,選擇比較好的染色方法,對(duì)結(jié)果觀察有一定的影響。

本組資料表明,使用三種復(fù)染液細(xì)胞外鐵結(jié)果相同,細(xì)胞內(nèi)鐵陽(yáng)性率差異無(wú)顯著意義。目前臨床上采用的復(fù)染液為核固紅,使用核固紅復(fù)染液在有些情況下鐵顆粒較小不易辨認(rèn),就會(huì)使陽(yáng)性率降低,并且核固紅復(fù)染所需時(shí)間長(zhǎng),在氣溫較低時(shí)需要更長(zhǎng)的時(shí)間,這樣就會(huì)耽誤診斷;本研究使用沙黃進(jìn)行復(fù)染,發(fā)現(xiàn)沙黃染液效果與核固紅大致相同,但沙黃復(fù)染的時(shí)間較難控制,復(fù)染一般只需2～3 min,需嚴(yán)格控制時(shí)間,否則時(shí)間稍長(zhǎng)就會(huì)導(dǎo)致細(xì)胞結(jié)構(gòu)不明顯,影響觀察結(jié)果。另外,使用瑞氏染液進(jìn)行復(fù)染,這種方法所需要的時(shí)間較短,操作簡(jiǎn)便,提高了工作效率,根據(jù)實(shí)驗(yàn)觀察,使用瑞氏染液可將細(xì)胞胞核、胞漿染得非常清晰,細(xì)胞很容易區(qū)別開(kāi),特別是在觀察細(xì)胞內(nèi)鐵時(shí),幼紅就非常明顯,藍(lán)色鐵顆粒容易辨認(rèn)。此外,臨床上如果使用鐵染色和常規(guī)瑞氏染色瑞氏復(fù)染,可以將兩者合二為一,這樣可大大提高工作效率。

[1]周建中.巨幼細(xì)胞貧血與再生障礙性貧血鐵染色特征[J].國(guó)際輸血及血液學(xué)雜志,2007,30(1):20-21.

[2]譚齊賢,張樹(shù)干.臨床血液學(xué)和血液檢驗(yàn)[M].第3版.北京:人民衛(wèi)生出版社,2006:58.

[3]張英波,萬(wàn)樹(shù)棟.鐵染色在鑒別幾種形態(tài)相似貧血中的應(yīng)用[J].實(shí)用醫(yī)技雜志,2007,14(6):718.

[4]郝影蘭,盧玉霞.骨髓鐵染色在疾病診斷中的應(yīng)用[J].中國(guó)臨床醫(yī)藥雜志,2005,4(3):66-67.

Complex reagent Stained Iron stain reagent

張姝(1980-),女,本科,碩士,助教,從事臨床檢驗(yàn)工作

R472,R446.1

B

1002-6975(2010)02-0164-02

2009-08-19)