高效液相色譜法測定骨炎靈片中甘草酸含量

王 雁，紀(jì) 紅，朱志杰

（通化金馬藥業(yè)集團(tuán)股份有限公司，吉林 通化 134001）

骨炎靈片收載于《中華人民共和國衛(wèi)生部藥品標(biāo)準(zhǔn)·中藥成方制劑（第五冊）》，由當(dāng)歸、黃芪、地黃、川芎、菟絲子等14味中藥組方，具有補(bǔ)養(yǎng)氣血、清熱解毒、消腫止痛的功效，用于治療骨髓炎、開放骨折感染及“虛人癰瘍”。原質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)未制訂含量測定項，為有效控制藥品質(zhì)量，筆者采用高效液相色譜（HPLC）法對方中甘草的甘草酸進(jìn)行了含量測定，報道如下。

1 儀器與試藥

島津LC-10ATvp型高效液相色譜儀；BS124S十萬分之一電子分析天平（北京賽多利斯儀器系統(tǒng)有限公司）；AE240型分析天平（梅特勒-托利多儀器＜上海＞有限公司）。骨炎靈片（通化金馬藥業(yè)集團(tuán)股份有限公司）。甘草酸對照品（中國藥品生物制品檢定所，批號為0731-9704，供含量測定用）；水為Milli-Q經(jīng)0.22 μm膜凈化的超純水，其他試劑均為分析純試劑。

2 方法與結(jié)果

2.1 色譜條件

色譜柱：DiamonsilC18柱（250mm ×4.6mm，5μm）；流動相：甲醇 -0.2 mol/L 乙酸銨溶液 -冰醋酸（67 ∶33 ∶1）；流速：1.0 mL/min；檢測波長：250 nm；柱溫：30℃。理論塔板數(shù)按甘草酸單銨鹽峰計應(yīng)不小于2 000。

2.2 溶液制備

取甘草酸單銨鹽對照品約10 mg，精密稱定，置50 mL量瓶中，用流動相溶解并稀釋至刻度，搖勻，作為對照品溶液（每1 mL含甘草酸單銨鹽對照品0.2 mg，折合甘草酸為 0.195 9 mg）。取樣品適量，除去包衣，精密稱定，研細(xì)，取約 3 g，精密稱定，置 50 mL量瓶中，加流動相約45 mL，超聲處理（功率 250 W，頻率 20 kHz）30 min，取出，放冷，加流動相至刻度，搖勻，濾過，作為供試品溶液[1]。取不含甘草的陰性樣品，按供試品溶液制備方法制備陰性對照品溶液。

2.3 方法學(xué)考察

圖1 高效液相色譜圖

陰性對照試驗：在上述色譜條件下，將2.2項下所制得的3種溶液進(jìn)樣測定，色譜圖見圖1?？梢姡谂c甘草酸對照品色譜峰相同位置上，供試品溶液有色譜峰出現(xiàn)，色譜峰與其相鄰峰能完全達(dá)到基線分離，陰性對照品溶液在甘草酸峰相應(yīng)位置上無干擾。

線性關(guān)系考察：精密吸取對照品溶液（0.202 mg/mL）2，4，8，12，20 μL進(jìn)樣，按擬訂的色譜條件測定，以色譜峰峰面積值為縱坐標(biāo)、甘草酸進(jìn)樣量為橫坐標(biāo)作圖，得回歸方程 Y=469 531.104 1 X-265.736 9，r=0.999 98（n=5）。結(jié)果表明甘草酸進(jìn)樣量在0.404～4.04 μg范圍內(nèi)與峰面積積分值線性關(guān)系良好。

精密度試驗：精密吸取對照品溶液10 μL，連續(xù)進(jìn)樣5次，測定甘草酸峰面積積分值。結(jié)果的 RSD=1.71%（n=5），表明儀器精密度良好。

穩(wěn)定性試驗：取同一供試品溶液，分別于 0，4，8，12，24 h時進(jìn)樣測定甘草酸峰面積。結(jié)果的 RSD為1.53%（n=5），表明供試品溶液在24 h內(nèi)穩(wěn)定。

加樣回收試驗：精密量取6份已知甘草酸含量的樣品1.5 g，分別精密加入對照品溶液適量，按供試品溶液制備方法制備溶液并測定，計算回收率。結(jié)果見表1。

表1 甘草酸加樣回收試驗結(jié)果（n=6）

2.4 樣品含量測定

根據(jù)上述色譜條件，依法測定樣品3批，每批測定2次。結(jié)果3批樣品中甘草酸的含量分別為1.53，1.52，1.55 mg/片（n=2）。

3 討論

分別考察了用甲醇超聲30 min和加流動相超聲30 min兩種提取方法，結(jié)果以前者測定結(jié)果的回收率高，且分離效果較好。取甘草酸銨對照品的甲醇-0.2 mol/L乙酸銨溶液-冰醋酸（67∶33∶1）溶液，經(jīng)紫外可見分光光度計掃描，并參考2005年版《中國藥典（一部）》甘草的含量測定[1]，規(guī)定測定波長為250 nm。

本試驗結(jié)果表明，HPLC法測定骨炎靈片中甘草酸的含量，方法簡便、靈敏、重現(xiàn)性好，適宜在生產(chǎn)中應(yīng)用。

[1]國家藥典委員會.中華人民共和國藥典（一部）[M].北京：化學(xué)工業(yè)出版社，2005：59.