小兒健脾開胃合劑中黃芪甲苷的含量測定

唐德智，莫 迎

（廣西壯族自治區(qū)南寧食品藥品檢驗(yàn)所，廣西 南寧 530001）

小兒健脾開胃合劑由黃芪、白術(shù)、山藥、大棗、山渣、蓮子、枸杞子等組方，具有益氣健脾功效，用于治療脾胃虛弱所致的小兒厭食癥、消化不良，并可促進(jìn)兒童對鈣的吸收。君藥黃芪中的黃芪甲苷為主要有效成分之一，原質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)采用薄層掃描法測定其含量，方法煩瑣，結(jié)果重現(xiàn)性差。本試驗(yàn)參考有關(guān)文獻(xiàn)[1-3]采用高效液相色譜-蒸發(fā)光散射檢測（HPLC-ELSD）法測定小兒健脾開胃合劑中黃芪甲苷的含量，為進(jìn)一步控制產(chǎn)品質(zhì)量提供了依據(jù)，報(bào)道如下。

1 儀器與試藥

LC-2010AHT型高效液相色譜儀（日本島津公司）；Softa Model 400型ELSD檢測器；WML色譜工作站（廣西威瑪龍色譜科技公司）；BP211D型電子天平（瑞士梅特勒）。黃芪甲苷對照品（中國藥

品生物制品檢定所，批號為0781-200109，供含量測定用）；甲醇、乙腈為色譜純，水為超純水，其余試劑均為分析純；小兒健脾開胃合劑（廣西歡寶藥業(yè)有限公司）。

2 方法與結(jié)果

2.1 色譜條件

色譜柱：Shim-pack VP-ODS柱（250 mm ×4.6 mm，5 μm）；流動相：乙腈 -水（34 ∶66）；流速：1.0 mL/min；柱溫：30℃；ELSD 參數(shù)：漂移管溫度60℃，霧化管溫度35℃，氣體流速為2.0 mL/min；進(jìn)樣量：20 μL。

2.2 溶液制備

取經(jīng)五氧化二磷減壓干燥24 h的黃芪甲苷對照品約15 mg，精密稱定，置25 mL量瓶中，用甲醇溶解并稀釋至刻度，搖勻，作為對照品貯備液。取樣品適量，混勻，精密量取20 mL，置分液漏斗中，用水飽和的正丁醇提取5次，每次20 mL，合并正丁醇液，用氨試液洗滌3次，每次20 mL，棄去氨液，正丁醇液再用正丁醇飽和的水洗滌3次，每次20 mL，棄去水液，正丁醇液置水浴上蒸干，殘?jiān)蛹状歼m量使溶解并轉(zhuǎn)移至5 mL量瓶中，加甲醇至刻度，搖勻，用微孔濾膜（0.45 μm）濾過，取續(xù)濾液，即得供試品溶液。按處方量稱取除黃芪外的其余藥材，按制備工藝制成缺黃芪的陰性樣品，取適量，按供試品溶液的制備方法制得陰性對照品溶液。

2.3 方法學(xué)考察

線性關(guān)系考察：分別精密吸取對照品貯備液 0.5，1，2，3，4，5 mL，置10 mL量瓶中，加甲醇稀釋成不同質(zhì)量濃度的對照品溶液，按上述色譜條件分別進(jìn)樣20 μL，測定峰面積，以對照品進(jìn)樣量的常用對數(shù)值為橫坐標(biāo)、峰面積積分值的常用對數(shù)值為縱坐標(biāo)進(jìn)行線性回歸，回歸方程為 Y=1.567 2 X+12.711，r=0.999 6（n=6）。結(jié)果表明，黃芪甲苷進(jìn)樣量在0.61～6.13 μg范圍內(nèi)與峰面積線性關(guān)系良好。

專屬性試驗(yàn)：分別精密吸取對照品溶液、供試品溶液、陰性對照溶液各20 μL，注入液相色譜儀測定。結(jié)果供試品溶液色譜中，均有與黃芪甲苷保留時(shí)間相同的色譜峰，且與相鄰雜質(zhì)峰能完全分離，陰性對照品溶液色譜圖中則無此峰，見圖1。

圖1 高效液相色譜圖

精密度試驗(yàn)：精密吸取同一對照品溶液，依法重復(fù)進(jìn)樣6次，測定并記錄黃芪甲苷峰面積。結(jié)果的 RSD為1.37%（n=6），表明儀器精密度良好。

穩(wěn)定性試驗(yàn)：取同一供試品溶液，分別于 0，1，2，4，6，8，12，14 h時(shí)依法進(jìn)樣測定。結(jié)果峰面積的 RSD為1.81%（n=8），表明供試品溶液在14 h內(nèi)穩(wěn)定。

重現(xiàn)性試驗(yàn)：取同一批（批號為20060702）樣品6份，每份精密量取20 mL，依法制備供試品溶液并測定。結(jié)果黃芪甲苷的平均含量為 0.045 mg/mL，RSD 為 1.79%（n=6）。

加樣回收試驗(yàn)：精密吸取已知含量的同一批（批號為20060702）樣品10 mL，共6份，分別精密加入對照品溶液（0.231 mg/mL）1.0，2.0，3.0 mL，按供試品溶液制備方法制備溶液并測定，用外標(biāo)兩點(diǎn)法對數(shù)方程計(jì)算含量。結(jié)果見表1。

表1 黃芪甲苷加樣回收試驗(yàn)結(jié)果（n=6）

2.4 樣品含量測定

取6批樣品依法制備供試品溶液，分別精密吸取對照品溶液和供試品溶液20 μL，注入液相色譜儀，測定，以外標(biāo)兩點(diǎn)法對數(shù)方程計(jì)算含量。結(jié)果批號為 20050201，20060201，20060701，20060702，20060801，20060901的樣品中黃芪甲苷含量分別為0.042，0.056，0.065，0.045，0.048，0.063 mg/mL（n=3）。

3 討論

蒸發(fā)光散射檢測器（ELSD）是近年來逐步應(yīng)用在色譜方面的通用型質(zhì)量檢測器，特別是對無紫外吸收或紫外末端吸收物質(zhì)具有較高的檢測靈敏度，且穩(wěn)定性和重現(xiàn)性良好，解決了紫外檢測器對于黃芪甲苷末端吸收靈敏度低、其他雜質(zhì)干擾大的問題，在黃芪及其制劑的含量測定中應(yīng)用日益增加。

采用HPLC-ELSD法測定小兒健脾開胃合劑中黃芪甲苷的含量，不受其他成分干擾，方法簡便、快速，分離度高，重現(xiàn)性好，可作為該制劑的質(zhì)量控制方法。

[1]國家藥典委員會.中華人民共和國藥典（一部）[M].北京：化學(xué)工業(yè)出版社，2005：212.

[2]顏曉航.黃芪及其制劑中黃芪甲苷含量測定方法研究進(jìn)展[J].安徽醫(yī)藥，2006，10（12）：953-954.

[3]吳玉強(qiáng)，羅 軼.HPLC-ELSD法測定復(fù)方扶芳藤合劑中黃芪甲苷[J].中草藥，2006，37（9）：1 353-1 354.