丙肝病毒核心抗原檢測(cè)對(duì)于丙型肝炎診斷的價(jià)值

許 方,李曉蘭,祝 琳

(1.大連醫(yī)科大學(xué)附屬二院檢驗(yàn)科,遼寧大連116027;2.大連醫(yī)科大學(xué)檢驗(yàn)醫(yī)學(xué)院)

據(jù)WHO統(tǒng)計(jì),自1989年丙型肝炎被發(fā)現(xiàn)以來(lái),估計(jì)全球約1.7億-2.0億人感染丙型肝炎病毒(HCV),感染率為3%,每年新發(fā)丙型肝炎病例約3.5萬(wàn)例,丙型肝炎在早期臨床表現(xiàn)上與乙型肝炎相比,癥狀較輕,但是其較乙型肝炎易早期出現(xiàn)肝硬化,導(dǎo)致肝癌,病死率較高[。1]由于丙肝病毒的高度變異性,疫苗的研究在短期內(nèi)難有突破性進(jìn)展。丙型肝炎的預(yù)后不良,目前尚無(wú)理想的特效藥物和治療措施。因此早期診斷是防止丙型肝炎病毒傳播的有效手段。本研究對(duì)90例丙肝感染者和391例高危人群同時(shí)測(cè)定血清中HCV-cAg,以此觀察丙型肝炎核心抗原檢測(cè)對(duì)于丙型肝炎診斷的價(jià)值。

1 材料與方法

1.1 檢測(cè)對(duì)象 標(biāo)本來(lái)自2008年4月-2009年2月大連醫(yī)科大學(xué)附屬第二醫(yī)院門診及病房患者。丙肝抗體陽(yáng)性組90例,病房HCV-Ab陰性ALT大于200U/L者263例及肝炎門診就診HCV-Ab陰性ALT大于70 U/L者128例,共計(jì)391例。分離血清并置于-70℃冰箱保存,確保標(biāo)本僅凍融一次。

1.2 檢測(cè)方法

1.2.1 HCV-cAg檢測(cè)采用湖南景達(dá)制藥有限公司提供的HCV-cAg酶聯(lián)免疫檢測(cè)試劑盒,具體操作嚴(yán)格按照試劑盒說(shuō)明書(shū)進(jìn)行。

1.2.2 HCV-Ab檢測(cè)采用北京科衛(wèi)臨床診斷試劑有限公司提供的HCV-Ab診斷試劑盒,具體操作嚴(yán)格按照試劑盒說(shuō)明書(shū)進(jìn)行。

1.2.3 HCV-RNA定量檢測(cè)采用深圳匹基生物工程有限公司提供的HCV核酸擴(kuò)增(PCR)熒光定量檢測(cè)試劑盒,利用美國(guó)AB公司7500實(shí)時(shí)PCR分析系統(tǒng)進(jìn)行定量分析。

2 結(jié)果

感染組HCV-cAg陽(yáng)性率為37.78%,高危人群組HCV-cAg陽(yáng)性率為0.51%(見(jiàn)表1)。高危人群組2例HCV-cAg陽(yáng)性,對(duì)其做HCV-RNA檢測(cè),1例為陰性,1例為陽(yáng)性,結(jié)果為2.3×105拷貝/ml。

表1 感染組、高危人群組HCV-cAg檢測(cè)結(jié)果

3 討論

丙型肝炎是由丙型肝炎病毒感染引起的一種重要的世界性傳染病[2],流行病學(xué)資料顯示,在肝癌發(fā)病率中等的地區(qū),如日本、意大利、西班牙等國(guó)家肝癌多由丙型肝炎所致,也有資料表明發(fā)達(dá)國(guó)家的慢性肝病主要與HCV感染有關(guān)[3]。丙型肝炎病毒主要是通過(guò)輸血及血液制品獲得,1989年Coo等用分子克隆技術(shù)發(fā)現(xiàn)了丙型肝炎病毒(HCV)。HCV是多變異的病毒,在同型各株間,甚至同一患者不同時(shí)期分離的克隆之間亦有差異,基因序列的差異,將導(dǎo)致編碼產(chǎn)物抗原型的不同[4]。由于輸血后丙型肝炎引起的醫(yī)療糾紛不斷,而且受血次數(shù)越多,感染病毒的幾率越高,如患者機(jī)體免疫力差,而輸入的血液中丙型肝炎病毒復(fù)制活躍,就會(huì)造成丙型肝炎感染[5]。由此可見(jiàn),盡早檢出和早期防治丙型肝炎感染刻不容緩。

目前,對(duì)于HCV感染的臨床診斷仍以ELISA法檢測(cè)HCV抗體為主,但抗體檢測(cè)存在著一些不足之處。其一,由于使用HCV基因重組抗原質(zhì)量及各抗原片段包被比例的不同,各廠家試劑間的靈敏度和特異性存在著一定差異。其二,HCV-Ab產(chǎn)生有一個(gè)明顯的窗口期,平均為70d,所以抗-HCV陰性并不能排除攜帶HCV并且具有傳染性的可能。其三,在抗-HCV ELISA法試劑盒中,由于酶標(biāo)抗體是廣譜抗人IgG抗體,對(duì)吸附在固相上的IgG抗體無(wú)篩選作用,這就降低了檢測(cè)的特異性。臨床使用中常出現(xiàn)灰區(qū)樣品檢測(cè)結(jié)果,導(dǎo)致結(jié)果難以判斷,并造成血液浪費(fèi)[7]。

此外,常用的HCV檢測(cè)方法還有PCR定性或定量檢測(cè),PCR檢測(cè)HCV-RNA靈敏度高,人在感染HCV 1-2周,血清中即可檢測(cè)到HCV-RNA,HCVRNA可以反映病毒的復(fù)制與傳染性,為病毒血癥的標(biāo)志,是診斷HCV的“金標(biāo)準(zhǔn)”。但HCV-RNA檢測(cè)影響因素也多,且所有器材必須高壓滅菌,需要專業(yè)的人員操作,需要精密的儀器設(shè)備、較高的實(shí)驗(yàn)技巧等,在一些基層醫(yī)院難以開(kāi)展,給技術(shù)的推廣造成了一定的局限性。

近些年關(guān)于HCV核心抗原(HCV-cAg)的檢測(cè)有越來(lái)越多的報(bào)道,HCV-cAg檢測(cè)可以將HCV檢測(cè)的窗口期縮短至15 d[8],通過(guò)大量實(shí)驗(yàn)研究表明,HCV核心抗原診斷試劑較HCV抗體檢測(cè)對(duì)HCV感染的陽(yáng)性檢測(cè)提前14-68 d,平均35.2d[3]。這就降低了HCV經(jīng)血傳播的風(fēng)險(xiǎn),具有可行性和較廣泛的應(yīng)用基礎(chǔ)。HCV核心抗原也是在HCV感染者體內(nèi)出現(xiàn)的早期感染標(biāo)志,幾乎與HCV RNA同時(shí)出現(xiàn)。據(jù)文獻(xiàn)報(bào)道,HCV核心抗原陽(yáng)性樣品中HCV-RNA陽(yáng)性率為 85%以上,兩者之間密切相關(guān)[9-12]。目前,HCV-cAg檢測(cè)大多以進(jìn)口試劑為主,國(guó)產(chǎn)試劑也在近幾年問(wèn)世,但在臨床推廣上仍做的遠(yuǎn)遠(yuǎn)不夠。HCV-cAg檢測(cè)作為一種新的檢測(cè)方法在一定程度上可以彌補(bǔ)抗體檢測(cè)方法的不足,前者具有高度敏感性及特異性,可以明顯縮短窗口期,有利于丙型肝炎的早期診斷,減少因輸血傳播丙型肝炎的發(fā)生率[13-14]。實(shí)驗(yàn)只需3小時(shí),操作簡(jiǎn)便,成本較低。

本實(shí)驗(yàn)所檢測(cè)的90例丙肝抗體陽(yáng)性的標(biāo)本中,其中有34例HCV-cAg陽(yáng)性,陽(yáng)性率為37.78%,低于覃桂芳等的報(bào)道42.50%[15],其原因在于兩者對(duì)于標(biāo)本的選取有所不同。本研究所選的90例血清樣本,來(lái)自僅是丙肝抗體檢測(cè)為陽(yáng)性而未經(jīng)臨床確診的患者,其中既有丙肝患者,也有既往感染者,也不排除由于藥物干擾以及其它自身免疫性疾病所產(chǎn)生的假陽(yáng)性結(jié)果,故陽(yáng)性率較低是可以解釋的。由此可見(jiàn),HCV-cAg對(duì)丙型肝炎早期診斷有較大的價(jià)值,但兩者的聯(lián)合檢測(cè)更有意義。

本文所選的391例轉(zhuǎn)氨酶升高但丙肝抗體陰性的標(biāo)本中,其中2例為HCV-cAg陽(yáng)性,陽(yáng)性率為0.51%,經(jīng)RT-RNA確證1例為陰性,1例為陽(yáng)性。有文獻(xiàn)報(bào)道高危人群的陽(yáng)性率為0.55%[16],但是陽(yáng)性率無(wú)太大可比性,原因有二:其一,所選標(biāo)本例數(shù)不同,可能存在抽樣誤差。本研究標(biāo)本為391例,如能擴(kuò)大樣本量,相信實(shí)驗(yàn)結(jié)果將更具有科學(xué)性和客觀性。其二,高危人群組的確立標(biāo)準(zhǔn)不同,我們的標(biāo)準(zhǔn)是HCV-Ab陰性,ALT大于200 U/L的住院患者以及ALT大于70 U/L的肝炎門診就診患者,其中門診128例,住院263例,而住院患者多數(shù)已有明確診斷,為丙肝以外的其它疾病,導(dǎo)致ALT升高的原因也多種多樣,這與其他研究的高危人群并不相同。

391例HCV-Ab陰性標(biāo)本中,檢出HCV-cAg陽(yáng)性2例,經(jīng)HCV-RNA確證 1例為陽(yáng)性。表明僅用HCV-Ab檢測(cè)的確存在漏診的風(fēng)險(xiǎn),尤其是對(duì)手術(shù)前丙肝病毒篩查的病例,它涉及到術(shù)中感染責(zé)任和用血安全等問(wèn)題,丙肝核心抗原檢測(cè)在一定程度上降低了這些風(fēng)險(xiǎn)。丙型肝炎患者在感染丙肝病毒后1-4周內(nèi)血清HCV-RNA轉(zhuǎn)陽(yáng),同時(shí)HCV-cAg出現(xiàn),隨后ALT增高和HCV抗體轉(zhuǎn)陽(yáng)[17]。故丙肝抗體檢測(cè)在丙肝病毒感染的急性期檢出率低,部分病例可出現(xiàn)假陰性,我們認(rèn)為,HCV-Ab、HCV-cAg的共同檢測(cè)既可以防止窗口期漏檢又可以排除一些其它疾病的干擾,在一定程度上降低丙型肝炎診斷假陽(yáng)性率,可以提高丙型肝炎檢測(cè)的準(zhǔn)確性,而且不需要特殊的儀器及試劑,有助于丙型肝炎的篩查以及臨床上的病情判斷。

在高危人群組中,有 1例HCV-cAg陽(yáng)性,但HCV-RNA陰性的標(biāo)本,說(shuō)明了核心抗原與 HCVRNA的檢測(cè)并不是100%完全相關(guān)的,原因可能為該患者為丙肝早期,RNA＜103個(gè)拷貝或者由于污染、保存條件不完善等原因引起的RNA樣本有降解,另一個(gè)原因可能由于現(xiàn)有的核心抗原檢測(cè)試劑盒還不夠完善,導(dǎo)致假陽(yáng)性的存在,由于該患者為門診患者,所以沒(méi)有進(jìn)一步追訪的條件,未能確認(rèn)。

綜上所述,HCV核心抗原檢測(cè)窗口期短,敏感性好,特異性高,操作簡(jiǎn)便、快速,不需要特殊的儀器,費(fèi)用低廉,能達(dá)到早期診斷的目的,因此,協(xié)同檢測(cè)HCV-Ab、HCV-cAg適合大規(guī)模篩查和大多數(shù)地區(qū)醫(yī)院的常規(guī)檢查。

[1]謝 立,黃德莊,時(shí)洪波,等.用酶聯(lián)免疫夾心法測(cè)定肝炎患者血清丙型肝炎抗原[J].中華檢驗(yàn)醫(yī)學(xué)雜志,2005,28(11):1159.

[2]張賀秋.丙型肝炎病毒核心抗原檢測(cè)技術(shù)國(guó)內(nèi)外臨床研究應(yīng)用情況[J].丙型肝炎病毒核心抗原檢測(cè)技術(shù)研究與應(yīng)用論文匯編,1.

[3]關(guān) 偉,高 艷,周云芳.2492例住院患者丙肝抗體檢測(cè)與分析[J].哈爾濱醫(yī)藥,2005,25(4):14.

[4]周桂蘭,等.病毒性肝炎防治新進(jìn)展[M].中國(guó)古籍出版社,2005:173.

[5]冀淑梅.33例受血漿制品者檢測(cè)丙肝抗體分析[J].中華臨床醫(yī)學(xué)研究雜志,2005,11(21):3164.

[6]李 剛.丙型肝炎的實(shí)驗(yàn)室診斷與治療策略[J].廣東醫(yī)學(xué),2002,23:674.

[7]王國(guó)華,張賀秋,李少波,等.雙抗原夾心與間接酶聯(lián)免疫法檢測(cè)抗-HCV雙比研究[J].中國(guó)醫(yī)學(xué)檢驗(yàn)雜志,2005,6(4):318.

[8]Lee S R,Petenson,J,Niven P,et al.Efficacy of a hepatitis C virus core antigen enzyine linked immuoeirtrent essay for the identifieation of window phas blood donatisures[J].Jvox Sanguints,2001,(96):1282.

[9]Nubling C M,Unger G,Chudy M,et al.Sensitivity of HCV core antigen andHCV RNA detection in the early infection phase[J].Transfusion,2002,48(8):1037.

[10]Widell A,Molnegren V,Pieksma F,et al.Detection of hepatitis C core antigen in the serological window phase[J].TransfusMed,2002,12(2):107.

[11]Sanz C,Tassies D,Costa J,et al.The first case of HAV infection deteced before seroconversion in blood donors tested by HCV core antigen ELISA[J].Transfusion,2002,42:505.

[12]Syria Laperche,Nadine Le Marrec,Nicoie Simon,et al.A new HCV core antigen assay based on disassociation of immune complexes:an afternative to molecular biology in the diagnosis of early HCV infection[J].Transfusion Complication,2003,43:958.

[13]范慶杰.丙型肝炎病毒核心抗原檢測(cè)的臨床應(yīng)用與分析[J].中國(guó)實(shí)驗(yàn)診斷學(xué),2006,10(12):1059.

[14]王兆輝.丙型肝炎病毒核心抗原檢測(cè)的臨床評(píng)價(jià)[J].中國(guó)社區(qū)醫(yī)師,2006,8(23):84.

[15]覃桂芳.153例丙型肝炎患者病毒核心抗原檢測(cè)及其臨床意義[J].中國(guó)現(xiàn)代醫(yī)生,2008,5(46)166.

[16]索風(fēng)霜,李萍燕,康熙雄.丙肝病毒核心抗原與丙肝病毒抗體檢測(cè)的比較研究[J].中國(guó)衛(wèi)生檢驗(yàn)雜志,2007,17(4):624.

[17]中華醫(yī)學(xué)會(huì)傳染病學(xué)會(huì).病毒性肝炎防治方案[J].中國(guó)傳染病雜志,2001,19:56.