302例急性白血病患者骨髓細(xì)胞形態(tài)學(xué)診斷結(jié)果分析

趙早云

(湖南中醫(yī)藥大學(xué)第一附屬醫(yī)院血液科,湖南長(zhǎng)沙410007)

急性白血病(AL)分型及亞型的確定與治療及預(yù)后判斷有密切關(guān)系。目前采用FAB(骨髓細(xì)胞形態(tài)學(xué))和WHO兩種分型方法。收集302例在我院就診急性白血病初診病人,用兩種不同方法對(duì)比,旨在探討骨髓細(xì)胞形態(tài)學(xué)與臨床診斷的關(guān)聯(lián)性。

1 材料與方法

1.1 病例資料 我院血液科門診和住院的急性白血病初診病例共302例。男200例,女102例,最小年齡2個(gè)月,最大年齡88歲,平均年齡44.1歲。

1.2 方法

1.2.1 形態(tài)學(xué)檢查 將骨髓及血涂片用瑞氏染色分類計(jì)數(shù),并作過氧化物酶,非特異性酯酶+氟化物抑制試驗(yàn)及糖原染色等細(xì)胞化學(xué)染色,按FAB標(biāo)準(zhǔn)確定AL類型。

1.2.2 免疫學(xué)檢查 治療前取肝素抗凝骨髓液2-3 ml,常規(guī)分離單個(gè)核細(xì)胞,采用活細(xì)胞間接熒光標(biāo)記,流式細(xì)胞儀(Epics XL型,Coulter公司)檢測(cè)。所用單抗包括T系的CD2、CD3、CD7;B系的CD10、CDI9 、CD22;髓系的 CD13、CDl4、CD33;巨核系的CD42b、CD66以及干(祖)系的CD34等,所有單抗均購自法國(guó)hnmunotech公司。陽性標(biāo)準(zhǔn):淋系及髓系抗原陽性細(xì)胞＞20%,CD34＞10%。

1.2.3 染色體檢查 治療前取肝素抗凝骨髓液5 ml,用直接法、24 h培養(yǎng)法和同步法制備染色體,采用R帶或G帶技術(shù)顯帶。根據(jù)ISCN1995年《人類細(xì)胞遺傳學(xué)國(guó)際命名體制規(guī)定描述核型。

1.2.4 分子生物學(xué)檢查 分別于治療前和緩解期取肝素抗凝骨髓液2-3 ml,分離單個(gè)核細(xì)胞,采用套式逆轉(zhuǎn)錄聚合酶連反應(yīng)(RT-PCR)方法AML1融合基因和BCR-ABL融合基因轉(zhuǎn)錄本,所用引物分別見文獻(xiàn)[1,2]。

2 結(jié)果

2.1 骨髓細(xì)胞形態(tài)學(xué)及化學(xué)染色 302例初始急性白血病患者通過形態(tài)學(xué)而確診者285例,診斷確診率達(dá) 94.37%,有8例骨髓原始細(xì)胞占21%-29%,根據(jù)WHO分型標(biāo)準(zhǔn),將原FAB分型的MDSRAEB-T劃入急性髓性白血病(AML)范籌,9例形態(tài)學(xué)難以分型的白血病。形態(tài)學(xué)結(jié)合免疫學(xué)表型和細(xì)胞遺傳學(xué)、分子生物學(xué)特征得以最終確定,結(jié)果見表1。

表1 實(shí)驗(yàn)室檢查結(jié)果

2.2 免疫學(xué)結(jié)果 在9例形態(tài)學(xué)誤診的急性白血病中,有5例FAB診斷為ALL白血病中,有3例FAB誤診為ALL的白血病患者,細(xì)胞化學(xué)染色為陰性,經(jīng)單抗檢查,有髓系和(或)淋系抗原表達(dá),而確診為Mo,雜合型白血病。1例FAB誤診為M5a經(jīng)過單抗檢查,僅有淋系相關(guān)抗原CD2,CD3,CD7表達(dá)而確診為L(zhǎng)2,1例細(xì)胞化學(xué)染色為陽性,經(jīng)形態(tài)學(xué)診斷為M1,經(jīng)過單抗檢查,髓系,淋系積分大于2,定為雜合型白血病。

2.3 A遺傳學(xué)結(jié)果 在9例FAB分型急性白血病中,3例染色體核型正常,6例能檢出特征性的染色體核型。1例FAB分型誤診為L(zhǎng)2,單抗檢查CD33,CD34,染色體檢查t(+4)為最終確診M4,值得一提的是樣本6,樣本8,細(xì)胞形態(tài)學(xué)相似,免疫表型難以確認(rèn)的M3b,M2b通過染色體核型與融臺(tái)基因的檢查得以確診。通過臨床治療均取得了滿意效果。

3 討論

閱片者豐富的經(jīng)驗(yàn),配合細(xì)胞化學(xué)染色對(duì)急性白血病的診斷準(zhǔn)確率是很高的,在本組302例急性白血病病例中,有8例骨髓原始細(xì)胞占21%-29%,根據(jù)WHO分型標(biāo)準(zhǔn),將原FAB分型的MDS-RAEB-T劃入急性髓性白血病(AML)范籌,285例經(jīng)FAB分型而得到確診,準(zhǔn)確率達(dá)到94.37%。與國(guó)內(nèi)陳玉蘭的研究相似[3],由于FAB分型判斷急性淋巴細(xì)胞白血病及急性非淋巴細(xì)胞性白血病主要通過過氧化物酶染色POX而定。因此對(duì)于具有高度異質(zhì)和多系列白血病細(xì)胞,依細(xì)胞表面免疫學(xué)標(biāo)志,進(jìn)行免疫學(xué)分型有良好的客觀性和可重復(fù)性,可大大提高診斷率[4],本組6例均為FAB診斷后又經(jīng)免疫學(xué)分型得到或糾正或確診。特別對(duì)于ALL-L2 POX為陰性的白血病患者,免疫學(xué)表型的檢測(cè)尤顯重要,不僅可以判斷白血病細(xì)胞的來源,還可以判斷白血病所處的階段,對(duì)臨床的診斷治療起著重要的作用。對(duì)于形態(tài)學(xué)、免疫學(xué)難以確定的M3b與M2b的誤診患者,結(jié)合染色后核型與融合基因均能最后確診。

綜上所述,細(xì)胞形態(tài)學(xué)檢查仍然是白血病診斷最直接、最經(jīng)濟(jì)的一種重要手段,結(jié)合免疫學(xué)檢查可大大提高診斷率,最后再結(jié)合遺傳學(xué)檢查可以使診斷達(dá)100%。

[1]周劍彪,何 軍,薛永權(quán),等.伴t(12;2I)易位的兒童急性淋巴細(xì)胞白血病的臨床和實(shí)驗(yàn)研究[J].中華兒科雜志,2000,38:725.

[2]云 升.王升五.PCR技術(shù)檢測(cè)白血病BCR-ABL融臺(tái)基因的mRNA序列.見:林萬晴.主編PCR技術(shù)操作和應(yīng)用指南[J].第1版.北京:人民軍醫(yī)出版社,1995,432-433.

[3]陳玉蘭,楊鳳華.急性白血病FAB分類109例分析[J].中國(guó)誤診學(xué)雜志,2007,7(24):5856.

[4]6 Lolof LO,Foa R.Diagnostic and prognostic advances ia the immunophenotypic and genetic characterization of acute Leukemia[J].Eur JHaematol,1995,59t1.