血管內(nèi)皮生長因子C和survivin表達(dá)與賁門癌進(jìn)展及預(yù)后的關(guān)系

于金海,徐越超,袁 蒙,陳 巖,何 亮,王大廣,所 劍

(吉林大學(xué)第一醫(yī)院胃結(jié)直腸外科,吉林長春130021)

胃癌是我國高發(fā)的惡性腫瘤之一,其主要的轉(zhuǎn)移途徑是經(jīng)淋巴道轉(zhuǎn)移,賁門癌是胃癌的一個特殊類型,其發(fā)病率逐年增高[1],因此,探討與賁門癌進(jìn)展及預(yù)后相關(guān)的因素對指導(dǎo)其綜合治療有重要意義。研究表明[2],血管內(nèi)皮生長因子-C(vascular endothelial growth factor-C,VEGF-C)可以特異性地促進(jìn)淋巴管生長,在腫瘤淋巴道轉(zhuǎn)移中起重要作用;腫瘤細(xì)胞通過逃避細(xì)胞凋亡而迅速增殖,生長素(survivin)是家族成員,它通過抑制凋亡因子caspase-3和caspase-7的活性而抑制細(xì)胞凋亡,促進(jìn)細(xì)胞增殖。本研究旨在探討VEGF-C、survivin及相關(guān)臨床病理指標(biāo)與賁門癌進(jìn)展及預(yù)后的關(guān)系。

1 資料與方法

1.1 臨床資料

2000年1月至2005年12月間,我院普通外科手術(shù)切除賁門癌蠟塊標(biāo)本64例。男38例,女26例;年齡36-79(平均67)歲;全部為腺癌。所有患者均行根治性手術(shù);中位隨訪時間為45.5(4-90)個月。

1.2 主要試劑和方法

1.2.1 試劑 鼠抗人VEGF-C抗體和兔抗人survivin抗體。免疫組化染色采用SABC法。試劑均為美國Zymed公司進(jìn)口產(chǎn)品,購自武漢博士德生物工程有限公司。

1.2.2 染色評價 (1)VEGF-C表達(dá):胞漿內(nèi)或胞膜上染成棕黃色顆粒的細(xì)胞為陽性細(xì)胞,在400倍光學(xué)顯微鏡下至少計數(shù)200個腫瘤細(xì)胞,如標(biāo)本的陽性腫瘤細(xì)胞數(shù)超過10%,則此標(biāo)本定為VEGF-C陽性,如少于或等于10%則定為VEGF-C陰性;見圖1。(2)survivin表達(dá):胞漿內(nèi)或胞膜上染成棕黃色顆粒的細(xì)胞為陽性細(xì)胞,在400倍光學(xué)顯微鏡下至少計數(shù)200個腫瘤細(xì)胞,如標(biāo)本的陽性腫瘤細(xì)胞數(shù)超過10%,則此標(biāo)本定為VEGF-C陽性,如少于或等于10%則定為VEGF-C陰性;見圖2。

1.3 統(tǒng)計學(xué)分析 χ2檢驗,分析賁門癌VEGF-C、survivin表達(dá)與臨床病理指標(biāo)的關(guān)系。t檢驗和方差分析(ANOVA)檢驗VEGF-C表達(dá)與和LMVD之間的相關(guān)關(guān)系。Kaplan-Meier法評估術(shù)后生存率,繪制生存曲線,采用log-rank檢驗分析兩生存曲線之間的關(guān)系。統(tǒng)計學(xué)軟件采用SPSS10.0。

2 結(jié)果

2.1 VEGF-C及survivin表達(dá)情況,VEGF-C表達(dá)和survivin表達(dá)的關(guān)系

VEGF-C陽必表達(dá)率為60.9%(39/64);survivin陽必表達(dá)率為54.7%(35/64)。VEGF-C表達(dá)陽性組survivin陽性表達(dá)率84.6%,高于survivin表達(dá)陰性組的8.0%。VEGF-C與survivin呈正相關(guān)性(P=0.003 05)。兩者表達(dá)分布關(guān)系見表1。

表1 64例賁門癌患者VEGF-C及survivin表達(dá)分布關(guān)系

2.2 VEGF-C和survivin與賁門癌臨床病理指標(biāo)之間的關(guān)系

VEGF-C和survivin與賁門癌臨床病理指標(biāo)之間的關(guān)系見表2。表2顯示,VEGF-C的表達(dá)與腫瘤分化程度、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移、T分期相關(guān);survivin的表達(dá)與腫瘤分化程度、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移、T分期相關(guān)。

表2 VEGF-C和survivin與64例賁門癌患者臨床病理指標(biāo)之前的關(guān)系

2.3 VEGF-C、survivin與賁門癌的預(yù)后關(guān)系

25例VEGF-C陰性患者3年或5年生存率分別為70%和64%,39例VEGF-C陽性患者則分別為48%和35%;VEGF-C陽性組患者的生存率明顯低于陰性組患者(P=0.0213)。29例survivin陰性組患者的3年和5年生存率為73%和61%,35例survivin陽性組患者則分別為51%和34%;survivin陽性組患者的生存率明顯低于survivin陰性組患者(P=0.002 26)。見圖3。

圖1 VEGF-C在賁門癌中的表達(dá)

圖2 survivin在賁門癌中的表達(dá)

圖3 不同VEGF-C和survivin表達(dá)的賁門癌患者生存曲線

3 討論

胃癌是消化道常見的惡性腫瘤之一,其中賁門癌占16%[3],由于其解剖位置特別,其生物學(xué)特性及轉(zhuǎn)移亦較特殊,淋巴道轉(zhuǎn)移仍然是其主要轉(zhuǎn)移途徑。研究表明,血管內(nèi)皮生長因子-C(vascular endothelial growth factor-C,VEGF-C),有特異性促進(jìn)淋巴管生成的作用,近年越來越引起人們的關(guān)注。Jeltsch等在過度表達(dá)VEGF-C的轉(zhuǎn)基因鼠的真皮層有大量擴張的淋巴管[4]。Skobe等[5]將轉(zhuǎn)染VEGF-C基因的MDA-MB-453/GFP人乳腺癌細(xì)胞注射于裸鼠腳墊,發(fā)現(xiàn)瘤內(nèi)新生淋巴管明顯增加,分化良好且與對照組有明顯差異,瘤內(nèi)淋巴管與瘤周相連。Ohta等[6]發(fā)現(xiàn)在惡性間皮瘤中瘤細(xì)胞VECF-C的表達(dá)與瘤內(nèi)及瘤周淋巴管數(shù)量明顯相關(guān)。Yonemura等[7]用RT-PCR和免疫組化法研究了胃癌中VEGF-C表達(dá),發(fā)現(xiàn)多數(shù)侵入淋巴管的腫瘤細(xì)胞VEGF-C表達(dá)陽性,VEGF-C表達(dá)與淋巴結(jié)狀態(tài),淋巴管侵犯、腫瘤浸潤方式明顯相關(guān)。用原位雜交法研究一組黑色素瘤VEGF-C mRNA表達(dá),發(fā)現(xiàn)淋巴結(jié)陽性組VEGF-C mRNA表達(dá)明顯高于淋巴結(jié)陰性組[6]。在一組前列腺癌和一組食管鱗癌的研究中也有類似發(fā)現(xiàn)[8,9]。我們研究發(fā)現(xiàn),賁門癌VECF-C表達(dá)率為60.9%,VECF-C陽性組淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移率明顯高于VECF-C陰性組,提示VEGF-C促進(jìn)了腫瘤淋巴系統(tǒng)播散。這與國外學(xué)者研究結(jié)論是一致的。

凋亡抑制蛋白家族(inhibitor of apoptosis,IAPs)是一類高度保守的抗凋亡基因表達(dá)產(chǎn)物,廣泛存在于各種惡性腫瘤細(xì)胞中,對凋亡調(diào)控發(fā)揮著重要的作用。survivin是凋亡抑制蛋白家族的新成員,基因全長15 kb,有4個外顯子和3個內(nèi)含子,定位于人染色體17q25。此外,survivin的表達(dá)還具有細(xì)胞周期依賴性,特異性地在G2/M期表達(dá),通過與細(xì)胞有絲分裂紡錘體的微管結(jié)合,參與對細(xì)胞基因轉(zhuǎn)錄調(diào)節(jié)。survivin表達(dá)于胚胎組織,而不見于終末分化的成熟組織,但在人類大多數(shù)的腫瘤組織和轉(zhuǎn)化細(xì)胞中大量表達(dá)。Kawasaki[10]等報道survivin與胃癌的發(fā)生發(fā)展有關(guān)。他們發(fā)現(xiàn)survivin在胃癌的陽性表達(dá)率為53.2%,癌旁及正常組織無表達(dá)。而Leung,Krieg[11]等研究發(fā)現(xiàn)survivin的表達(dá)水平與胃腺癌的病理演變有關(guān)。

survivin與VEGF關(guān)系密切,VEGF在血管生成中的抗凋亡作用可以通過誘導(dǎo)survivin的表達(dá)來實現(xiàn)[12]。而survivin的上調(diào)是內(nèi)皮細(xì)胞在血管生成過程中維持生存能力的必要條件。survivin通過促進(jìn)血管內(nèi)皮細(xì)胞增殖和三維毛細(xì)血管網(wǎng)的形成,參與腫瘤新生血管的形成過程。VEGF促進(jìn)survivin的表達(dá)而同時高表達(dá)的survivin又維持和保護(hù)了VEGF-C的促內(nèi)皮細(xì)胞功能,從而促進(jìn)了腫瘤血管生成和浸潤轉(zhuǎn)移。survivin是血管形成中生長因子誘導(dǎo)的保護(hù)性基因,維持血管內(nèi)皮細(xì)胞的正常增殖。survivin不僅可以抑制腫瘤細(xì)胞的凋亡,而且可以抑制腫瘤血管內(nèi)皮細(xì)胞凋亡。促血管因子VEGF在腫瘤細(xì)胞中高表達(dá),不僅直接促進(jìn)血管形成,還可以誘導(dǎo)survivin表達(dá),產(chǎn)生抗凋亡作用,引起血管過度增生。因此,二者共同作用,促進(jìn)血管形成并有可能引起腫瘤轉(zhuǎn)移。

本研究中64例賁門癌VEGF-C陽性表達(dá)為39例,這些病例中survivin陽性33例,且二者之間有正相關(guān)性。進(jìn)一步研究發(fā)現(xiàn),二者與賁門癌及淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移均有關(guān),在淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移的病例中,二者均是高表達(dá),從上述情況中可以推測,.survivin與VEGF-C關(guān)系密切,是否存在survivin表達(dá),產(chǎn)生抗凋亡作用,同時引起淋巴管過度增生,二者共同作用,促進(jìn)賁門癌通過淋巴道轉(zhuǎn)移,這尚需要進(jìn)一步研究證實。

[1]Buchwald H,Avidor Y,Braunwald E et al.Bariatric surgery:a systematic review and meta-analysis[J].JAMA,2004,292(14):1724.

[2]Ling S,hu Y.Expression of VEGF-Cin rat cornea after alkali injury[J].J Huazhong Univ Sci Technolog Med Sci,2004,24(5):483.

[3]Brennan MF.Current status of surgery for gastric cancer:a review[J].Gastric Camcer,2005,8(2):64.

[4]Jeltsch M,Kaipainen A Joukov V,et al.Hyperplasia of lymphatic vessels in VEGF-C transgenic mice[J].Science,1997,276(5317):1423.

[5]Skobe M.Induction of tumor lymphangiogenesis by VEGF-C promotes breast cancer metastasis[J].Nat Med,2001,7(2):192.

[6]Ohta Y.VEGF and VEGF type C play an important role in angiogenesis and lymphangiogenesis in human malignant mesothelioma tumours[J].Br J Cancer,1999,8191):54.

[7]Yonemura Y,Endo Y,Fujita H,et al.Role of vascular endothelial Growth factor C expression in the development of lymph node metastasis in gastric cancer[J].Clin Cancer Res,1999,5:1823.

[8]Kimura Y.Watanabe M,Ohga T,et al.Vascular endothelial growth factor C expression correlates with lymphatic involvement and poor prognosis in patients with esophageal squamous cell carcinoma[J].Oncol Rep,2003,10:1747.

[9]Tsurusaki T,Kands S,Sakai H,et al.Vascular endothelial growth factor-C expression in human prostatic carcinoma and its relationship to lymph node metastasis[J].Br J Cancer,1999,80:309.

[10]Kawasaki J,Aaltieri DC,Lu CD,et al Inhibitor of apoptosis by survivin predicts shorter rates on colorectal cancer[J].Cancer Res,1998,58:5071.

[11]Yu J,Leung W K,Ebert MP,et al Increased expression of survivin on gastric cancer patients and in first degree relatives[J].Br J Cancer,2002,87(1):91.

[12]Oconnor D S,ChechnerJS,Adida C,et al Control of apoptosis during angiogenesis by survivin expression in endothelial cells[J].Am J Pathol,2000,156(2):393.