膜細胞骨架連接蛋白和黏附分子CD44v6在乳腺癌組織中的表達及其意義

王如美,時志民 ,郝玉栓

(河北工程大學醫(yī)學院,河北邯鄲056004)

膜細胞骨架連接蛋白(Ezrin)是ERM(ezrin-radixin-moesin)蛋白家族成員之一,對細胞的黏附、運動等起重要作用。近年來有關Ezrin對腫瘤細胞黏附分子的調節(jié),及其在腫瘤發(fā)生、發(fā)展及浸潤轉移中的作用的研究漸被重視[1]。分化抗原(cluster of differentiation,CD)CD44家族是單鏈細胞表面I類跨膜糖蛋白,屬于黏附分子。根據基因表達模式分為標準型CD44(CD44s)和變異型CD44(CD44v),CD44v6作為CD44v主要成員之一,在多種人體惡性腫瘤的發(fā)生和浸潤轉移過程中發(fā)揮重要作用[2]。研究表明Ezrin與CD44能形成復合體影響惡性腫瘤浸潤轉移[3]。本研究應用免疫組化 SP法測定 Ezrin、CD44v6在乳腺癌組織中的表達,探討Ezrin、CD44v6與乳腺癌發(fā)生、發(fā)展、浸潤轉移的關系及二者的相關性。

1 資料與方法

1.1 一般資料 選取2007年1月-2008年12月在河北工程大學醫(yī)學院病理教研室行病理活檢確診的56例乳腺癌患者為研究對象?；颊呔鶠榕?年齡28-75歲,中位年齡52歲,患者術前均未進行任何治療。手術標本均統(tǒng)一重新切片HE染色確定病理診斷,臨床病理資料齊全。56例乳腺癌患者中有17例伴腋淋巴結和鎖骨上淋巴結轉移;其中浸潤性導管癌、導管內癌33例,浸潤性小葉癌23例。參照Elston等[4]方法,并進行改良,對56例乳腺癌進行分級:Ⅰ級 15例,Ⅱ級20例,Ⅲ級 21例。按照《AJCC腫瘤分期手冊》(第六版)TNM分期:Ⅰ期17例,Ⅱ期24例,Ⅲ+Ⅳ期15例。標本常規(guī)取材,10%甲醛固定,石蠟包埋切片(切片厚4 μ m),常規(guī)HE染色。同時取30例患者的癌旁正常組織作為對照組。

1.2 方法 兔抗人Ezrin單克隆抗體(cell signaling產品,編號:3142);鼠抗人CD44v6單克隆抗體(編號:ZM-0052),即用型SP試劑盒購于北京中杉金橋生物技術有限公司。免疫組化染色采用SP法。微波抗原修復,免疫組化染色過程按試劑盒說明進行操作,蘇木素襯染。

1.3 結果判定 用已知陽性的胃癌組織作為陽性對照,PBS代替一抗作為陰性對照。光鏡下觀察,Ezrin、CD44v6陽性表達定位于細胞膜和細胞質,呈棕黃色顆粒(見圖1、2)。計數1 000個腫瘤細胞,陽性細胞數＜5%為(-),5%-25%為(+),26%-50%為(++),＞50%為(+++)。

圖1 乳腺浸潤性導管癌Ezrin的表達情況(SP×400)

圖2 乳腺浸潤性導管癌CD44v6的表達情況(SP×400)

1.4 統(tǒng)計學方法 采用SPSS16.0統(tǒng)計軟件對實驗數據進行統(tǒng)計學分析,計數資料的比較采用χ2檢驗及Fisher確切概率法,等級資料的相關性采用Spearman等級相關分析,以P＜0.05為差異有統(tǒng)計學意義。

2 結果

2.1 Ezrin和CD44v6在乳腺癌組織和正常組織中的表達 Ezrin、CD44v6在乳腺癌組織中的陽性表達率分別為 62.50%(35/56)和76.79%(43/56),均高于在正常乳腺組織中的陽性表達率16.67%(5/30)和23.33%(7/30),差別均有統(tǒng)計學意義(χ2值分別為16.495和22.933,P＜0.05)。

2.2 Ezrin和CD44v6的表達與臨床病理指標的關系 Ezrin、CD44v6的表達與腫瘤的大小、組織學分級、TNM分期和淋巴結轉移有關(見表1)。

表1 不同病理情況下Ezrin和CD44v6的表達情況

2.3 乳腺癌組織中Ezrin和CD44v6表達的關系Spearman等級相關性分析結果表明,Ezrin與CD44v6的表達呈正相關(r=2.839,P＜0.05,見表2)。

表2 乳腺癌組織中Ezrin和CD44v6表達的關系

3 討論

Ezrin為膜細胞骨架連接蛋白,在生理狀態(tài)下,Ezrin 是將膜蛋白(如 CD44、c-Met、E-Cadherin 、ICAM-1和ICAM-2等)與肌動蛋白細胞骨架連接起來的橋接蛋白,這種連接不僅是結構上的,也是功能上的[5]。通過介導膜與細胞骨架的連接,Ezrin在細胞形態(tài)改變、運動、黏附及信號轉導等方面發(fā)揮重要作用。Ezrin的異常表達將導致細胞生物學行為的改變。Shen等[6]在對食管癌進行研究時發(fā)現,能夠發(fā)生遠處轉移的SHEEMT細胞系中Ezrin表達顯著高于不發(fā)生遠處轉移的SHEEIMM細胞系。在乳腺癌的研究中,把過表達野生型Ezrin的鼠乳腺腫瘤細胞AC2M2接種到小鼠乳腺脂肪墊中,這些小鼠均發(fā)生肺部轉移[7]。本研究結果顯示,Ezrin在乳腺癌組織中的表達(62.50%)顯著高于在正常乳腺組織中的表達(16.67%),提示Ezrin可能參與了乳腺癌的發(fā)生、發(fā)展過程。本研究還顯示,Ezrin高表達與腫瘤的大小、組織學分級、臨床TNM 分期、淋巴結轉移有關。

CD44是分布極為廣泛的一組細胞表面跨膜糖蛋白,參與細胞與細胞、細胞與間質之間的特異性粘接,CD44v6為其變異體。目前認為CD44v6主要參與瘤細胞與宿主基質的黏附,在癌細胞侵襲和轉移過程中起促進作用。CD44v6的過量表達與多種人體惡性腫瘤,如結腸癌、胃癌、乳腺癌等的發(fā)生、發(fā)展、侵襲和轉移密切相關[8-9]。本研究顯示CD44v6高表達與原發(fā)腫瘤的大小、組織學分級、臨床TNM分期等指標有關,與Ma等[9]的研究結果基本一致。Ezrin與CD44可以形成復合物,共同參與腫瘤的浸潤、轉移[10]。在細胞內Ezrin作為CD44v6的錨定分子,使其與細胞骨架連接起來,進而改變腫瘤細胞的運動能力,同時與細胞外基質中配體結合,導致腫瘤細胞的形態(tài)、游走性發(fā)生改變,為腫瘤細胞的遷移奠定基礎。本研究結果表明,乳腺癌組織中Ezrin與CD44v6的表達呈正相關。Ezrin與CD44v6的高表達能相互作用影響乳腺癌的浸潤、轉移,并通過CD44v6發(fā)揮作用。

本研究提示Ezrin、CD44高表達與乳腺癌的發(fā)生、發(fā)展及預后密切相關,因此我們認為聯合檢測Ezrin、CD44的表達在判斷乳腺癌的轉移、生物學行為等方面有重要臨床價值。

[1]Lamb RF,Roy C,Diefenbach TJ,et al.The TSC1 tumour suppressor hamartin regulates cell adhesion through ERM proteins and the GTPase Rho[J].Nat Cell Biol,2000,2(5):281.

[2]Qin G;Li W;Sun X,et al.Expression and significance of CD44v6 and MMP-9 in laryngeal squamous cell carcinoma[J].J Clin Otorhinolaryngol,2005,19(15):688.

[3]Martin TA,Harrison G,Mansel RE,et al.The role of the CD44/ezrin complex in cancer metastasis[J].Cri Rev Oncol Hematol,2003,46(2):165.

[4]Elston D,Eliis KL.Pathological prognostic factors in breast cancer.I.The value of histological grade in breast cancer:experience from a large study with long-term follow-up[J].Histopathology,1997,19(5):403.

[5]江忠清,連成瑛,鄭 秀.Ezrin分子生物學特性及其與婦科惡性腫瘤關系的研究進展[J].中華腫瘤防治雜志,2008,14(11):868-871.

[6]Shen ZY,Xu LY,Chen MH,et al.Upregulated expression of ezrin and invasive phenotype in malignantly transformed esophageal epithelial cells[J].World J Gastroenterol,2003,9(6):1182.

[7]Elliott BE,Meens JA,SenGupta SK,et al.The membrane cytoskeletal crosslinker ezrin is required for metastasis of breast carcinoma cells[J].Breast Cancer Res,2005,7(3):365.

[8]連臻強,楊名添,侯景輝,等.CD44v6在乳腺浸潤性導管癌組織中的表達及其臨床意義[J].癌癥,2006,25(10):1291.

[9]Ma W,Deng Y,Zhou L,et al.The prognostic value of adhesion molecule CD44v6in women with primary breast carcinoma:a clinicopathologic study[J].Clin Oncol,2005,17(4):258.

[10]Orian-Rousseau V,Morrison H,Matzke A,et al.Hepatocyte growth factor induced Ras activation requires ERM proteins linked to both CD44v6and F-actin[J].Mol Biol Cell,2007,18(1):76.