內(nèi)蒙古野生銀白離褶傘子實(shí)體組織分離試驗(yàn)

馮曉宇，鄒 莉，王志英，臧丹丹

（東北林業(yè)大學(xué)林學(xué)院，黑龍江 哈爾濱 150040）

銀白離褶傘Lyophyllum connatum(Schum.:Fr.)Sing.又叫做合生杯傘、真姬菇 （日本）、從生杯傘。同物異名：Clitocybe connata(Schum.:Fr.)Gill.隸屬傘菌目Agaricales、白蘑科Tricholomataceae、離褶傘屬Lyophyllum。銀白離褶傘子實(shí)體一般較小或中等大小，呈石膏樣白色。菌蓋直徑3 cm~8 cm，扁平球形至近平展，中部稍突或平，表面白色，后期近灰白色，近邊緣有皺條紋。菌肉白色。菌褶后期似帶粉黃色，直生又延生，稠密，不等長(zhǎng)。菌柄細(xì)長(zhǎng)，白色，下部彎曲，常有許多柄叢生一起，內(nèi)部實(shí)心至松軟[1]。可食用，有特殊的香氣味[1]。

1 材料和方法

1.1 供試種菇

從內(nèi)蒙古圖里河地區(qū)采集的野生銀白離褶傘，選擇朵型正常，無(wú)病害、蟲(chóng)孔、破損的子實(shí)體作為供試種菇。

1.2 培養(yǎng)基配方

馬鈴薯葡萄糖瓊脂 （PDA）培養(yǎng)基：去皮馬鈴薯200 g、葡萄糖20 g、瓊脂15 g~20 g，水1 000 mL，自然pH。121℃高壓蒸氣滅菌20 min。

1.3 試驗(yàn)方法

1.3.1 孢子印觀察

選取形狀規(guī)則八九分成熟的種菇，切去大部分，菌柄用無(wú)菌水沖洗數(shù)遍后再用已滅菌的濾紙吸干表面水分。在無(wú)菌室內(nèi)，把種菇菌褶朝下用鐵絲倒掛在玻璃漏斗下面，漏斗倒蓋在培養(yǎng)皿上面；上端小孔用棉花塞住。靜置12 h~20 h，菌褶上孢子就會(huì)散落在培養(yǎng)皿內(nèi)，形成孢子印。

1.3.2 菌絲體形態(tài)觀察

在載玻片上滴加1滴蒸餾水，用解剖針從生長(zhǎng)有銀白離褶傘的PDA平板中挑取少量菌絲，用50%的乙醇浸潤(rùn)，再用蒸餾水將浸過(guò)的菌絲洗一下，然后放入載玻片上的液滴中，仔細(xì)地用解剖針將菌絲分散開(kāi)來(lái)。蓋上蓋玻片，勿產(chǎn)生氣泡，且不要移動(dòng)蓋玻片。先用低倍鏡，再轉(zhuǎn)換高倍鏡鏡檢并記錄觀察結(jié)果。

1.3.3 子實(shí)體的組織分離

在超凈工作臺(tái)上，將子實(shí)體用75%的醫(yī)用酒精擦拭表面2遍~3遍；先用解剖刀沿銀白離褶傘縱向輕輕劃開(kāi)小口，再用手掰開(kāi)；切取菌蓋處、菌褶和菌柄交界處、菌柄處的組織塊，分別接種于PDA培養(yǎng)基平板上。每皿接4塊子實(shí)體，設(shè)置4組重復(fù)，置于25℃恒溫?zé)o光培養(yǎng)。每隔1 d觀察并記錄菌絲生長(zhǎng)情況。

1.3.4 新鮮子實(shí)體與陰干3 d子實(shí)體的對(duì)比分離

組織分離法分別分離新鮮的子實(shí)體和經(jīng)過(guò)陰干3 d后的子實(shí)體，各接4塊子實(shí)體于PDA平板上，設(shè)置4組重復(fù)，置于25℃無(wú)光條件下恒溫培養(yǎng)。每隔1 d觀察并記錄菌絲生長(zhǎng)情況。

1.3.5 污染率

每隔1 d觀察菌絲體的生長(zhǎng)情況，對(duì)發(fā)生污染的培養(yǎng)皿及時(shí)進(jìn)行轉(zhuǎn)皿培養(yǎng)，并做好記錄。

2 結(jié)果與分析

2.1 孢子印的觀察

觀察到的孢子印與菌褶排列一致，孢子印白色，粉末狀或放射狀。

2.2 菌絲體形態(tài)的觀察

經(jīng)過(guò)24 h培養(yǎng)后，可見(jiàn)組織塊上面長(zhǎng)出放射狀的菌絲，再經(jīng)過(guò)1 d菌絲開(kāi)始蔓延到平板培養(yǎng)基上。大約25 d～30 d菌絲可長(zhǎng)滿整個(gè)培養(yǎng)皿，結(jié)果見(jiàn)圖1、圖2。

圖1 菌絲體形態(tài)

圖2 菌絲體顯微結(jié)構(gòu)

從圖1可以看出菌絲潔白、粗壯、顏色一致；菌落呈規(guī)則圓形、邊緣整齊；無(wú)菌絲分泌物，并且具特殊的香味。從圖2可以看出，顯微鏡下的菌絲較纖細(xì)，粗細(xì)均勻，菌絲細(xì)胞呈狹長(zhǎng)狀。

2.3 子實(shí)體不同分離部位的菌絲生長(zhǎng)對(duì)比

子實(shí)體不同分離部位的菌絲生長(zhǎng)對(duì)比情況見(jiàn)表1。

表1 子實(shí)體不同部位分離結(jié)果

從表1可以看出，菌褶和菌柄交界處的組織塊為最佳組織培養(yǎng)部位，萌發(fā)快，菌絲生長(zhǎng)速度快，菌絲潔白細(xì)密。菌蓋處和菌柄處次之。

2.4 菌絲體污染率

新鮮子實(shí)體的菌絲體污染情況見(jiàn)表2。

從表2可以看出，新鮮子實(shí)體的菌絲體，菌蓋處的平均污染率為31.25%，菌褶和菌柄交界處的平均污染率為18.75%，菌柄處的平均污染率為31.25%?？梢?jiàn)，菌褶和菌柄交界處的污染率最低，菌柄處和菌蓋處的污染率相同，均較高。陰干3 d子實(shí)體的菌絲體污染情況見(jiàn)表3。

從表3可以看出，經(jīng)陰干3 d后的子實(shí)體生長(zhǎng)的菌絲體，菌蓋處的平均污染率為25.00%，菌褶和菌柄交界處的平均污染率為12.50%，菌柄處的平均污染率為18.75%?？梢?jiàn)菌褶和菌柄交界處的污染率最低，菌柄處略高，菌蓋處的污染率最高。

3 結(jié)論

內(nèi)蒙古野生銀白離褶傘子實(shí)體各部位經(jīng)組織分離均能萌發(fā)，菌褶和菌柄交界處菌絲生長(zhǎng)勢(shì)相對(duì)最旺且菌絲生長(zhǎng)最快，污染率相對(duì)最低，為最佳組織分離部位；新鮮子實(shí)體的分離污染率相較于陰干3 d后的子實(shí)體分離污染率高，選擇陰干子實(shí)體的組織進(jìn)行分離，可得更高的分離率。

表2 新鮮子實(shí)體的菌絲體污染率

表3 陰干3 d子實(shí)體的菌絲體污染率

目前世界有記錄的離褶傘屬有200余種，其中許多種既是美味的可食菌類(lèi)，又是很好的藥用真菌，還有抑制癌細(xì)胞的效果[2]。但國(guó)內(nèi)外研究最多的是荷葉離褶傘，墨染離褶傘和榆生離褶傘也有研究[2]。

銀白離褶傘作為一種待開(kāi)發(fā)的珍稀野生食用菌，其生物學(xué)特性、遺傳育種、馴化栽培研究以及營(yíng)養(yǎng)和藥用價(jià)值等在國(guó)內(nèi)外均未見(jiàn)報(bào)道，本文首次對(duì)銀白離褶傘進(jìn)行生物學(xué)特性研究，對(duì)其進(jìn)行的試驗(yàn)可為其價(jià)值和栽培的繼續(xù)研究提供支持和參考，以便于將來(lái)深入研究和開(kāi)發(fā)利用這一珍貴的種質(zhì)資源。

[1]卯曉嵐.中國(guó)大型真菌[M].河南：河南科學(xué)技術(shù)出版社，2000.

[2]李永紅，柴紅梅，李樹(shù)紅，等.離褶傘研究進(jìn)展[J].中國(guó)食用菌，2008， 27(2)： 10－12.