細胞遺傳學聯(lián)合免疫細胞化學檢查在首診非霍奇金淋巴瘤骨髓侵犯中的應用

王 娜,謝守軍,申興斌,武英偉,宗春光

(1.承德醫(yī)學院附屬醫(yī)院ICU,河北承德067000;2.承德醫(yī)學院附屬醫(yī)院檢驗科;3.承德醫(yī)學院附屬醫(yī)院病理科)

非霍奇金淋巴瘤侵犯骨髓(NHL bone marrow involvement,NHL-BMI)比較常見,因此通過骨髓穿刺判斷是否為NHL-BMI對淋巴瘤的診斷甚或臨床分期診斷具有非常重要意義。目前有關(guān)骨髓活檢組織病理聯(lián)合免疫組化應用于診斷NHL-BMI的報道較多[1,2],而骨髓涂片細胞形態(tài)、染色體核型聯(lián)合骨髓穿刺標本分離的單個核細胞進行免疫細胞化學用于淋巴瘤診斷的報道很少。本文回顧性分析了24例NHL-BMI的細胞遺傳學、免疫細胞化學以及骨髓涂片特點,對其進行探討,以提高診斷符合率。

1 材料與方法

1.1 臨床資料 選取2004年1月-2008年1月在我院住院并確診的的資料較完整的NHL-BMI患者24例。其中男18例,女6例,平均年齡50歲(12-83歲)。均為初診患者,所有患者均行淋巴結(jié)或結(jié)外腫瘤病理檢查,骨髓涂片、染色體以及免疫細胞化學檢查。NHL診斷和臨床分期標準參照《血液學診斷及療效標準》[3]。

1.2 儀器及試劑 Applied Imaging公司CytoVisionTM染色體成像分析系統(tǒng);蘇木素染液、瑞氏-姬姆薩染液購自珠海貝索生物技術(shù)有限公司;免疫組化抗體購于晶美生物公司。

1.3 實驗方法

1.3.1 免疫細胞化學染色 取骨髓液3-5 ml肝素抗凝,Ficoll液分離單個核細胞,用PBS洗滌3次,調(diào)細胞濃度為1-2×106/ml,甩片涼干。甲醇∶丙酮(1∶1)固定細胞,置于10 mmol/L的 PBS液洗滌 3次,每次2分鐘,滴加1抗,4℃冰箱濕盒中過夜,然后PBS液洗滌3次,每次2分鐘,再加入生物素化酶聯(lián)2抗,室溫濕盒中放置30-45分鐘,PBS洗滌3次,每次2分鐘,二氨基聯(lián)苯胺(DAB)液顯色。顯微鏡下觀察顯色情況,適時流水終止反應,蘇木素復染細胞核。細胞膜漿或細胞核中見到明顯的棕黃色為細胞陽性。根據(jù)需要采用不同抗體組合。

1.3.2 細胞遺傳學分析 取患者初診治療前的骨髓,經(jīng)24-48 h培養(yǎng)后,收集細胞常規(guī)制片,R顯帶,分析中期細胞數(shù)16-28個,根據(jù)細胞遺傳學國際命名體制(ISCN,1995)對核型進行描述。

2 結(jié)果

2.1 骨髓涂片細胞形態(tài) 彌漫性大B細胞淋巴瘤5例:腫瘤細胞形態(tài)多樣,細胞胞體大,胞質(zhì)量豐富嗜堿,胞核略不規(guī)則,染色質(zhì)細致,核仁明顯。B淋巴母細胞淋巴瘤1例:瘤細胞中等大小,漿量少,胞核可見切跡裂紋,染色質(zhì)細致,易見核仁。小淋巴細胞性淋巴瘤/慢性淋巴細胞白血病1例:瘤細胞胞體小,漿量少,胞核規(guī)則,染色質(zhì)致密,無核仁。伯基特淋巴瘤1例:胞體大,漿量豐富,空泡明顯呈蜂窩狀,胞核規(guī)則,染色質(zhì)細致,核仁明顯。濾泡性淋巴瘤1例:瘤細胞小,漿量少,胞核多規(guī)則,部分可見裂紋,染色質(zhì)致密,未見核仁。脾邊緣帶B細胞淋巴瘤1例:瘤細胞中等大小,胞質(zhì)量中等、淡染,核形規(guī)則,染色質(zhì)較粗,無核仁。B細胞淋巴瘤未能分類6例:瘤細胞胞體小,漿量少,胞核規(guī)則,染色質(zhì)致密,無核仁。其中兩例背景嗜酸細胞明顯增多。間變性大T細胞淋巴瘤1例:胞體大,多型性,胞質(zhì)量豐富,空泡明顯,胞核大,多為卵圓形,亦可見切跡、扭曲、腎形核,染色質(zhì)細網(wǎng)狀,核仁明顯。漿細胞增多,組織細胞易見。鼻型NK/T細胞淋巴瘤1例:瘤細胞形態(tài)多樣,小到中等,部分大細胞呈空泡狀,胞核扭曲多型性,細網(wǎng)狀,核仁不明顯。背景伴有巨噬細胞、嗜酸細胞、漿細胞、組織細胞增生。血管免疫母細胞性T細胞淋巴瘤1例:胞體小到中等大,胞質(zhì)量少、淡染,核形不規(guī)則,染色質(zhì)細致,可見小核仁。外周T細胞淋巴瘤3例:胞體大小不一,多型性,胞漿量不等,胞核規(guī)則。背景混有大量嗜酸細胞、漿細胞、組織細胞、吞噬細胞等。T細胞性淋巴瘤未能分型2例:瘤細胞浸潤較輕,胞體中等大,胞質(zhì)少,核形規(guī)則,染色質(zhì)較細致,無核仁。背景細胞成分復雜,吞噬性組織細胞明顯增多。

2.2 免疫細胞化學及染色體核型 本組16例B細胞淋巴瘤骨髓單個核細胞都表達CD20、CD79a,FCL還同時表達CD10、BCL-6,B-LBL表達 CD10、TdT,SLL/CLL表達 CD5、CD23。DLBL和SMZL除表達CD20、CD79a外,無其它特異性抗體的表達。8例T細胞淋巴瘤都表達CD3,其中6例表達CD45RO。除表達CD3外,ALCL-T還表達CD30,NK/T-NL表達CD56,3例PTCL-NOS中2例有CD68表達。本組結(jié)果顯示有染色體核型異常的病例占54%(13/24),4例淋巴瘤白血病患者均檢出異常核型;13例NHL骨髓浸潤患者中6例檢出異常核型,余7例骨髓輕度受累患者中2例為異常核型。免疫細胞化學及細胞遺傳學資料見表1。

3 討論

本組淋巴瘤細胞浸潤骨髓數(shù)量不等,以原始細胞型和小淋巴細胞型為主者,骨髓受累較重,瘤細胞形態(tài)特點明晰,易于辨認和診斷。而以大細胞型為主者,骨髓受累多較輕,瘤細胞散在分布于造血細胞和反應性細胞間,易誤診漏診。B淋巴母細胞淋巴瘤/急性淋巴細胞白血病瘤細胞染色質(zhì)細致、疏松、淺染,易見核仁,表達早期抗原標志CD10、TdT。小淋巴細胞性淋巴瘤/慢性淋巴細胞白血病(SLL/CLL)瘤細胞染色質(zhì)粗糙、致密、深染,無核仁,除表達CD20、CD79a外,還表達CD5、CD23,上述特點可作為與反應性淋巴細胞增生的鑒別。DLBL瘤細胞胞體大,形態(tài)偏幼稚,容易與原始粒細胞、紅細胞、巨核細胞、異常組織細胞、骨髓轉(zhuǎn)移瘤細胞混淆,通過仔細辨認瘤細胞形態(tài),結(jié)合免疫細胞化學表達 CD20、CD79a,而 MPO 、CD13、血型糖蛋白 A、CD41、CD68、α-NAE、EMA、CK均為陰性,可以進行鑒別。本組NK/T-NL、PTLC和部分DLBL骨髓涂片瘤細胞背景中伴有嗜酸細胞、漿細胞、組織細胞、吞噬細胞等反應性細胞明顯增多,提示淋巴瘤與骨髓激惹現(xiàn)象密切相關(guān)。因此在骨髓涂片發(fā)現(xiàn)少量分類不明細胞伴反應細胞明顯增多時,在排除結(jié)核、結(jié)締組織病、感染相關(guān)噬血細胞綜合征后,應高度懷疑有無淋巴瘤可能。另外特別強調(diào)的是,部分淋巴瘤侵犯骨髓,呈結(jié)節(jié)型灶性增生,1次骨髓穿刺常常漏檢,多次多部位穿刺可能有助于疾病診斷,本組有2例患者經(jīng)3次骨穿方確診為淋巴瘤。

表1 13例有染色體核型異常的NHL患者的骨髓免疫細胞化學及細胞遺傳學特征

本文結(jié)果表明,骨髓單個核細胞免疫細胞化學對淋巴瘤的診斷甚或分型具有重要意義。CD20和CD79a對B細胞來源、CD3對T細胞來源淋巴瘤有診斷價值。FCL表達 CD10、BCL-6,ALCL-T CD30、CD45RO強陽性表達。SLL/CLL CD5、CD23陽性。BLBL表達早期抗原標志CD10、TdT。結(jié)合細胞形態(tài)可對大部分淋巴瘤進行診斷分型。

有90%的淋巴瘤患者有克隆性染色體異常,不同類型常有特異性的改變[4,5]。如濾泡細胞淋巴瘤常發(fā)生t(14;18);伯基特淋巴瘤t(8;14);套細胞淋巴瘤t(11;14);間變性大細胞淋巴瘤t(2;5);彌漫性大細胞淋巴瘤易見t(3;var)等。本組結(jié)果也證實了部分染色體核型與淋巴瘤分型相關(guān),其中1例ALCL發(fā)生罕見的t(2;3)(p23;q21),但本組異常核型檢出率較文獻報道低。本文7例骨髓輕度受累患者中2例檢出核型異常。薛永權(quán)等亦報道[6],部分淋巴瘤患者的骨髓像細胞形態(tài)顯示為正常,但檢出異常染色體核型。上述結(jié)果提示細胞遺傳學檢查對發(fā)現(xiàn)NHL早期骨髓浸潤有獨特的診斷價值。

在無法得到淺表淋巴結(jié)活檢標本時,通過骨髓涂片細胞形態(tài)學、免疫細胞化學、細胞遺傳學聯(lián)合檢查有時對淋巴瘤的診斷可能提供診斷依據(jù),避免進一步有創(chuàng)性檢查。

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