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    阿昔洛韋葡萄糖注射液細(xì)菌內(nèi)毒素檢查方法研究

    2010-05-29 06:02:30董林青邱向東黃登峰許廣振
    中國醫(yī)藥導(dǎo)報(bào) 2010年4期
    關(guān)鍵詞:阿昔洛內(nèi)毒素試劑

    董林青,邱向東,黃登峰,許廣振

    (山東勝利股份有限公司生物工程部,山東濟(jì)南 250101)

    細(xì)菌內(nèi)毒素檢查法又稱鱟試劑法,是一種利用鱟試劑與細(xì)菌內(nèi)毒素發(fā)生凝聚反應(yīng)來檢查藥品中內(nèi)毒素含量是否符合規(guī)定的方法。阿昔洛韋葡萄糖注射液是抗菌藥與抗病毒藥的化學(xué)藥品,本文參照文獻(xiàn)[1-3]報(bào)道的細(xì)菌內(nèi)毒素檢查法,探討了阿昔洛韋葡萄糖注射液的內(nèi)毒素檢查的具體方法。

    1 儀器與試藥

    1.1 儀器

    鱟試劑(批號(hào):20060427,λ 為 0.125 EU/ml,規(guī)格:0.10 ml/支,湛江安度斯生物有限公司;批號(hào):200606040,λ為0.25 EU/ml,規(guī)格0.10 ml/支,福州新北生化工業(yè)有限公司);細(xì)菌內(nèi)毒素工作標(biāo)準(zhǔn)品(批號(hào):2006-4,160 EU/支,中國藥品生物制品檢定所);細(xì)菌內(nèi)毒素檢查用水(批號(hào):20070518,規(guī)格:5 ml/支,湛江海洋生物制品廠);阿昔洛韋葡萄糖注射液3批樣品(批號(hào):070901、070902、070903,國內(nèi)某醫(yī)藥有限公司,規(guī)格:100 ml:阿昔洛韋0.1 g,葡萄糖5 g)。

    1.2 試藥

    XW-80型旋渦混勻器 (上海醫(yī)科大學(xué)儀器廠);S648型恒溫水浴鍋(上海醫(yī)療廠);吸管;凝集管(75 mm);試管、吸耳球、封口膜、試管架;超凈工作臺(tái)[4],試驗(yàn)所用玻璃器皿均經(jīng)重鉻酸鉀洗液處理后再以250℃烘烤1 h,以去除外源性細(xì)菌內(nèi)毒素[5]。

    2 方法與結(jié)果

    2.1 細(xì)菌內(nèi)毒素限值的建立

    按細(xì)菌內(nèi)毒素公式L=K/M(K為人用每千克體重每小時(shí)最大可接受的內(nèi)毒素劑量,K=5 EU/(kg·h),M 為每千克體重每小時(shí)最大供試品劑量),根據(jù)本品制劑用法與用量中規(guī)定,該藥一次劑量為5 mg/kg,成人體重以60 kg計(jì),即成人每日每次最大劑量為 300 mg,則 M=300 ml/60(kg·h),L=5.0/300/60=1.0 EU/ml,但考慮到藥品使用安全性要求及一般大容量輸液細(xì)菌內(nèi)毒素限值要求,將本品的細(xì)菌內(nèi)毒素限值定為0.5 EU/ml為宜。

    2.2 鱟試劑標(biāo)示靈敏度的復(fù)核

    按《中國藥典》2005年版規(guī)定進(jìn)行靈敏度復(fù)核,結(jié)果20060427 批靈敏度 λc=0.171 EU/ml(λb=0.125 EU/ml);200606040 批靈敏度 λc=0.25 EU/ml(λb=0.25 EU/ml),均符合藥典規(guī)定,可用于細(xì)菌內(nèi)毒素的檢查。

    2.3 供試品干擾預(yù)試驗(yàn)[6]

    根據(jù)供試品內(nèi)毒素限值(L)為0.5 EU/ml,市售鱟試劑λ最低為0.03 EU/ml,計(jì)算出鱟試劑λ為0.25、0.06 EU/ml時(shí)的供試品稀釋倍數(shù)MVD=L/λ,即8.33~16.67倍,則最小有效濃度為0.12~0.06 mg/ml。取3批供試品,用BET水將供試品分別稀釋為 1.00、0.50、0.25 mg/ml,同時(shí)選擇 λ=0.25 EU/ml的鱟試劑,將每個(gè)濃度供試品液均制備含有2.000 λ(0.5 EU/ml)及0.125 λ(0.06 EU/ml)的細(xì)菌內(nèi)毒素作為供試品陽性液。每一濃度制備2支試管,同時(shí)設(shè)陰性對(duì)照、陽性對(duì)照,結(jié)果見表1。結(jié)果表明,供試品預(yù)試驗(yàn)為稀釋后對(duì)以上兩個(gè)廠家的鱟試劑均未產(chǎn)生干擾作用。

    表1 干擾預(yù)試驗(yàn)

    2.4 供試品干擾試驗(yàn)

    根據(jù)預(yù)試驗(yàn)結(jié)果,用供試品原液及BET水分別將細(xì)菌內(nèi)毒素工作標(biāo)準(zhǔn)品制成表2所示的一系列濃度,每一濃度的細(xì)菌內(nèi)毒素標(biāo)準(zhǔn)溶液平行制備4支;另取細(xì)菌內(nèi)毒素檢查用水和此濃度的稀釋液各制備2支陰性對(duì)照管。按下式計(jì)算用細(xì)菌內(nèi)毒素檢查用水制成的細(xì)菌內(nèi)毒素標(biāo)準(zhǔn)溶液的反應(yīng)終點(diǎn)濃度的幾何平均值Es,以及此濃度的稀釋液制成的細(xì)菌內(nèi)毒素標(biāo)準(zhǔn)溶液的反應(yīng)終點(diǎn)濃度的幾何平均值Et∶Es=lg-1(∑Xs/4);Et=lg-1(∑Xt/4)。式中 Xs、Xt分別為細(xì)菌內(nèi)毒素檢查用水和稀釋液制成的細(xì)菌內(nèi)毒素標(biāo)準(zhǔn)溶液的反應(yīng)終點(diǎn)濃度的對(duì)數(shù)值(lg)。當(dāng) Es 在 0.5 λ~2.0 λ(包括 0.5 λ 和 2.0 λ)時(shí),且當(dāng) Es/Et在0.5~2.0(包括0.5和2.0)時(shí),則認(rèn)為供試品在該濃度下不干擾試驗(yàn),結(jié)果見表2、3。干擾試驗(yàn)結(jié)果表明,阿昔洛韋葡萄糖注射液(1 mg/ml)對(duì)鱟試劑不干擾,可以用細(xì)菌內(nèi)毒素檢查法檢查。

    表2 鱟試劑批號(hào)為20060427的干擾試驗(yàn)結(jié)果

    表3 鱟試劑批號(hào)為200606040的干擾試驗(yàn)結(jié)果

    2.5 樣品細(xì)菌內(nèi)毒素檢查

    將3批供試品按文獻(xiàn)[1]細(xì)菌內(nèi)毒素檢查法檢查,分別用兩個(gè)廠家鱟試劑進(jìn)行細(xì)菌內(nèi)毒素檢查,結(jié)果見表4、5。結(jié)果表明,3批供試品細(xì)菌內(nèi)毒素限值均<0.5 EU/ml,均符合規(guī)定。

    表4 阿昔洛韋葡萄糖注射液(樣品1)細(xì)菌內(nèi)毒素檢查結(jié)果

    表5 阿昔洛韋葡萄糖注射液(樣品2)細(xì)菌內(nèi)毒素檢查結(jié)果

    3 結(jié)論

    3批產(chǎn)品干擾試驗(yàn)結(jié)果表明,阿昔洛韋葡萄糖注射液在稀釋濃度下沒有干擾,可以進(jìn)行細(xì)菌內(nèi)毒素檢查,依據(jù)《中國藥典》2005年版二部附錄細(xì)菌內(nèi)毒素檢查法規(guī)定原則,阿昔洛韋葡萄糖注射液采用細(xì)菌內(nèi)毒素檢查法代替家兔熱原檢查法是可行的。

    [1]國家藥典委員會(huì).中華人民共和國藥典[S].二部.北京:化學(xué)工業(yè)出版社,2005:附錄85.

    [2]黃清泉,夏振民.藥品細(xì)菌內(nèi)毒素檢查的實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)[J].中國藥學(xué)雜志,1997,32(2):210.

    [3]李海英,王瓊芬.乳酸左氧氟沙星氯化鈉注射液的細(xì)菌內(nèi)毒素檢查[J].中國藥業(yè),2008,17(12):55-56.

    [4]樊麗,趙金英.藥品細(xì)菌內(nèi)毒素檢查經(jīng)驗(yàn)總結(jié)[J].中國醫(yī)藥導(dǎo)報(bào),2008,5(5)13:82.

    [5]張琦,徐梅,王曉利.細(xì)菌內(nèi)毒素法檢查5%果糖注射液[J].中外醫(yī)療,2008,23:133.

    [6]國明,祝清芬,鄭力真.無菌、微生物限度及細(xì)菌內(nèi)毒素檢查方法學(xué)驗(yàn)證中常見問題及分析[J].中國藥品標(biāo)準(zhǔn),2008,9(1):49.

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