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    青海省部分地區(qū)牛奶中幾種微生物指標的檢測

    2010-05-18 11:14:24李桂蘭
    中國動物檢疫 2010年6期
    關鍵詞:食品衛(wèi)生大腸菌群稀釋液

    李桂蘭

    (青海省動物疫病預防控制中心,青海 西寧 810006)

    牛奶安全關系到消費者的身體健康,影響牛奶安全的因素較多,須對其進行全面的檢測,檢測項目主要包括微生物檢測、化學物質檢測、殘渣檢測等。當乳牛受到飼養(yǎng)管理、疾病、氣溫以及其他各種因素(包括人工造假)的影響時,乳的成分和性質往往發(fā)生變化,這種乳不適于加工優(yōu)質的產(chǎn)品,極可能對消費者造成健康隱患,所以必須對奶制品進行檢測[1]。牛奶安全的檢測對保證使用者的健康有著非常重要的意義。

    微生物的污染是引起乳及乳制品變質的重要原因。在乳及乳制品加工過程中的各個環(huán)節(jié)如滅菌、過濾、濃縮、發(fā)酵、干燥、包裝等,都可能因為不按操作規(guī)程生產(chǎn)加工而造成微生物污染。所以在乳及乳制品的加工過程中,對所有接觸到乳及乳制品的容器、設備、管道、工具、包裝材料等都要進行徹底的滅菌,防止微生物的污染,以保證產(chǎn)品質量[2]。另外在加工過程中還要防止機械雜質和揮發(fā)性物質(如汽油)等的混入和污染。原料乳衛(wèi)生質量的優(yōu)劣直接關系到乳及乳制品的質量。原料的衛(wèi)生質量問題主要是病牛乳(結核病、乳房炎牛的乳)、高酸乳、胎乳、初乳,應用抗生素五天內的乳、摻偽乳以及變質乳等。

    1 材料與方法

    1.1 檢測方法

    1.1.1 檢測方法

    本檢測方法均按中華人民共和國國家標準《食品衛(wèi)生微生物學檢驗》GB/T4789-2003中《食品衛(wèi)生微生物學檢驗》GB/T4789.2-2003《食品衛(wèi)生微生物學檢驗 菌落總數(shù)測定》,GB/T4789.3-2003《食品衛(wèi)生微生物學檢驗 大腸菌群測定》,GB/T 4789.4-2003《食品衛(wèi)生微生物學檢驗 沙門氏菌檢驗》要求檢驗方法進行檢驗。

    1.1.2 檢測項目

    檢驗項目為細菌總數(shù)、大腸菌群和沙門氏菌。

    1.2 材料

    1.2.1 樣品

    青海省部分地區(qū)8批次70份鮮牛奶樣品。

    1.2.2 器械[3]

    0℃~4℃冰箱,36℃±1℃恒溫培養(yǎng)箱,46℃±1℃恒溫水浴鍋,均質器或滅菌乳缽,0g~500g架盤藥物天平,菌落計數(shù)器,4×放大鏡,10×~100×顯微鏡,1mL(具 0.01mL刻度)、10mL(具0.01mL刻度)滅菌吸管,500mL滅菌錐形瓶,直徑5mm滅菌玻璃珠,直徑90mm滅菌培養(yǎng)皿,16mm×160mm滅菌試管,3mm×50mm滅菌小試管,滅菌毛細管、刀、剪子、鑷子等。

    1.2.3 培養(yǎng)基和試劑

    1.2.3.1 菌落總數(shù)測定

    營養(yǎng)瓊脂培養(yǎng)基;硫酸鹽緩沖液;0.85%滅菌生理鹽水;75%乙醇。

    1.2.3.2 大腸菌群測定

    乳糖膽鹽發(fā)酵管,伊紅美蘭瓊脂平板,乳糖發(fā)酵管,EC肉湯;革蘭氏染色液。

    1.2.3.3 沙門氏菌測定

    緩沖蛋白胨水(BP),氯化鎂孔雀綠(MM)增菌液,四硫酸鈉煌綠(TTB)增菌液,亞硫酸鹽胱氨酸(CC)增菌液,亞硫酸鉍瓊脂(BS),DHL瓊脂,HE瓊脂,WS瓊脂,SS瓊脂,三糖鐵瓊脂,蛋白胨水、定基質試劑,尿素瓊脂(pH7.2),氰化鉀(KCN)培養(yǎng)基,氨基酸脫羧酶試驗培養(yǎng)基,糖發(fā)酵管,ONPG培養(yǎng)基,半固體瓊脂,丙二酸鈉培養(yǎng)基。沙門氏菌因子血清:按26種用于初步分型;57種用于進一步分型;163種用于詳細分型。

    1.3 方法[3]

    1.3.1 菌落總數(shù)測定方法

    1.3.1.1 以無菌操作將檢樣25mL放入含有225mL滅菌生理鹽水的滅菌玻璃瓶內,經(jīng)充分振搖做成1:10的均勻稀釋液。

    1.3.1.2 用1mL滅菌吸管吸取1:10稀釋液1mL,沿管壁徐徐注入含有9mL滅菌生理鹽水的試管內(注意吸管尖端不要觸及管內稀釋液),振搖試管,混合均勻,做成1:100的稀釋液。

    1.3.1.3 另取1mL滅菌吸管,按上調操作方法,做10倍遞增稀釋,如此每遞增稀釋一次,即換用1支1mL滅菌吸管。

    1.3.1.4 根據(jù)食品衛(wèi)生標準要求或對標本污染情況的估計,選擇2個~3個適宜稀釋度,分別在做10倍遞增稀釋的同時,即以吸取該稀釋度的吸管移1mL稀釋液于滅菌培養(yǎng)皿內,每個稀釋度做兩個培養(yǎng)皿。

    1.3.1.5 稀釋液移入培養(yǎng)皿后,及時將涼至46℃營養(yǎng)瓊脂培養(yǎng)基(可放置于46℃±1℃水浴恒保溫)注入培養(yǎng)皿約15mL,并轉動培養(yǎng)皿使混合均勻。同時將營養(yǎng)瓊脂培養(yǎng)基傾入加有1mL稀釋液滅菌培養(yǎng)皿內做空白對照。

    1.3.1.6 待瓊脂凝固后,翻轉平板,置36℃±1℃溫箱內培養(yǎng)48h±2h。

    1.3.1.7 菌落計數(shù)方法

    做平板菌落計數(shù)時,可用肉眼觀察,必要時用放大鏡檢查,以防遺漏。在記下各平板的菌落數(shù)后,求出同稀釋度的各平板平均菌落總數(shù)。

    1.3.2 大腸菌群測定方法

    1.3.2.1 以無菌操作將檢樣25mL放于含有225mL滅菌生理鹽水的滅菌玻璃瓶內(瓶內預置適當數(shù)量的玻璃珠),經(jīng)充分振搖做成1:10的均勻稀釋液[4]。

    1.3.2.2 用1mL滅菌吸管吸取1:10稀釋液1mL,注入含有9mL滅菌生理鹽水的試管內,振搖試管,混合均勻,做成1:100的稀釋液。

    1.3.2.3 另取1mL滅菌吸管,按上調操作方法,做10倍遞增稀釋,如此每遞增稀釋一次,即換用1支1mL滅菌吸管。

    1.3.2.4 根據(jù)食品衛(wèi)生標準要求或對標本污染情況的估計,選擇3個適宜稀釋度,每個稀釋度,接種3管。

    (1)乳糖發(fā)酵試驗

    將待檢樣品接種于乳糖膽鹽發(fā)酵管內,接種量在1mL以上者,用雙料乳糖膽鹽發(fā)酵管1mL及1mL以下者,用單料乳糖膽鹽發(fā)酵管。每一稀釋度接種三管,置36℃±1℃溫箱內,培養(yǎng)18h~24h,如所有乳糖膽鹽發(fā)酵管都不產(chǎn)氣,則報告為大腸菌群陰性,如有產(chǎn)氣者,則按下列程序進行。

    (2)分離培養(yǎng)

    將產(chǎn)氣的發(fā)酵管分別轉種在伊紅美蘭瓊脂平板上,置36℃±1℃溫箱內,培養(yǎng)48h±2h,然后取出,觀察菌落形態(tài),并作革蘭氏染色和證實試驗。

    在上述平板上,挑取可疑大腸菌群1個~2個進行革蘭氏染色,同時接種乳糖膽鹽發(fā)酵管,置36℃±1℃溫箱內,培養(yǎng)24h±2h,觀察產(chǎn)氣情況。凡乳糖管產(chǎn)氣、革蘭氏染色為陰性的無芽孢桿菌,即可報告為大腸菌群陽性。

    1.3.3 沙門氏菌測定方法

    1.3.3.1 前增菌和增菌

    以無菌操作取25mL,加在裝有225mL緩沖蛋白胨水的廣口瓶內。移取10mL,轉于100mL氯化鎂孔雀綠增菌液內,于42℃培養(yǎng)18h~24h。同時,另取10mL,轉種于100mL亞硒酸鹽胱氨酸增菌液內,于36℃±1℃培養(yǎng) 18h~24h。

    1.3.3.2 分離

    取增菌液一環(huán),劃線接種于一個亞硫酸鉍瓊脂平板和一個DHL瓊脂平板。兩種細菌液可同時劃線接種在同一個平板上。于36℃±1℃分別培養(yǎng)18h~24h,觀察各個平板上生長的菌落,沙門氏菌Ⅰ、Ⅱ、Ⅳ、Ⅴ、Ⅵ和沙門氏菌Ⅲ在各個平板上的菌落特征見表1。

    1.3.3.3 生化試驗

    自選擇性瓊脂平板上直接挑取數(shù)個可疑菌落,分別接種三糖鐵瓊脂。在三糖鐵瓊脂內,腸桿菌科常見屬種的反應結果見表2。

    表2說明在三糖鐵瓊脂內只有斜面產(chǎn)酸并同時硫化氫(H2S)陰性的菌株可以排除,其他的反應均有沙門氏菌的可能,同時也均有不是沙門氏菌的可能。

    2 結果

    2.1 評價標準

    評價按照《食品衛(wèi)生國家標準》進行評價。凡樣品中有一項或一項以上指標不符合標準則定為不合格樣品。

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    2.2 檢測結果

    8批次70份鮮牛奶檢測中菌落總數(shù) (Cfu/mL)介于 6.3×104與3.6×105之間,平均為 1.4×105;大腸菌群(MPN/100mL)是 1.5×104與1.4×105之間,平均為 7.6×104,均低于國標 GB/T4789.1~4789.31—2003的要求(菌落總數(shù):5.0×105,大腸菌群:1.0×105)。沙門氏菌檢測均為陰性。詳見表3。

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    3 討論

    3.1 2008年的三聚氰胺事件,包括三鹿奶粉在內的國內其他名牌產(chǎn)品都存在類似問題,建議除了加強對三聚氰胺等化學添加劑的監(jiān)測外,還需加強對病原微生物監(jiān)測。

    3.2 雖然整體平均符合國標要求,但是部分批次的單個樣品有超標的情況,這可能與以下幾個方面有關,一是養(yǎng)殖環(huán)境較差,病原微生物滋生導致。二是擠奶環(huán)節(jié)沒有按照規(guī)定操作,比如擠奶前沒有對乳頭進行清洗消毒,致使糞便污染乳頭所致;盛奶容器消毒達不到要求。三是個別奶牛存在隱性乳房炎,導致鮮奶質量不符合要求。四是雖然部分企業(yè)開始集約化養(yǎng)殖,但是其管理模式尚與蒙牛、伊利等大型企業(yè)存在較大差距,尤其在龍頭帶動農戶的模式中存在監(jiān)管不力,質量難以控制的情況。

    3.3 本實驗按照GB/T4789.2—2003食品微生物學檢驗完成,該規(guī)范在鮮奶微生物檢測中存在規(guī)范不清、沒有具體判定數(shù)值標準等情況,建議國家有關部門提出針對鮮乳中微生物檢驗的相應國家標準和規(guī)范。

    3.4 建議我省奶牛養(yǎng)殖中提高規(guī)模化和規(guī)范化養(yǎng)殖水平,并提高動物防疫水平;與此同時建議動物衛(wèi)生監(jiān)督部門和動物防疫部門加強市場檢疫和源頭檢測,整體上提高我省鮮奶質量,進而全面提高我省該方面食品安全水平。

    3.5 加強宣傳力度,大力宣傳食品衛(wèi)生相關知識,強化廣大人民群眾的食品衛(wèi)生安全意識,從而逐步努力營造人人參與食品安全、全社會重視支持食品安全的良好氛圍,讓消費者喝上安全衛(wèi)生的牛奶制品。

    3.6 青海地區(qū)幅員遼闊,是全國五大牧區(qū)之一,畜牧業(yè)在青海有廣闊的發(fā)展前景,而奶業(yè)在全省有獨特的優(yōu)勢。把優(yōu)勢轉化為發(fā)展經(jīng)濟的亮點,就要求奶業(yè)從事者從基礎抓起,確保乳制品的質量過關。廣大的質量監(jiān)督員也要履行本職工作,為奶業(yè)經(jīng)濟把好關。乳制品質量檢測任重道遠,相關檢測技術亟待發(fā)展進步。

    [1]張彥明,佘銳萍.動物性食品衛(wèi)生學[M].3版.北京:中國農業(yè)出版社,2007.

    [2]張建新.食品質量安全技術標準法規(guī)應用指南[M].北京:科學技術文獻出版社,2002.

    [3]GB/T4789.2-2003食品衛(wèi)生微生物學檢驗菌落總數(shù)測定[S].北京:中國標準出版社,2003.

    [4]張彥明,賈靖國.動物性食品衛(wèi)生檢驗技術[M].西安:西北大學出版社,1995.

    [5]郭本恒.現(xiàn)代乳品加工學[M].北京:中國輕工業(yè)出版社,2001.

    [6]于莉,羅章,孟云.西藏地區(qū)牦牛乳理化和微生物指標的檢測分析[J].中國乳品工業(yè),2006,34(9):108-111.

    [7]藺長明,王占江,李振舉.無公害畜禽產(chǎn)品的生產(chǎn)和認證[J].中國動物檢疫,2003,20(7):1-2.

    [8]李莎燕,馬文瑞,褚明德.門源縣奶牛養(yǎng)殖業(yè)的現(xiàn)狀與發(fā)展對策[J].青海畜牧獸醫(yī)雜 志,2008,38(5):37-38.

    [9]閻萍,潘和平.牦牛乳業(yè)的開發(fā)和利用[J].中國乳業(yè),2004(7):10-121.

    [10]李萬財,尚海忠,李俊花,等.天峻地區(qū)牦牛乳中微生物含量的測定[J].中國動物檢疫,2002,19(3):361.

    [11]張福年.民和縣奶牛生產(chǎn)的現(xiàn)狀及對策 [J].青海畜牧獸醫(yī)雜志,2008,38(5):39-40.

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