鹽酸瑞芬太尼細(xì)菌內(nèi)毒素檢查法的建立

付 蓉 李莉娥 覃 琨 程延軍

(1.武漢大學(xué)藥學(xué)院,武漢 430072;2.宜昌人福藥業(yè)有限責(zé)任公司,湖北 宜昌 443005)

鹽酸瑞芬太尼為芬太尼族中的最新成員,是純粹的μ受體激動藥.臨床上其效價與芬太尼相似,為阿芬太尼的15～30倍.與阿芬太尼相比,起效更快,半衰期和作用時間更短、恢復(fù)迅速、無蓄積作用、鎮(zhèn)痛效價更強(qiáng)及副作用更輕,被譽(yù)為21世紀(jì)的阿片類藥[1].瑞芬太尼的鎮(zhèn)痛作用及其副作用呈劑量依賴性,與催眠藥、吸入性麻醉藥和苯二氮卓類合用有協(xié)同作用.目前各國藥典尚未收載鹽酸瑞芬太尼原料及其制劑的質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn).本試驗參照《中國藥典》2005年版[2]“細(xì)菌內(nèi)毒素檢查法”中干擾試驗的原理,對鹽酸瑞芬太尼中細(xì)菌內(nèi)毒素進(jìn)行了檢查,發(fā)現(xiàn)鹽酸瑞芬太尼對鱟試劑有干擾作用,經(jīng)稀釋處理后可消除干擾.

1 實驗材料

1.1 儀器

VORTEX-2漩渦混合器(SCIENTIFIC INDUSTRIES,INC.);HH-2數(shù)顯恒溫水浴鍋(江蘇省金壇市榮華儀器制造有限公司).

1.2 藥品

鹽酸瑞芬太尼原料(批號090701、090702、090703,宜昌人福藥業(yè)有限責(zé)任公司).

1.3 試劑

鱟試劑 1(TAL1):批號 0909041,λ=0.5 IU?mL-1,湛江安度斯生物有限公司生產(chǎn);鱟試劑 2(TAL2):批號 1001050,λ=0.5IU ?mL-1,湛江博康海洋生物有限公司生產(chǎn);細(xì)菌內(nèi)毒素檢查用水:批號1001180,規(guī)格5mL/支,湛江安度斯生物有限公司生產(chǎn);細(xì)菌內(nèi)毒素工作標(biāo)準(zhǔn)品:批號150601-200861,規(guī)格150IU/支,中國藥品生物制品檢定所生產(chǎn).

2 方法與結(jié)果

2.1 鱟試劑靈敏度復(fù)核試驗

按照《中國藥典》2005年版二部附錄“鱟試劑靈敏度復(fù)核試驗”規(guī)定的方法復(fù)核試驗用鱟試劑靈敏度.結(jié)果見表1.

表1 鱟試劑靈敏度復(fù)核試驗

2.2 供試品細(xì)菌內(nèi)毒素限值(L)的確定

鹽酸瑞芬太尼為麻醉鎮(zhèn)痛藥,臨床每小時每公斤最大用量M=2.0μ g?kg-1?min-1[3]=0.12mg?kg-1?h-1,按L=K ?M-1(K=5 IU ?kg-1),加安全系數(shù)2,確定本品內(nèi)毒素限值為20IU?mg-1.

2.3 供試品最小稀釋濃度

MVC=λ?L-1;L:20 IU ?mg-1;λ:鱟試劑靈敏度標(biāo)示值,0.5 IU?mL-1;MVC=λ/L=(0.5 IU/mg)?(20 IU/mL)-1=0.025mg?mL-1;按干品含量99%、水分0.5%,濕品:0.025mg/mL÷99%÷(1-0.5%)=0.0254mg?mL-1.

2.4 干擾預(yù)試驗

取鹽酸瑞芬太尼供試品,用細(xì)菌內(nèi)毒素檢查用水稀釋成 5.08、2.54、1.27、0.635 mg ?mL-1,混合均勻,取0.1mL加入0.5 IU?mL-1細(xì)菌內(nèi)毒素的鱟試劑中,混勻,置(37±1)℃水浴中 60min觀察,找出其不干擾樣品最大稀釋質(zhì)量濃度.

質(zhì)量濃度為5.08 mg?mL-1的供試品陽性不凝固,濃度為2.54mg?mL-1和低于此質(zhì)量濃度供試品陽性凝固.結(jié)果表明:供試品溶液質(zhì)量濃度為5.08 mg?mL-1時對鱟試劑有干擾;供試品溶液質(zhì)量濃度為2.54mg?mL-1時對鱟試劑無干擾,因此干擾試驗使用質(zhì)量濃度為2.54mg?mL-1.

表2 干擾預(yù)試驗結(jié)果

2.5 干擾試驗

取供試品用檢查用水稀釋至2.54mg?mL-1,用此稀釋液將內(nèi)毒素工作品稀釋成 1.0、0.5、0.25、0.125 IU?mL-1系列內(nèi)毒素溶液,混合均勻,取0.1 mL,加入0.1 mL鱟試劑中,混勻,置(37±1)℃水浴中60min觀察,測試2.54 mg?mL-1試驗濃度下對鱟試劑的干擾情況.結(jié)果見表3.

表3 樣品干擾試驗結(jié)果

2.6 樣品內(nèi)毒素檢測

將3批樣品用檢查用水稀釋至0.0254 mg?mL-1,按照《中國藥典》2005年版二部附錄規(guī)定進(jìn)行細(xì)菌內(nèi)毒素檢測.結(jié)果3批樣品均為合格.結(jié)果見表4.

表4 樣品細(xì)菌內(nèi)毒素檢測結(jié)果

3 討 論

本試驗用兩個廠家的兩種鱟試劑對鹽酸瑞芬太尼原料3個批號的樣品進(jìn)行干擾試驗和確證試驗,結(jié)果表明樣品溶液質(zhì)量濃度為2.54 mg?mL-1時對鱟試劑無干擾作用.

藥品采用細(xì)菌內(nèi)毒素檢查的先決條件是證明藥品在滿足限量檢查要求的濃度下對細(xì)菌內(nèi)毒素不產(chǎn)生干擾作用.如藥品在高濃度時對細(xì)菌內(nèi)毒素試驗不產(chǎn)生干擾作用,則低濃度時也不會產(chǎn)生干擾[4].鹽酸瑞芬太尼的最小稀釋濃度(MVC)為0.0254mg?mL-1.

表4試驗結(jié)果表明,3個批號鹽酸瑞芬太尼采用2個廠家鱟試劑作細(xì)菌內(nèi)毒素檢查,結(jié)果均符合規(guī)定,說明用此限值進(jìn)行該樣品細(xì)菌內(nèi)毒素檢查是可行的.綜合臨床用藥、生產(chǎn)和檢驗的實際情況,本品的細(xì)菌內(nèi)毒素限值可定為20IU?mg-1.

[1］Saniay S.Patel,Caroline M.Spencer.Remifentanil[J].Drugs,1996,52(3):417-427.

[2］國家藥典委員會.《中國藥典》2005年版.二部[S].附錄XIE.

[3］國家藥典委員會.《臨床用藥須知》化學(xué)藥和生物制品卷[M].北京:人民衛(wèi)生出版社,2005:105-106.

[4］黃清泉,夏振民.藥品細(xì)菌內(nèi)毒素檢查的實驗設(shè)計[J].中國藥學(xué)雜志,1997,32(2):72.