牛奶中硒含量測(cè)定方法的分析

呂戰(zhàn)偉

（吉林農(nóng)業(yè)大學(xué)動(dòng)物科學(xué)技術(shù)學(xué)院，長(zhǎng)春 130118）

硒是人和動(dòng)物必需的微量元素之一，是機(jī)體紅細(xì)胞谷胱甘肽過(guò)氧化物酶的組成成分。對(duì)人體的健康和生長(zhǎng)發(fā)育有一定影響[1]。1988年，中國(guó)營(yíng)養(yǎng)學(xué)會(huì)推薦7歲以上人群膳食硒的含量為50μg·d－1；2000年，美國(guó)醫(yī)學(xué)研究所推薦成年人膳食硒的需要量為 60 μg·d－1，最大耐受量為 400 μg·d－1[2]。牛奶是人體消化吸收率最高的食品之一，隨著我國(guó)人民生活水平的日益提高，牛奶已成為眾多消費(fèi)者的常規(guī)食品，許多人養(yǎng)成了定期定量食用牛奶的習(xí)慣。因此，對(duì)牛奶進(jìn)行硒強(qiáng)化是一條補(bǔ)硒的捷徑，既有利于人體吸收，也更易被消費(fèi)者所接受[3]。測(cè)定奶中的硒含量，對(duì)評(píng)估人的硒攝入量，提高人們的健康水平有重要意義。本文依據(jù)近年來(lái)對(duì)血、水、毛發(fā)、尿、內(nèi)臟組織、蔬菜糧食、人乳、奶粉、牛奶等生物樣品中硒的測(cè)定方法，綜述了牛奶中硒的分析方法，為研究者選擇合適的檢測(cè)方法提供參考。

1 樣品的采集、貯藏及前處理

1.1 奶樣的采集

奶樣品必須通過(guò)機(jī)械泵收集，操作應(yīng)符合規(guī)范。所用容器須先用洗滌劑刷洗，再用自來(lái)水沖洗干凈，30%硝酸浸泡48 h，然后用蒸餾水沖洗數(shù)次，最后再用超純水浸泡24 h烘干備用。

1.2 貯藏

采集到的乳樣品須經(jīng)過(guò)冷凍干燥，用液氮成干冰立即處理，然后于-14、-18、-20、-70℃等溫度下冷凍保存[4]。

1.3 前處理

目前，檢測(cè)硒含量的預(yù)處理方法有許多種，見附表[5]。

附表 預(yù)處理方法優(yōu)缺點(diǎn)比較

進(jìn)行牛奶預(yù)處理時(shí)，必須根據(jù)硒的物理、化學(xué)性質(zhì)以及實(shí)驗(yàn)條件來(lái)選擇合適的方法。另外，無(wú)論采用何種處理方法，最好都要做空白和回收率實(shí)驗(yàn)，以便在數(shù)據(jù)分析時(shí)做對(duì)照參考。

2 分析測(cè)定

2.1 熒光分析法

熒光分析法是利用紫外線、紅外線或波長(zhǎng)較短的可見光照射某物質(zhì)，產(chǎn)生熒光，利用熒光光譜、熒光強(qiáng)度、熒光壽命等特性及其相互關(guān)系進(jìn)行分析。此法靈敏度、精密度及準(zhǔn)確度高。顧俊等采用2,3-二氨基萘（DAN）熒光測(cè)定法測(cè)定母乳中硒，乳樣經(jīng)混合酸消化后，硒化合物轉(zhuǎn)變成四價(jià)無(wú)機(jī)硒，與DAN反應(yīng)生成4,5-苯丙苤硒腦綠色熒光物質(zhì)，能被環(huán)己烷萃取，其熒光強(qiáng)度與硒的濃度在一定條件下成正比，相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差（RSD）為2.9%，加標(biāo)回收率為92%～99%[6]。同時(shí)測(cè)定了5種品牌鮮牛奶的硒含量，結(jié)果為 14.2～21.3 μg·L－1，平均值為 19.1 μg·L－1，與王祥樸報(bào)道的 19.4 μg·kg－1相符[6-7]。胡小玲等利用優(yōu)化選擇的實(shí)驗(yàn)條件進(jìn)行氫化物發(fā)生-原子熒光光度法測(cè)定水中硒，硒濃度在0～0.20 mg·L－1范圍內(nèi)有良好的線性關(guān)系，r=0.9997，檢出限為 0.78 μg·L－1，RSD 為 2.3%～7.9%，回收率為96%～105%。此方法準(zhǔn)確、靈敏、穩(wěn)定[8]。

2.2 原子吸收光譜法

原子吸收光譜法是利用被測(cè)物質(zhì)的基態(tài)原子選擇性吸收輻射光的性質(zhì)進(jìn)行定量分析。為了獲得足夠的靈敏度，首先將待測(cè)物樣品中的硒還原成揮發(fā)性氧化物。使其與共存離子分離，這就消除了由于分子吸收或光散射引起的非特征光線損失和某些共存元素的干擾。譚力紅等研究用火焰原子吸收分光光度法間接地測(cè)定水中痕量硒，與直接法測(cè)定硒相比，這種間接測(cè)定硒的方法有效地克服了直接法測(cè)定硒過(guò)程中的干擾偏差，用該方法測(cè)定水樣中的硒，回收率為 96%～104%，檢出限為 0.038 μg·mL－1，RSD為3.8%[9]。李付江等用石墨爐原子吸收法測(cè)定牛奶中的硒，以鈀和鎂為基體改進(jìn)劑，加入Triton X-100改善樣液的表面張力，使硒的灰化溫度提高到1 400℃，可提高測(cè)定的可靠性[10]。對(duì)多個(gè)牛奶樣品測(cè)定，RSD＜10%，加標(biāo)回收率為94%～104%，精密度和準(zhǔn)確度均較好，測(cè)定方法簡(jiǎn)便、快捷。

2.3 電感耦合等離子體質(zhì)譜法

電感耦合等離子體質(zhì)譜法（ICP-MS）是一種用于超靈敏的多元素分析和同位素測(cè)量的現(xiàn)代分析技術(shù)，特別是在克服氬基離子干擾、提高靈敏度方面提供了有效途徑，ICP-MS與各種在線分離技術(shù)的聯(lián)用已廣泛應(yīng)用在硒形態(tài)分析中，高分辨（或碰撞室）MC-ICP-MS能夠獲得表面電離質(zhì)譜（TIMS）相媲美的同位素豐度比測(cè)定結(jié)果，其靈敏度高、用樣量少、測(cè)量時(shí)間短[11]。于振花等采用微波消解-電感耦合等離子體質(zhì)譜對(duì)國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)灌木枝葉和對(duì)蝦及國(guó)際標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)角鯊肉和龍蝦肝胰臟進(jìn)行分析，所得結(jié)果與其參考值吻合較好，硒元素的檢出限為0.18 μg·L－1，3 次測(cè)定的 RSD＜5%。對(duì)市場(chǎng)上的富硒產(chǎn)品進(jìn)行硒含量的檢測(cè)，發(fā)現(xiàn)雞蛋清中的硒含量10.4 mg·kg－1，高于雞蛋黃中的硒含量 7.4 mg·kg－1。

2.4 其他方法

對(duì)于硒的測(cè)定方法，還有發(fā)射光譜法、色譜法、中子活化分析法和化學(xué)發(fā)光淬滅法等。聯(lián)用技術(shù)將為人們對(duì)硒進(jìn)行徹底地分析提供更方便、更快速的分析方法，尤其是色譜與原子光譜、熒光光譜、分光光度法和其他技術(shù)的聯(lián)用。

3 小結(jié)

當(dāng)前牛奶中微量硒的檢測(cè)工作仍存在著諸多困難，因此在實(shí)際工作中，要根據(jù)樣品的數(shù)量、性質(zhì)、含硒量以及其他對(duì)測(cè)定的特殊要求，選擇合適的分析方法。

[1] 孔祥瑞.必需微量元素的營(yíng)養(yǎng)、生理及臨床意義[M].合肥:安徽科學(xué)技術(shù)出版社,1982.

[2] 王加啟,王連群,卜登攀,等.奶牛日糧中添加富硒酵母對(duì)乳硒和血清硒含量的影響[J].中國(guó)畜牧獸醫(yī),2008,35（4）:13-16.

[3] 孫微.富硒牛奶的生產(chǎn)工藝及其開發(fā)[J].中國(guó)食物與營(yíng)養(yǎng),2005（11）:45-46.

[4] 奚利群.牛乳中的硒及其分析方法[J].中國(guó)食物與營(yíng)養(yǎng),2001,（4）:33.

[5] J E坎特爾,Cantle J E編,黃德玲譯.原子吸收光譜分析[M].北京:科學(xué)技術(shù)文獻(xiàn)出版社,1990.

[6] 顧俊,王窕人.熒光分光光度法測(cè)定母乳中硒[J].中國(guó)公共衛(wèi)生,2001,17（9）:830.

[7] 王祥樸.衛(wèi)生學(xué)[M].北京:人民衛(wèi)生出版社,1997.

[8] 胡小玲,陳劍剛,張瑰,等.氫化物原子熒光法測(cè)定水中硒優(yōu)化條件選擇[J].現(xiàn)代科學(xué)儀器,2003（5）:35-36.

[9] 譚力紅,祝鳳榮.火焰原子吸收法間接測(cè)定水中硒[J].華南師范大學(xué)學(xué)報(bào)（自然科學(xué)版）,2000（1）:77-81.

[10] 李付江,劉萍,劉巖.石墨爐原子吸收法直接測(cè)定牛奶中硒[J].環(huán)境監(jiān)測(cè)管理與技術(shù),2005,17（3）:35.

[11] 王軍,劉叢強(qiáng),王瑩瑩.電感耦合等離子體質(zhì)譜測(cè)量硒的研究進(jìn)展[J].質(zhì)譜學(xué)報(bào),2008,29（5）:311-317.