HPLC法測定愈風(fēng)寧心軟膠囊中葛根素的含量

河北省中醫(yī)院 程 杰 劉 姣 楊旭杰 陳 哲 劉文輝 陳品英 （石家莊 050011）

愈風(fēng)寧心軟膠囊由葛根單味藥材組成,具有解痙止痛,增強(qiáng)腦及冠脈血流量等作用。臨床用于高血壓頭暈,頭痛,頸項(xiàng)疼痛,冠心病,心絞痛,神經(jīng)性頭痛,早期突發(fā)性耳聾等癥的治療。本品為軟膠囊劑,所含輔料成分復(fù)雜,干擾大,給含量測定帶來了很大困難,本文采用高效液相色譜法對(duì)其所含主要成分葛根素進(jìn)行了含量測定研究。

1 儀器、試藥

LC-10ATvp高效液相色譜儀 （日本島津）、SPD-10Avp型紫外檢測器 （日本島津）;色譜柱為 C 18柱 （250 mm×4.6mm迪馬公司）、葛根素 （0752-200209）由中國藥品生物制品檢定所提供、愈風(fēng)寧心軟膠囊、乙腈 （色譜純）、其余試劑均為分析純。

2 實(shí)驗(yàn)方法和結(jié)果

2.1 色譜條件 色譜柱:Kromasil-C18（250mm×4.6 mm,5μm）、流動(dòng)相 ∶乙腈 -0.1%磷酸溶液 （12∶88）、檢測波長:250nm、流速:1m L/m in、進(jìn)樣量 20μL、理論塔板數(shù)以葛根素峰計(jì)應(yīng)不低于 4 000。

2.2 供試品溶液的制備 取本品內(nèi)容物,混勻,取約0.15g,精密稱定,置具塞錐形瓶中,精密加入 70%甲醇溶液 20mL,精密稱定。加熱回流提取 30 min,放冷,用70%甲醇補(bǔ)足減失的重量,搖勻,過濾,精密量取續(xù)濾液1.0mL置10mL量瓶中,加 70%甲醇稀釋至刻度,搖勻,離心 （5 000 r/min,5m in）,取上清液作為供試品溶液。

2.3 對(duì)照品溶液的制備 精密稱取葛根素對(duì)照品適量,精密稱定,加 70%甲醇溶解并稀釋至刻度,制備成濃度為100μg/m L溶液,作為對(duì)照品溶液。

2.4 陰性對(duì)照溶液的制備 按軟膠囊工藝要求制備,制成不含葛根的成品,按2.3項(xiàng)下方法操作,制得空白對(duì)照溶液。

2.5 方法學(xué)考察

2.5.1 線性關(guān)系考察:精密量取 2.4項(xiàng)下對(duì)照品溶液1.0,2.0,4.0,6.0,8.0,10.0mL,加 70%甲醇定容于10mL量瓶中,搖勻。在上述色譜條件下,依次進(jìn)樣,每次 20μL。以葛根素對(duì)照品濃度為橫坐標(biāo),以峰面積積分值為縱坐標(biāo),繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線,并計(jì)算線性回歸方程為Y=74 100.30X+23 402,r=0.999,結(jié)果表明葛根素在 0.2～2.0μg范圍內(nèi),其峰面積與進(jìn)樣量有良好的線性關(guān)系。

2.5.2 空白試驗(yàn):精密吸取對(duì)照品溶液、供試品溶液及陰性液各 20μL,注入液相色譜儀,按上述色譜條件測定。結(jié)果陰性對(duì)照液在與葛根素對(duì)照品相同保留時(shí)間處未顯色譜峰,故認(rèn)為無干擾。

2.5.3 精密度試驗(yàn):取對(duì)照品溶液 （40μg/mL）20 μL,注入液相色譜儀,測定峰面積,連續(xù)測定 6次。結(jié)果葛根素的 RSD為 1.40%（n=6）,表明儀器精密度良好。

2.5.4 穩(wěn)定性試驗(yàn):取供試品溶液,在 10 h內(nèi)分別進(jìn)樣5次 （0,2,4,8,10 h）,結(jié)果葛根素進(jìn)樣的 RSD為1.21%,表明供試品溶液在 10 h內(nèi)基本穩(wěn)定。

2.5.5 重復(fù)性試驗(yàn):按上述方法對(duì)批號(hào)為 090301的樣品進(jìn)行提取測定,共測定 6份。結(jié)果葛根素平均含量為31.38mg/粒,RSD為 1.52%,表明該方法重現(xiàn)性良好。

2.5.6 回收率試驗(yàn):采用加樣回收法,取批號(hào)為 090301的樣品 （含量葛根素 62.7mg/g）加入葛根素對(duì)照品,按含量測定項(xiàng)下方法進(jìn)行,計(jì)算回收率,結(jié)果見表1。

2.6 含量測定 制備 3批樣品的供試品液,吸取對(duì)照品溶液、供試品溶液各 20μL,注入液相色譜儀,測定峰面積,按外標(biāo)法計(jì)算樣品中葛根素的含量,結(jié)果見表 2。

3 討論

3.1 本實(shí)驗(yàn)供試品溶液制備中對(duì)甲醇、50%甲醇、70%甲醇、乙醇、50%乙醇、70%乙醇 6種提取溶劑提取效果進(jìn)行了比較;并且比較了 3種提取方法:振搖提取、超聲提取和回流提取,同時(shí)對(duì)不同時(shí)間的提取效果進(jìn)行了比較。因本品為軟膠囊劑,其中輔料較多,對(duì)供試品溶液的制備帶來不利影響,通過對(duì)以上項(xiàng)目的考察,結(jié)果證明以 70%甲醇為提取溶劑,樣品經(jīng)回流提取30min,葛根素即可提取完全,故樣品采用 70%甲醇為提取溶劑,加熱回流 30 min,制備供試品溶液。

表1 葛根素回收率試驗(yàn)考察結(jié)果

表2 樣品中葛根素的含量 （n=3）

3.2 實(shí)驗(yàn)采用了甲醇 -0.5%磷酸溶液[1]、甲醇 -水[2]、乙腈-水[3]系統(tǒng)作為流動(dòng)相均不能達(dá)到基線分離。本研究采用乙腈-0.1%磷酸溶液為流動(dòng)相,得到分離效果較好。

3.3 以上試驗(yàn)結(jié)果表明,本文測定方法簡便易行,結(jié)果準(zhǔn)確,重現(xiàn)性好,可有效地控制該制劑的質(zhì)量。

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（2010-01-25 收稿）