可溶性轉(zhuǎn)鐵蛋白受體在急性溶血性貧血診斷中的意義

劉 馮,莫東華,劉智屏,文飛球

轉(zhuǎn)鐵蛋白受體 (transferring receptor,TfR)是一種跨膜糖蛋白,存在于大多數(shù)細(xì)胞表面,正常情況下,細(xì)胞內(nèi)鐵代謝所需的鐵離子需經(jīng)過 TfR進(jìn)行轉(zhuǎn)運(yùn),可溶性轉(zhuǎn)鐵蛋白受體 (soluable transferring receptor,sTfR)是細(xì)胞膜 TfR經(jīng)蛋白水解酶作用生成的片段,在血漿或血清中能進(jìn)行檢測(cè)[1],其水平與細(xì)胞 TfR呈平行關(guān)系,因此檢測(cè)血清 sTfR水平可間接反映總 TfR水平。由于大多數(shù)血清 sTfR來自紅系骨髓前體細(xì)胞,受體數(shù)量的多少和紅細(xì)胞生成速度有關(guān)[2-3]。急性溶血狀態(tài)下,紅細(xì)胞生成速度增加,因此,有理由將血清 sTfR作為評(píng)價(jià)溶血性貧血的指標(biāo)。由于以往的研究主要側(cè)重于血清 sTfR與兒童缺鐵性貧血的相互關(guān)系的研究[4],個(gè)別研究雖然顯示溶血性貧血時(shí)該指標(biāo)有變化[5-6],但血清 sTfR在急性溶血性貧血中的意義尚待進(jìn)一步明確。本研究檢測(cè) 34例不同類型的溶血性貧血患兒的血清 sTfR水平,旨在為急性溶血性貧血的診斷提供新的依據(jù)。

1 資料與方法

1.1 一般資料 選取 2003年 3月—2006年2月在我院就診的各種類型的急性溶血性貧血患兒 34例作為溶貧組,這些患兒雖有慢性溶血性貧血疾病 (地中海貧血),但血紅蛋白 (Hb)在一段時(shí)間內(nèi)處于一個(gè)相對(duì)穩(wěn)定的水平,而入院前因各種誘因在短期內(nèi)出現(xiàn)溶血急性加重 (發(fā)作性),Hb水平迅速下降。34例患兒中男 22例,女 12例,年齡 6個(gè)月 ～12歲。選取同期進(jìn)行體檢的正常兒童或上呼吸道感染的非貧血兒童共 12例作為對(duì)照組,男 8例,女 4例,年齡 6個(gè)月 ～12歲。各種溶血性貧血的診斷依據(jù)張之南等主編的 《血液病診斷及療效標(biāo)準(zhǔn) 》 (第 3版 )。

1.2 樣本采集及保存 體檢兒童于體檢時(shí)抽取外周靜脈血 2 ml,其他兒童均于入院后第 2天抽取外周靜脈血 2 ml,分離血清置 -80℃冰箱保存。

1.3 血清 sTfR的測(cè)定[7]有關(guān)操作方法嚴(yán)格按試劑盒說明書進(jìn)行,先進(jìn)行預(yù)實(shí)驗(yàn),條件穩(wěn)定后再進(jìn)行樣本檢測(cè)。所有樣品均于整批內(nèi)測(cè)完。方法如下:(1)將 20μl標(biāo)準(zhǔn)品或血清樣本加到包被有鼠抗 sTfR單抗的 96孔板的孔中,輕輕混勻后,室溫孵育1 h;(2)棄血清,用 400μl的洗液洗孔 4次,然后加100μl HRP-鼠抗 sTRF二抗,室溫孵育 1 h;(3)棄二抗,用 400μl的洗液洗孔 4次,加 100μl顯色底物,室溫避光孵育 30 min;(4)加 100μl終止液終止顯色反應(yīng),在 30min內(nèi)測(cè)定其吸光度值 (A450)。

1.4 網(wǎng)織紅細(xì)胞 (Ret)絕對(duì)值計(jì)數(shù) 為進(jìn)一步探討血清sTfR的變化是否受前體紅細(xì)胞變化的影響,對(duì) 11例同一類型而不同程度的溶血性貧血 (β-地中海貧血)患兒的外周血Ret絕對(duì)值進(jìn)行計(jì)數(shù),分析血清 sTfR與 Ret絕對(duì)值計(jì)數(shù)的關(guān)系。Ret絕對(duì)值計(jì)數(shù)按照羅春麗等主編的 《臨床檢驗(yàn)基礎(chǔ)》中描述的方法進(jìn)行操作。

1.5 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法 應(yīng)用 SPSS 12.0統(tǒng)計(jì)學(xué)軟件進(jìn)行分析,計(jì)量資料數(shù)據(jù)用±s)表示,多組數(shù)據(jù)間比較采用單因素方差分析,組間兩兩比較用 q檢驗(yàn),P＜0.01為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。Ret絕對(duì)值計(jì)數(shù)與 sTfR水平的關(guān)系采用直線相關(guān)分析。

2 結(jié)果

2.1 血清 sTfR檢測(cè)標(biāo)準(zhǔn)曲線的建立 分別采用 6種不同濃度的標(biāo)準(zhǔn)品建立標(biāo)準(zhǔn)曲線,每一濃度測(cè)定3個(gè)平行值,計(jì)算平均值 (見圖 1)。

2.2 不同類型的溶血性貧血患兒血清 sTfR水平 不同類型的溶血性貧血患兒及對(duì)照組兒童的血清 sTfR水平間差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義 (F=10.96,P＜0.01)。溶貧組和對(duì)照組的血清 sTfR水平分別為 (49.4±19.1)nmol/L和 (13.8±3.4)nmol/L,兩者間差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義 (q=5.80,P＜0.01,見表 1)。

2.3 地中海貧血患兒的血清 sTfR與外周血 Ret絕對(duì)值計(jì)數(shù)的關(guān)系 11例 β-地中海貧血患兒的血清 sTfR水平與外周血Ret絕對(duì)值計(jì)數(shù)呈直線正相關(guān) (r=0.8011,經(jīng)相關(guān)系數(shù)的 t檢驗(yàn),t=4.02,P＜0.0025,見表 2、圖 2)。

3 討論

圖 1 血清 sTfR檢測(cè)標(biāo)準(zhǔn)曲線Figure 1 Serem sTfR testing standard curve

圖 2 11例 β-地中海貧血患兒外周血 Ret絕對(duì)值計(jì)數(shù)和血清 sTfR的關(guān)系Figure 2 Relation between peripheral blood reticulocyte absolute value count and serem sTfR in 11 children with thalassaemia

表 1 不同類型溶血性貧血患兒血清 sTfR變化Table 1 Serem sTfR in children with different types of hemolytic anem ia

表 2 11例β-地中海貧血患兒的血紅細(xì)胞、Hb、Ret和血清 sTfR的值Table 2 Erythrocyte,hemoglobin,reticulocyte and serem sTfR in 11 children with thalassaemia

TfR是一種干預(yù)細(xì)胞攝取鐵,為細(xì)胞增殖和血紅蛋白合成提供所必需的鐵離子不可缺少的膜蛋白質(zhì)[8]。機(jī)體 80%以上的 TfR存在于骨髓紅細(xì)胞表面,其調(diào)控轉(zhuǎn)鐵蛋白由細(xì)胞外向細(xì)胞內(nèi)轉(zhuǎn)運(yùn)鐵。細(xì)胞表面的受體數(shù)目受鐵的需要量調(diào)節(jié),在紅細(xì)胞發(fā)育過程中,細(xì)胞對(duì)鐵的攝取率與 TfR數(shù)量呈正相關(guān),人體80%以上的鐵被紅系細(xì)胞用于合成血紅蛋白,因此紅細(xì)胞膜上需表達(dá)適量的 TfR以滿足細(xì)胞內(nèi)鐵的需要。細(xì)胞內(nèi)鐵是調(diào)節(jié)細(xì)胞表達(dá) TfR的最主要因素。而 sTfR是 TfR的一個(gè)片段,主要存在于血液中,其含量較少受惡性腫瘤、炎癥、慢性疾病等因素的影響,并與機(jī)體內(nèi)總 TfR數(shù)量成正比例,能間接、準(zhǔn)確地反映 TfR的數(shù)量。在缺鐵性貧血時(shí),細(xì)胞內(nèi)鐵減少,對(duì)鐵的需要量增加,細(xì)胞表面表達(dá)的 TfR明顯增加,以至血清 sTfR水平也明顯升高;相反,當(dāng)細(xì)胞內(nèi)鐵水平過剩時(shí),TfR表達(dá)減少。國內(nèi)外許多對(duì)血清 sTfR的研究主要?jiǎng)t重于缺鐵性貧血,許多學(xué)者認(rèn)為血清 sTfR可作為診斷缺鐵性貧血的重要指標(biāo)[9-10]。近年來的一些研究表明 TfR隨紅細(xì)胞生成率的高低而變化,其機(jī)制可能是大部分 TfR來源于骨髓幼紅細(xì)胞,受到幼紅細(xì)胞生成變化的直接影響[8,11]。骨髓紅細(xì)胞增生可使 TfR水平升高到正常范圍的 8～20倍。血清 sTfR的變化也逐步用于紅細(xì)胞生成評(píng)價(jià)。急性溶血性貧血時(shí),骨髓紅細(xì)胞增生明顯活躍,血清 sTfR理論上應(yīng)當(dāng)有所變化。國外有報(bào)道表明紅系增生低下的患者其血清 sTfR水平降低,如再生障礙性貧血患者血清 sTfR為正常人的 47%,并有溶血性貧血患者血清 sTfR水平增高的報(bào)道[4-5,12]。本研究對(duì) 34例溶血性貧血患兒的血清 sTfR進(jìn)行檢測(cè),結(jié)果顯示,溶血性貧血患兒血清 sTfR水平明顯高于非貧血兒童,表明骨髓紅細(xì)胞增生旺盛的患兒其血清sTfR水平亦明顯增高,提示血清 sTfR可作為診斷溶血性貧血的一項(xiàng)間接指標(biāo)。在不同類型的溶血性貧血患兒中,地中海貧血患兒血清 sTfR水平升高最為明顯,其中 β-地中海貧血患兒最高,而 G-6-PD組雖有所增高,但僅為對(duì)照組的 2倍,結(jié)果提示,在慢性溶血的基礎(chǔ)上出現(xiàn)急性溶血現(xiàn)象時(shí),血清sTfR升高更為明顯一些,可能是因?yàn)榈刂泻Ｘ氀純簷C(jī)體紅細(xì)胞不斷提前破壞,骨髓始終處于一種增生活躍狀態(tài),幼紅細(xì)胞的生成、釋放較其他急性溶血更為明顯所致。

Ret是血中新生紅細(xì)胞的標(biāo)志,它可以反映骨髓有效制造和釋放紅細(xì)胞的能力。臨床上常用 Ret百分?jǐn)?shù)表示,為受紅細(xì)胞基數(shù)影響的相對(duì)數(shù),Ret絕對(duì)值是測(cè)定紅細(xì)胞中 Ret的實(shí)際數(shù)值,故認(rèn)為換算成絕對(duì)值更為合理[13]。由于血清 sTfR大部分來源于幼紅細(xì)胞,而溶血性貧血患兒多表現(xiàn)為骨髓增生活躍,外周血中 Ret增高,因此我們推測(cè):外周血 Ret數(shù)量的高低可能與血清 sTfR水平存在一定的相關(guān)性,為證實(shí)這一推測(cè),有必要進(jìn)一步研究兩者變化的相關(guān)關(guān)系。本研究已經(jīng)證實(shí),急性溶血性貧血患兒血清 sTfR的水平明顯高于對(duì)照兒,但不同類型的溶血性貧血患兒血清 sTfR水平差異較大,為此我們采用同一類型的急性溶血性貧血 (β-地中海貧血)患兒作為研究對(duì)象探討血清 sTfR水平與 Ret絕對(duì)值計(jì)數(shù)的關(guān)系,以避免不同類型的溶血性貧血患兒血清 sTfR差異較大而影響數(shù)據(jù)的分析,結(jié)果顯示血清 sTfR水平與 Ret絕對(duì)值計(jì)數(shù)呈正相關(guān),提示外周血幼紅細(xì)胞數(shù)量可能影響血清 sTfR水平,sTfR可能主要來源于幼紅細(xì)胞,因此血清 sTfR水平變化可作為紅細(xì)胞生成評(píng)價(jià)的指標(biāo),也進(jìn)一步為血清 sTfR作為溶血性貧血的診斷指標(biāo)提供了依據(jù)。

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