金絲草脂溶性化學(xué)成分研究*

陳國(guó)偉，李 鑫，史志龍，趙桂琴

（承德醫(yī)學(xué)院中藥學(xué)專(zhuān)業(yè)07級(jí)，河北承德 067000；2.指導(dǎo)教師）

金絲草又名黃毛草、筆仔草、貓尾草，為禾本科金發(fā)草屬植物金絲草Pogonatherum crinitum （Thunb.）Kunth的干燥全草。文獻(xiàn)記載，本品性寒，無(wú)毒，生于河邊、墻隙、山坡和潮濕田圩，具有清熱、解暑、利尿之功效[1]。在我國(guó)民間用于治療感冒高熱、中暑、尿路感染、腎炎水腫、黃疸型肝炎和糖尿病等癥。金絲草主要分布于我國(guó)浙江、江西、福建及臺(tái)灣等地，資源十分豐富。在前期研究工作中，作者通過(guò)體外抗HBV活性篩選實(shí)驗(yàn)研究，發(fā)現(xiàn)金絲草的70%乙醇提取物對(duì)乙型肝炎病毒（HBV）表面抗原的分泌具有劑量依賴(lài)性的抑制作用，半數(shù)抑制濃度（IC50）為108.5μg·mL-1[2]。本研究報(bào)道：作者采用活性追蹤分離方法從中分離得到的4個(gè)脂溶性化合物：苜蓿素（Ⅰ）、3',4',5,5',7-五甲氧基黃酮（Ⅱ）、β-谷甾醇（Ⅲ）、β-胡蘿卜苷（Ⅳ）?；衔铫?、Ⅱ、Ⅲ、Ⅳ均為首次從金發(fā)草屬植物中分離得到。

1 儀器材料

島津UV2501PC紫外分光光度儀；日本電子JUMECA-400超導(dǎo)核磁共振儀；Micromass Zabspec高分辨磁質(zhì)譜儀；顯微熔點(diǎn)測(cè)定儀（X-4型）。AB-8大孔吸附樹(shù)脂為南開(kāi)大學(xué)化工廠產(chǎn)品；柱色譜硅膠為青島海洋化工廠產(chǎn)品；聚酰胺為滄州寶恩化工有限公司產(chǎn)品。

金絲草藥材2006年5月購(gòu)于安徽亳州藥材交易中心，經(jīng)軍事醫(yī)學(xué)科學(xué)院放射與輻射醫(yī)學(xué)研究所副研究員、生藥學(xué)博士李彬鑒定為禾本科金發(fā)草屬植物金絲草Pogonatherum crinitum（Thunb.）Kunth的干燥全草。

2 提取分離

金絲草干燥全草20kg，用10倍量體積分?jǐn)?shù)為70%的乙醇水溶液浸泡提取3次，每次72h，濾過(guò)，合并濾液，減壓回收溶劑得70%乙醇提取物。將提取物以適量水稀釋?zhuān)来斡檬兔选⒙确?、乙酸乙酯及水飽和正丁醇萃取。氯仿部?00g用AB-8硅膠柱分離，分別以氯仿-甲醇（20∶1，15∶1）洗脫得Fr.1-5，F(xiàn)r.1用結(jié)晶法純化，得化合物Ⅰ（20mg）；Fr.3用聚酰胺柱分離，結(jié)晶法純化，得化合物Ⅱ（23mg）；Fr.4用結(jié)晶法純化，得化合物Ⅲ（18mg）；Fr.5用結(jié)晶法純化，得化合物Ⅳ（12mg）。

3 結(jié)構(gòu)鑒定（見(jiàn)附圖）

化合物Ⅰ：黃色粉末，鹽酸-鎂粉反應(yīng)和三氯化鋁反應(yīng)陽(yáng)性，表明為黃酮類(lèi)化合物；ESI-MS分析表明其分子量為330。1HNMR（DMSO-d6，400MHz）中δ13.0 （1H,brs），10.86 （1H,brs），9.39（1H,brs）表示存在3個(gè)活潑羥基質(zhì)子，δ7.02（1H,s）為黃酮3位質(zhì)子的特征信號(hào)，3.89（6H,s）示有兩個(gè)化學(xué)環(huán)境一致的甲氧基，推斷B環(huán)2',6'或3',5'位存在2個(gè)甲氧基，7.34（2H,s）的2個(gè)質(zhì)子則歸屬為2',6'或3',5'位。結(jié)合13CNMR （DMSO-d6,100 MHz）中δ148.2,139.8的信號(hào)存在，示該化合物為連三氧取代，故化合物B環(huán)為3',5'-二甲氧基-4'-羥基取代。6.57（1H,d,J=2.0Hz），6.21（1H,d,J=2.0Hz）為典型的間位偶合苯環(huán)質(zhì)子信號(hào)，歸屬為6,8位質(zhì)子。13CNMR（DMSO-d6,100MHz）顯示了15個(gè)黃酮骨架碳和兩個(gè)化學(xué)環(huán)境相同的甲氧基碳。經(jīng)與文獻(xiàn)[3]比較，該化合物鑒定為4',5,7-三羥基-3',5'-二甲氧基黃酮，即苜蓿素。

化合物Ⅱ：淡黃色片狀結(jié)晶（甲醇），鹽酸-鎂粉反應(yīng)和三氯化鋁反應(yīng)陽(yáng)性，表明為黃酮類(lèi)化合物；ESI-MS分析表明其分子量為372。1HNMR（DMSO-d6,600MHz）中δ 6.90（1H,s）為黃酮3位質(zhì)子的特征信號(hào)，δ6.92（1H,d,J=2.4Hz），6.52（1H,d,J=2.4Hz）為典型的間位偶合苯環(huán)質(zhì)子信號(hào)，歸屬為6，8位質(zhì)子，δ3.91（6H,s）示有兩個(gè)化學(xué)環(huán)境一致的甲氧基，推斷B環(huán)2',6'或3',5'位存在2個(gè)甲氧基，δ7.31（2H,s）的2個(gè)質(zhì)子則歸屬為2',6'或3',5'位。結(jié)合13CNMR（DMSO-d6，100MHz）δ153.2,140.2的信號(hào)存在，示該化合物為連三氧取代，故化合物B環(huán)為3',4',5'-三甲氧基取代。13CNMR（DMSO-d6,150 MHz）顯示了15個(gè)黃酮骨架碳和兩個(gè)化學(xué)環(huán)境相同的甲氧基，經(jīng)與文獻(xiàn)[4]對(duì)照，該化合物鑒定為3',4',5,5',7-五甲氧基黃酮。

化合物Ⅲ：無(wú)色針狀結(jié)晶（乙酸乙酯），mp137-138℃，易溶于氯仿和丙酮，Libermann-Burchard反應(yīng)呈陽(yáng)性，示為甾類(lèi)物質(zhì)。EI-MS分析表明該化合物分子量為414，并出現(xiàn)脫水峰（396），表明分子中含有羥基，同時(shí)質(zhì)譜中出現(xiàn)一系列質(zhì)量相差為14的碎片單元，1HNMR（CDCl3,600MHz）譜中δ5.35（1H,m）為烯氫信號(hào)，高場(chǎng)區(qū)出現(xiàn)了多個(gè)甲基、亞甲基和次甲基信號(hào)重疊形成的“掃帚峰”，通過(guò)薄層層析與β-谷甾醇標(biāo)準(zhǔn)品對(duì)照，TLC行為完全一致，混合熔點(diǎn)不下降，該化合物鑒定為β-谷甾醇。

化合物Ⅳ：白色粉末，mp268-270℃，難熔于氯仿、甲醇等溶劑，易溶于吡啶。Molish反應(yīng)和Liebermann-Burchard反應(yīng)呈陽(yáng)性。FAB-MS中出現(xiàn)414，397，381峰，具有β-谷甾醇的裂解特征。1HNMR（DMSO-d6,600 MHz）譜中δ4.21（1H,d,J=7.6Hz）為葡萄糖端基質(zhì)子信號(hào)，高場(chǎng)區(qū)出現(xiàn)了多個(gè)甲基、亞甲基和次甲基信號(hào)重疊形成的“掃帚峰”，通過(guò)薄層層析與β-胡蘿卜苷標(biāo)準(zhǔn)品對(duì)照，TLC行為完全一致，混合熔點(diǎn)不下降，與文獻(xiàn)[5]對(duì)照鑒定為β-胡蘿卜苷。

附圖 化合物Ⅰ-Ⅳ結(jié)構(gòu)圖

[1]黃泰康,丁志遵,趙守訓(xùn),等.現(xiàn)代本草綱目[M].北京:中國(guó)醫(yī)藥科學(xué)技術(shù)出版社,2001.1633.

[2]趙桂琴.素馨花化學(xué)成分及抗HBV活性的研究[D].北京:軍事醫(yī)學(xué)科學(xué)院放射與輻射醫(yī)學(xué)研究所,2008.16.

[3]陳泉,吳立軍,王軍,等.中藥淡竹葉的化學(xué)成分研究 [J].沈陽(yáng)藥科大學(xué)學(xué)報(bào),2002,19（1）:23-24.

[4]Alan WF,John RL.Flavonoids from Merrillia caloxylon[J].Phytochemistry,1974,13（6）:1561-1564.

[5]郄建坤.中藥地楓鎮(zhèn)痛活性成分研究 [D].北京: 軍事醫(yī)學(xué)科學(xué)院毒物藥物研究所,2000.40.