HPLC法測定鹽酸小檗堿β-環(huán)糊精包合物中鹽酸小檗堿的含量

王汝興，朱炎杰，于海龍

（承德醫(yī)學(xué)院，河北承德 067000）

黃柏為常用中藥，性寒、味苦，具有清熱燥濕、解毒療瘡、退虛熱之功效，用于濕熱痢疾、黃疸、帶下、熱淋、盜汗、遺精等癥狀[1]。黃柏中含有小檗堿、黃柏堿等多種生物堿及內(nèi)酯、甾醇等成分，其中鹽酸小檗堿為主要有效成分[2，3]。但由于鹽酸小檗堿在常溫下的溶解度比較低，影響了臨床療效。本研究采用飽和技術(shù)制備了鹽酸小檗堿β-環(huán)糊精包合物，以增強(qiáng)其在體內(nèi)的溶解度并最終提高其生物利用度。同時本研究建立的分析方法可以快速、準(zhǔn)確的測定β-環(huán)糊精包合物中鹽酸小檗堿的含量。

1 儀器與試藥

高效液相色譜儀，日本分光公司；SpherisorbC18柱（4.6mm×25mm，5μm）。鹽酸小檗堿標(biāo)準(zhǔn)品，中國藥品生物制品鑒定所；黃柏，承德市藥材公司；β-環(huán)糊精，中國醫(yī)藥集團(tuán)上?；瘜W(xué)試劑公司。

2 方法與結(jié)果

2.1 色譜條件 SpherisorbC18柱（4.6mm×25mm，5μ m）；流動相：水-乙腈 （69：31），用0.3%三乙胺、磷酸調(diào)至pH為3.0；檢測波長：350nm；柱溫：30℃；流速：1ml/min，進(jìn)樣量10μl。

2.2 鹽酸小檗堿的提取及精制[4]黃柏粗粉（20-40目）加石灰乳攪拌均勻，放入滲濾桶內(nèi)以石灰水浸泡6h，過濾，濾液加NaCl，攪拌，靜置12h，過濾。沉淀以熱水溶解，趁熱過濾，以5%鹽酸調(diào)pH為2.0，靜置12h，過濾。沉淀以水洗至中性，加熱水溶解，趁熱過濾，濾液于水浴加熱至澄清，加濃鹽酸調(diào)pH為2.0，攪拌放冷，過濾。沉淀以水洗至中性，得到鹽酸小檗堿結(jié)晶，80℃干燥。

2.3 鹽酸小檗堿β-環(huán)糊精包合物的制備[5]取2g鹽酸小檗堿，溶于10ml無水乙醇中。另取100gβ-環(huán)糊精溶于適量蒸餾水中，攪拌、加熱使全部溶解，冷卻。將鹽酸小檗堿無水乙醇溶液緩慢滴加到鹽酸小檗堿水溶液中，室溫下攪拌10h，減壓抽濾，以蒸餾水洗滌沉淀3次，真空干燥得棕色晶體，即為鹽酸小檗堿β-環(huán)糊精包合物。

2.4 標(biāo)準(zhǔn)曲線的建立 精密稱取鹽酸小檗堿對照品1.5mg，置50ml容量瓶中，加甲醇至刻度。精密吸取0.5、1.0、1.5、2.0、2.5、4.0ml，分別置10ml容量瓶中，加甲醇至刻度，搖勻。分別吸取上述溶液10μl進(jìn)樣，以進(jìn)樣量（μg）為橫坐標(biāo)，峰面積積分值為縱坐標(biāo)，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線?；貧w方程為：Y=26269.6X-350.4，r=0.9999（n=6），RSD=1.02%，線性范圍為1.5-12.0μg。

2.5 供試品溶液的制備 精密稱取鹽酸小檗堿β-環(huán)糊精包合物2.5g，置100ml容量瓶中，加適量蒸餾水溶解后，加蒸餾水至刻度，搖勻，過0.45μm微孔濾膜，續(xù)濾液即為供試品溶液。

2.6 精密度試驗(yàn) 以鹽酸小檗堿對照品溶液10μl進(jìn)樣，重復(fù)進(jìn)樣5次，測定鹽酸小檗堿峰面積，計(jì)算RSD為1.02%。

2.7 重復(fù)性試驗(yàn) 稱取同批制做的鹽酸小檗堿β-環(huán)糊精包合物，按2.5的方法制備供試品溶液，重復(fù)測定5次，測定鹽酸小檗堿的峰面積，RSD=1.77%（n=5）。

2.8 加樣回收率試驗(yàn) 精密稱取已知含量的鹽酸小檗堿β-環(huán)糊精包合物，加入適量鹽酸小檗堿對照品，按供試品溶液制做方法制備，按樣品含量測定方法測定6次，計(jì)算回收率，結(jié)果見附表。

附表 加樣回收率試驗(yàn)結(jié)果（n=6）

2.9 樣品測定 分別稱取三批制做的鹽酸小檗堿β-環(huán)糊精包合物各1份，每份1.0g，按2.5的方法制備供試品溶液，測定鹽酸小檗堿含量。三批樣品鹽酸小檗堿含量（%）：20080618為2.025，20080621為2.022，20080706為2.010。

3 討論

以堿水提取黃柏中小檗堿的方法較好，原因是黃柏中除含有小檗堿外，還含有藥根堿、木蘭花堿、巴馬汀、蝙蝠葛堿、黃柏堿等以及較大量的粘液質(zhì)類雜質(zhì)，在中性或酸性水溶液中易生成難于過濾的粘性溶液，會增加提取操作中的困難。而粘液質(zhì)類雜質(zhì)具有能被石灰水很好沉淀的性質(zhì)，所以生產(chǎn)上多采用石灰乳浸取的方法，以排除粘液質(zhì)的干擾，使之有利于過濾分離，提高浸取率。

鹽酸小檗堿在230nm、265nm、350nm波長處均有強(qiáng)吸收，選用350nm作為測定波長可以有效避免其它組份干擾。流動相中加入三乙胺并調(diào)至3.0，可改善峰形，保證測定結(jié)果準(zhǔn)確可靠。本文建立的HPLC法測定β-環(huán)糊精包合物中鹽酸小檗堿含量的方法操作簡便，測定結(jié)果準(zhǔn)確可靠，可用于黃柏藥材中鹽酸小檗堿的含量測定。

[1]Ikeda Y,Kimura K,Hirayama F,et al.Controlled release of a water-solube drug,cap top ril,by a combination of hydrophilic and hydrophobic cyclodextrin derivatives[J].J Control Release,2000,66 （3）:271-280.

[2]國家中醫(yī)藥管理局《中華本草》編委會.中華本草[M].上海：上?？茖W(xué)技術(shù)出版社，1999.3775-3776.

[3]劉壽山.中藥研究文獻(xiàn)摘要[M].北京：科學(xué)出版社，1963.608-614.

[4]楊云，馮衛(wèi)生.中藥化學(xué)成分提取分離手冊[M].北京：中國中醫(yī)藥出版社，1998.300-302.

[5]趙榆林，楊波，楊明惠.鹽酸小檗堿β-環(huán)糊精包合物的體外溶出度研究[J].云南化工，2003，30（2）：1-3.