健脾化濕顆粒對IBS模型大鼠結腸NO和NOS的影響

王迎寒，陳光暉，劉玉玲，張曉峰

（承德醫(yī)學院中藥研究所，河北承德 067000）

近年來，大量國內外研究資料證實一氧化氮合酶（NOS）、一氧化氮（NO）與許多疾病密切相關，因此推測NO、NOS可能與腸易激綜合征（Irritable Bowel Syndrome,IBS）的發(fā)病也存在某種關系，可能是IBS發(fā)病機理之一。本實驗采用應激腹瀉IBS大鼠模型，探討健脾化濕顆粒對大鼠結腸NOS、NO的影響。

1 材料與方法

1.1 實驗動物分組與處理 清潔級雌性Wistar大鼠60只，體重180±20g，由河北醫(yī)科大學實驗動物中心提供（合格證號：603105）。隨機分為正常組、模型組、得舒特組、健脾化濕顆粒低劑量組、健脾化濕顆粒中劑量組和健脾化濕顆粒高劑量組，每組10只大鼠。模型組、得舒特組、健脾化濕顆粒低劑量組、健脾化濕顆粒中劑量組和健脾化濕顆粒高劑量組大鼠均建立脾虛型IBS大鼠模型，待模型成功建立后，得舒特組大鼠灌胃給予得舒特（0.03g/kg），健脾化濕顆粒低劑量組、健脾化濕顆粒中劑量組和健脾化濕顆粒高劑量組分別灌胃給予不同劑量的健脾化濕顆粒（2.5g/kg、5g/kg、10g/kg），模型組大鼠灌胃給予同等劑量的動物飲用水，各組大鼠灌胃給藥時間均為2周。

1.2 藥物與試劑 健脾化濕顆粒，由炙黃芪、茯苓、砂仁、益智仁、炒白芍等10味中藥按比例采用現(xiàn)代制劑工藝制成；得舒特，法國蘇威特制藥公司（批號：0021）?？偟鞍自噭┖?，南京建成生物工程研究所（批號：20060628）；NO檢測試劑盒，南京建成生物工程研究所（批號：20060628）；NOS分型檢測試劑盒，南京建成生物工程研究所（批號：20060628）。

1.3 IBS動物模型的建立 制備番瀉葉煎劑，濃縮制成生藥含量為0.6g/ml，冰箱保存，使用時水浴加溫至25℃。按文獻方法建立脾虛型IBS模型[1]：實驗前10h大鼠禁食，自由飲水。按10ml/kg劑量灌服番瀉葉，每日一次，灌服后即用粗制棉繩束縛大鼠后肢2h，使之行動不便、煩躁不安，造成一定的應激刺激。灌服番瀉葉持續(xù)2周，以大鼠稀便級判斷模型是否成功；2周后待模型成功建立，繼續(xù)灌胃給予大鼠番瀉葉煎劑，繼續(xù)持續(xù)2周。正常組大鼠予以動物飲用水灌胃。

1.4 觀察指標

1.4.1 大鼠稀便級[2]：稀便級表示稀便的程度，以稀便污染濾紙形成的污跡大小定級，分為 0、1、2、3、4、5、6、7共8個等級，統(tǒng)計時逐個統(tǒng)計每堆稀便的級數(shù)，然后將所有級數(shù)相加除以稀便的數(shù)目即為稀便級。分別于治療前1d（造模成功日）和治療第14d（治療結束日）統(tǒng)計各組大鼠的稀便級。

1.4.2 結腸NOS、NO含量的測定[3]：處死大鼠，打開腹腔，距肛門2cm以上取結腸，迅速稱重，加入生理鹽水制成10%的組織勻漿，3000r/min離心10min，取上清液采用硝酸還原酶法測定NOS和NO的含量。

1.5 統(tǒng)計方法 采用SPSS 11.0統(tǒng)計軟件處理數(shù)據(jù)，各組間差異的比較采用單因素方差分析。

2 結果

2.1 各組大鼠的稀便級 見表1。⑴藥物治療前1d，模型組、得舒特組、健脾化濕顆粒各劑量組大鼠稀便級比較無明顯差異（P＞0.05），均明顯高于正常組（P＜0.01）。⑵藥物治療第14d，健脾化濕顆粒中、高劑量組大鼠的稀便級明顯低于模型組和得舒特組（P＜0.01），中、高劑量組間比較無顯著差異（P＞0.05）；健脾化濕顆粒低劑量組大鼠的稀便級與得舒特組比較無明顯差異（P＞0.05）。

表1 各組大鼠治療前后的稀便級（±s）

表1 各組大鼠治療前后的稀便級（±s）

與正常組比較：1）P＜0.01；與模型組比較：2）P＜0.01；與得舒特組比較：3）P＜0.01

組別治療前1d治療第14d正常組0.1±0.3160.15±0.337模型組3.361±0.7151）4.537±0.332得舒特組3.395±0.6741）3.751±0.5172）低劑量組3.359±0.6751）3.552±0.5202）中劑量組3.379±0.6831）2.073±0.7052）3）高劑量組3.362±0.3431）1.829±0.5032）3）

2.2 各組大鼠結腸NOS含量 見表2。各組大鼠結腸cNOS含量比較無明顯差異（P＞0.05）。模型組大鼠iNOS含量明顯低于正常組大鼠（P＜0.01）；各治療組大鼠結腸iNOS含量明顯高于模型組（P＜0.01）；健脾化濕顆粒中、高劑量組大鼠結腸iNOS含量明顯高于得舒特組和健脾化濕顆粒低劑量組（P＜0.05）。表明脾虛型IBS大鼠結腸iNOS含量明顯減少，健脾化濕顆粒中、高劑量的效果優(yōu)于得舒特和低劑量健脾化濕顆粒。2.3 各組大鼠結腸NO含量 見表2。模型組、得舒特組、健脾化濕顆粒低劑量組大鼠結腸NO含量明顯低于正常組（P＜0.01）；健脾化濕顆粒中、高劑量組大鼠結腸NO含量明顯高于模型組、得舒特組以及健脾化濕顆粒低劑量組（P＜0.01）。表明脾虛型IBS大鼠結腸NO含量明顯減少，健脾化濕顆粒中、高劑量可顯著提高IBS大鼠結腸NO的含量。

表2 各組大鼠結腸NOS、NO含量 （n=6±s）

表2 各組大鼠結腸NOS、NO含量 （n=6±s）

與正常組比較：1）P＜0.01；與模型組比較：2）P＜0.01；與得舒特組、低劑量組比較：3）P＜0.01

組別iNOS（U/ml）cNOS（U/ml）NO（μmol/L）正常組25.941±9.66616.643±7.42546.6.8±17.835模型組4.517±2.6121）14.224±5.32112.975±12.7981）得舒特組11.686±5.0032）13.257±5.95919.981±10.1191）低劑量組12.066±5.4672）16.076±3.57520.530±10.3911）中劑量組19.628±6.2492）3）13.584±8.18733.219±9.9472）3）高劑量組22.134±10.3072）3）14.624±9.19835.409±13.4792）3）

3 討論

NO是一種重要的生物活性物質，實驗證實，NO是非腎上腺素能非膽堿能（NANC）抑制性神經遞質，可介導平滑肌松弛，在胃腸道蠕動反射中產生下行性抑制作用，對胃腸黏膜具有保護和損傷雙重效應，也對胃腸運動和內臟感覺起重要調節(jié)作用[4-6]。大量基礎實驗證實，當NO含量減少時，胃腸運動加快；反之，胃腸運動減慢[7]。新近研究還表明，NO在外周、脊髓和中樞三個水平對內臟感覺的傳導和感知有抑制作用[8]。NOS存在3種同功酶，其主要功能是催化L-精氨酸生成NO。其中，結構型一氧化氮合成酶（cNOS）呈基礎性表達，合成的NO少且持續(xù)時間短，可松弛腸道平滑??；非鈣離子依賴的一氧化氮合成酶（iNOS）由細胞因子或內毒素誘導產生，合成的NO多，持續(xù)時間長。因此iNOS減少，可導致NO合成減少，引起腸運動加快、內臟感覺敏感性增加，從而出現(xiàn)IBS的一系列臨床癥狀。

本研究發(fā)現(xiàn)，脾虛型IBS大鼠結腸iNOS含量明顯減少，導致結腸NO含量下降，NO含量減少直接導致腸運動加快，從而出現(xiàn)腹痛、腹瀉等一系列癥狀，表明NOS、NO參與了IBS的發(fā)病過程；本研究中，健脾化濕顆粒中、高劑量可明顯改善IBS模型大鼠的稀便級、提高IBS大鼠結腸NOS和NO含量，表明健脾化濕顆粒中、高劑量通過提高結腸NOS和NO含量，具有良好的治療脾虛型IBS的作用；并且，作用效果優(yōu)于健脾化濕顆粒低劑量和得舒特。

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