食物中過敏原檢測技術(shù)研究進(jìn)展

鄭義成，華 萍， 楊安樹,*，劉 波，陳紅兵

食物中過敏原檢測技術(shù)研究進(jìn)展

鄭義成1,2，華 萍3， 楊安樹1,2,*，劉 波1,4，陳紅兵1,2

(1.南昌大學(xué) 食品科學(xué)與技術(shù)國家重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室，江西 南昌 330047；2.南昌大學(xué)中德聯(lián)合研究院，江西 南昌 330047；3.江西省食品工業(yè)研究所，江西 南昌 330029；4.江西中醫(yī)學(xué)院藥學(xué)院，江西 南昌 330004)

食物過敏已經(jīng)成為全球性的食品安全問題，而由其引起的疾病嚴(yán)重影響了人們的正常生活，因此開展食物中過敏原的檢測研究顯得尤為重要。本文綜述當(dāng)前用于食物中過敏原檢測的常見方法和新興檢測技術(shù)，并探討食物中過敏原檢測方法的發(fā)展前景。

食物過敏；過敏原；檢測技術(shù)

食物過敏是人們對(duì)食物產(chǎn)生的一種不良反應(yīng)，屬機(jī)體對(duì)外源物質(zhì)產(chǎn)生的一種變態(tài)反應(yīng)，已經(jīng)成為一個(gè)全球性的食品安全問題。流行病學(xué)調(diào)查表明全球范圍內(nèi)有1%～2%的成年人對(duì)食物過敏，而小于3歲的嬰幼兒中有8%以上對(duì)食物過敏[1]。另一項(xiàng)調(diào)查則顯示食物過敏反應(yīng)對(duì)5%的兒童和3%～4%的成年人產(chǎn)生危害，并且患病率呈逐年增加的趨勢。食物過敏是誘導(dǎo)皮膚疾病、腸道及呼吸道等多種癥狀的重要原因[2]。以發(fā)達(dá)國家為例，在美國，每年約125000例急診患者中有53700例的發(fā)病是由于食物過敏引起的[3]。據(jù)統(tǒng)計(jì)，近年來，我國食物過敏的發(fā)病率高于其他國家，因此，應(yīng)高度重視由食物過敏引起的食品安全問題。

1 食物中過敏原檢測必要性

食物中過敏原是指包含在食物中引發(fā)或激起過敏反應(yīng)，并引起過敏現(xiàn)象的食物成分。在正常的情況下，人體的免疫系統(tǒng)會(huì)產(chǎn)生抗體用來保護(hù)自身不受外來有害物質(zhì)的侵害。問題是，一些過敏者的身體卻會(huì)將正常無害的物質(zhì)誤認(rèn)為是有害的物質(zhì)，并通過免疫應(yīng)答產(chǎn)生抗體，此時(shí)，這種外來物質(zhì)就成為一種“過敏原”。能引起部分人群過敏的食物有多種，已有160多種食物被確認(rèn)為具有過敏原性，廣泛的分布于農(nóng)作物、畜禽產(chǎn)品和水產(chǎn)品中，其中牛乳、雞蛋、魚、貝類、花生、大豆、堅(jiān)果以及小麥?zhǔn)侵饕倪^敏原來源。隨著食品加工技術(shù)的發(fā)展和生活水平的提高，人們經(jīng)常對(duì)食物進(jìn)行各種深加工，如加入食品添加劑、防腐劑或者利用轉(zhuǎn)基因生物為原料生產(chǎn)大批食品[4]，這些加工方式在改善食品功能特性的同時(shí)可能會(huì)造成食物過敏性的改變甚至形成各種新的過敏原[5]。

食物過敏現(xiàn)象越來越普遍，它能引起急性或慢性疾病?？梢哉f，食物過敏已經(jīng)嚴(yán)重地影響了部分人群的生活質(zhì)量甚至危及生命，國際上有關(guān)食物過敏事件的報(bào)

道屢見不鮮。目前，臨床上治療食物過敏癥最有效最直接的方法就是避免食用含有過敏原的食物，這就要求生產(chǎn)商在食品標(biāo)簽上正確標(biāo)示出導(dǎo)致過敏的成分，以免消費(fèi)者因不知情而誤食引起過敏。因此，避免食物過敏的首要任務(wù)是對(duì)其所含的過敏原進(jìn)行檢測，以便于食品的風(fēng)險(xiǎn)評(píng)估、加工、管理以及致敏性成分的標(biāo)示。國內(nèi)外已研究和開發(fā)出多種食物中過敏原檢測技術(shù)，本文就這些檢測技術(shù)的進(jìn)展作一綜述。

2 食物中過敏原常見檢測分析技術(shù)

食物過敏原的檢測可分為體內(nèi)診斷和體外檢測。體內(nèi)診斷主要利用皮膚敏感實(shí)驗(yàn)或雙盲對(duì)照食物激發(fā)實(shí)驗(yàn)等手段評(píng)價(jià)過敏人群是否對(duì)食物過敏以及對(duì)哪些食物過敏原產(chǎn)生過敏反應(yīng)。而針對(duì)食物中過敏原檢測主要是體外檢測技術(shù)，常見體外檢測食物中過敏原技術(shù)主要有兩大類：一類是基于蛋白質(zhì)水平的檢測方法[6-7]；另一類是基于DNA水平的檢測方法，如PCR和實(shí)時(shí)熒光PCR (RT-PCR)技術(shù)[8]等。

2.1 基于過敏原蛋白的檢測方法

2.1.1 酶聯(lián)免疫吸附技術(shù)

酶聯(lián)免疫吸附技術(shù)(ELISA)是在酶標(biāo)免疫原理基礎(chǔ)上發(fā)展起來的，用酶標(biāo)記抗體或抗抗體進(jìn)行抗原抗體反應(yīng)，并以酶作用底物后的顯色深淺來反應(yīng)待測樣品中抗原或抗體的含量。目前商業(yè)產(chǎn)品中過敏原蛋白的檢測大多采用ELISA試劑盒。但是在食品加工過程中，由于交叉污染或者加工容易造成過敏性蛋白變性或結(jié)構(gòu)改變，影響著過敏原檢測的準(zhǔn)確性。針對(duì)這一問題Watanabe等[9]建立了以含有SDS、表面活性劑、2-巰基乙醇和還原劑為緩沖液的ELISA方法檢測過敏原，此法能使相關(guān)過敏原復(fù)性程度提高10到100倍，可用于檢測加工過程中已變性的蛋白過敏原，拓寬了食品中過敏原的檢測范圍。ELISA方法檢測的靈敏性與所選用的抗體有關(guān)，過敏原單克隆抗體的應(yīng)用有助于提高檢測的靈敏性和特異性。Ma等[10]建立了基于單克隆抗體的競爭ELISA法用于檢測大豆中主要過敏原大豆球蛋白，該法靈敏度高，檢出限為0.3ng/mL，線性范圍內(nèi)重復(fù)性很好，并可評(píng)估飼料及食品中的大豆過敏原。除檢測單一過敏原外，在ELISA法基礎(chǔ)上發(fā)展了同時(shí)檢測食物中多種過敏原的方法，張?jiān)谲姷萚11]利用斑點(diǎn)ELISA法 (Dot-ELISA)對(duì)花生、雞蛋清和蝦中過敏原的檢測進(jìn)行了研究，結(jié)果表明Dot-ELISA法可以同時(shí)測定多種過敏原，且具有簡便、快速、特異、靈敏、重復(fù)性好、成本低等優(yōu)點(diǎn)，可作為食品過敏原鑒定與評(píng)價(jià)的新方法。

ELISA法靈敏性高、特異性強(qiáng)、快速、費(fèi)用低，因而在過敏原檢測中得到了廣泛的應(yīng)用，特別適用于食物中少量存在就能引起嚴(yán)重過敏癥狀的過敏原檢測。但是ELISA檢測方法的局限性在于難以適用于基因改良食品中過敏原的檢測[12]。另外，由于樣本、試劑以及操作等因素造成檢測中容易出現(xiàn)假陽性結(jié)果。

2.1.2 免疫擴(kuò)散技術(shù)

由抗原抗體沉淀反應(yīng)派生出的檢測方法很多，其中免疫擴(kuò)散技術(shù)是最常用的方法，其基本原理是以半固體的瓊脂凝膠作為介質(zhì)，將可溶性抗原或抗體溶于凝膠中進(jìn)行瓊脂擴(kuò)散或免疫擴(kuò)散。免疫擴(kuò)散技術(shù)包括用于定量分析的單向瓊脂擴(kuò)散和用于定性分析的雙向瓊脂擴(kuò)散。為了提高擴(kuò)散速度和檢測靈敏度，將擴(kuò)散技術(shù)和電泳技術(shù)相結(jié)合發(fā)展了對(duì)流免疫電泳和火箭電泳等技術(shù)。對(duì)流免疫電泳利用通電后接通負(fù)極的抗原帶負(fù)電，進(jìn)而在瓊脂糖凝膠平板中向著接通正極的抗體移動(dòng)形成沉淀，但是靈敏度低，與之相比，火箭電泳的靈敏度高些。Malmheden等[13]用火箭免疫電泳檢測不同食物中乳蛋白含量，靈敏度為30mg/kg。該課題組利用此技術(shù)進(jìn)一步對(duì)各種食品如雞蛋、牛奶、榛實(shí)和花生中蛋白過敏原進(jìn)行了檢測[14]。為了提高此法檢測的靈敏性，金丹等[15]將酶聯(lián)免疫分析與火箭電泳相結(jié)合，利用辣根過氧化物酶(HRP)標(biāo)記的抗體混合于瓊脂糖凝膠中進(jìn)行火箭免疫電泳，電泳后得到的免疫沉淀峰具有酶活性，加特異底物使得沉淀峰著色清晰可見，通過繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線來實(shí)現(xiàn)過敏原的定量分析?；鸺娪据^簡單的免疫擴(kuò)散所需時(shí)間短、誤差小、精密度高，但每塊板檢測樣品數(shù)較少。總體來說，免疫擴(kuò)散技術(shù)原理簡單、費(fèi)用低，但在實(shí)際操作過程中制膠和染色的操作復(fù)雜、重復(fù)性差、影響因素多。此檢測方法的進(jìn)一步提高依賴于相關(guān)技術(shù)和儀器的改進(jìn)。

2.1.3 化學(xué)發(fā)光免疫分析技術(shù)

化學(xué)發(fā)光免疫技術(shù)(CLIA)是將高靈敏性的化學(xué)反應(yīng)發(fā)光技術(shù)與高特異性的免疫測定技術(shù)結(jié)合起來，利用發(fā)光系統(tǒng)指示抗原抗體反應(yīng)以檢測抗原或抗體的一種方法[16]。CLIA既可單獨(dú)也可結(jié)合其他方法用于檢測過敏原、抗體和半抗原[17]。例如Scheibe等[18]在巧克力糖果榛實(shí)和杏仁蛋白微量過敏原的跟蹤檢測分析研究中，將化學(xué)發(fā)光技術(shù)與免疫印跡方法相結(jié)合，提高了檢測方法的靈敏性，最低檢測限為5mg/kg。CLIA法可廣泛應(yīng)用于鑒定食品中過敏原的含量，以驗(yàn)證食品標(biāo)簽中過敏原含量的真實(shí)性[19]。Faeste等[20]利用時(shí)間分辨熒光免疫分析技術(shù)對(duì)巧克力、甜餅干等食品中能引起過敏癥的榛實(shí)蛋白進(jìn)行測定，實(shí)驗(yàn)選用獨(dú)特的銪螯合熒光抗體來進(jìn)行檢測，降低了待檢樣品基質(zhì)干擾，提高了檢測的靈敏度，最低檢出限為0.1mg/kg，榛實(shí)蛋白檢出量為0.33mg/kg。CLIA具有無輻射、標(biāo)記物有效期長并可實(shí)現(xiàn)全自動(dòng)檢測等優(yōu)點(diǎn)，檢測食物中過敏原的靈敏度比ELISA法高1000倍，在食品標(biāo)簽中標(biāo)示過敏原種類及含量方面具有

優(yōu)勢，有望逐步取代放射免疫和普通ELISA檢測的趨勢，是免疫檢測技術(shù)重要的發(fā)展方向之一。

2.2 基于過敏原DNA的檢測方法

蛋白質(zhì)水平的檢測方法直接，但是當(dāng)過敏蛋白含量極低時(shí)，很容易被食品的基質(zhì)所掩蓋，同時(shí)不同過敏原之間有部分相同的抗原決定簇會(huì)發(fā)生一定的交叉反應(yīng)，造成檢測的誤差。DNA水平的檢測技術(shù)是通過檢測是否存在過敏原蛋白基因來衡量過敏原的存在。相比之下，DNA的特異性較高，且比蛋白質(zhì)更耐加熱和加壓處理。目前主要用于一些含量很低或者成分復(fù)雜食品中過敏原的檢測。

2.2.1 聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)技術(shù)

聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)技術(shù)(PCR)是一種敏感特異的檢測核酸分子的定性方法，其原理類似于DNA的天然復(fù)制過程，特異性依賴于與靶序列兩端互補(bǔ)的寡核苷酸引物，根據(jù)PCR擴(kuò)增核酸的情況來檢測DNA。無論對(duì)于加工或未加工的食品，PCR方法已經(jīng)成為一種標(biāo)準(zhǔn)化的過敏原檢測方法，Yano等[21]運(yùn)用傳統(tǒng)的PCR方法對(duì)已加工食品中植物類過敏原胡桃的殘留進(jìn)行了檢測。Hirao等[22]采用PCR方法對(duì)食品中可能導(dǎo)致過敏的蕎麥DNA含量進(jìn)行了檢測，檢測限可達(dá)到1mg/kg。PCR方法的優(yōu)點(diǎn)在于熱變性條件下目標(biāo)DNA可以有效提取而不像蛋白提取時(shí)受食物基質(zhì)的影響較大，同時(shí)穩(wěn)定性好，檢測速度較快；不足之處在于PCR產(chǎn)物一般通過瓊脂糖凝膠電泳和溴化乙錠染色紫外光觀察結(jié)果或通過聚丙烯酰胺凝膠電泳和銀染檢測，需要多種儀器，實(shí)驗(yàn)過程繁雜，容易造成污染和出現(xiàn)假陽性的結(jié)果。

2.2.2 實(shí)時(shí)熒光定量PCR技術(shù)

將傳統(tǒng)PCR檢測模式中的PCR擴(kuò)增和熒光標(biāo)記探針檢測相結(jié)合來檢測目的核酸的技術(shù)稱為實(shí)時(shí)熒光定量PCR技術(shù)(RT-PCR)。該技術(shù)通過在PCR擴(kuò)增過程中檢測產(chǎn)物的熒光信號(hào)達(dá)到實(shí)時(shí)監(jiān)測整個(gè)PCR進(jìn)程，通過實(shí)時(shí)熒光PCR方法可快速、準(zhǔn)確地檢測出食物中過敏原成分基因，從而判斷食品中是否存在過敏原[23]。在農(nóng)作物中過敏原檢測方面，王殿夫[24]運(yùn)用此方法對(duì)花生和芹菜中過敏原成分進(jìn)行了檢測，檢測結(jié)果表明，該法特異性強(qiáng)、靈敏度高，對(duì)花生和芹菜中相關(guān)過敏原檢測限分別為3.6pg DNA和4.0pg DNA。董薇等[25]采用RT-PCR技術(shù)建立了對(duì)芝麻中過敏成分的快速檢測方法，實(shí)驗(yàn)中對(duì)照組并無交叉反應(yīng)，檢測限可達(dá)1mg/kg。在已加工食品中過敏原檢測方面，Hupfer等[26]采用RT-PCR法對(duì)面包屑、大米餅干中能引起過敏反應(yīng)的芝麻成分進(jìn)行了檢測，檢測限為10mg/kg。而在海產(chǎn)品中過敏原檢測方面，Lopez 等[27]運(yùn)用RT-PCR法對(duì)海產(chǎn)品中食入性過敏原——異尖線性寄生蟲進(jìn)行了檢測，檢測限達(dá)40mg/kg，這是目前該過敏原的最低檢測限。實(shí)時(shí)熒光定量PCR技術(shù)與常規(guī)PCR相比，實(shí)現(xiàn)了由定性到定量檢測的飛躍，具有特異性強(qiáng)、靈敏度高、自動(dòng)化、重復(fù)性好、定量準(zhǔn)確、全封閉反應(yīng)，大大拓寬了DNA檢測方法的應(yīng)用范圍。

3 食物中過敏原新興檢測技術(shù)

3.1 量子點(diǎn)熒光標(biāo)記技術(shù)

量子點(diǎn)，又稱半導(dǎo)體納米微晶粒，粒徑在1～100nm之間，主要由Ⅱ～Ⅵ族或Ⅲ～Ⅴ族元素組成，量子點(diǎn)接受激發(fā)光后能夠產(chǎn)生熒光，可以作為一種熒光探針[28]。與傳統(tǒng)熒光染料相比，量子點(diǎn)激發(fā)光光譜寬且連續(xù)，發(fā)射光譜窄、對(duì)稱、重疊小，有利于提高檢測的選擇性和靈敏度；具有尺度效應(yīng)，可通過控制量子點(diǎn)的大小、組成來調(diào)諧其發(fā)射波長；熒光強(qiáng)度高、穩(wěn)定好，可實(shí)現(xiàn)較長時(shí)間分析檢測[29]。根據(jù)量子點(diǎn)的多色性即熒光顏色可由其大小及材料來調(diào)節(jié)，利用不同熒光的量子點(diǎn)標(biāo)記不同抗體，再用免疫學(xué)方法在一種激發(fā)光作用下可同時(shí)檢測多種抗原，提高了檢測效率，達(dá)到高通量檢測的目的。目前，基于量子點(diǎn)標(biāo)記技術(shù)在檢測農(nóng)藥殘留及致病菌方面的研究較多，但是在食物中過敏原的檢測方面還相當(dāng)缺乏，如將量子點(diǎn)作為熒光探針標(biāo)記過敏原抗體，通過抗原抗體反應(yīng)，以熒光強(qiáng)度來定性或定量檢測相應(yīng)的過敏原。由于激發(fā)食物過敏反應(yīng)的閾值具有個(gè)體化差異，加之過敏食品中過敏成分復(fù)雜，一些過敏性食物中存在多種過敏原，因此，研究和開發(fā)基于量子點(diǎn)標(biāo)記的多元檢測食物中過敏原的方法是未來重要的發(fā)展方向。

3.2 生物芯片技術(shù)

生物芯片是指通過微電子、微加工技術(shù)在芯片表面構(gòu)建的微型生物化學(xué)分析系統(tǒng)，廣泛應(yīng)用于基因測序、疾病診斷、藥物篩選、致病菌檢測等方面。目前，生物芯片技術(shù)逐漸進(jìn)入了食品安全檢測領(lǐng)域，已研制出了快速檢測食品中致病菌的生物芯片技術(shù)，此法檢測時(shí)間短，可同時(shí)檢測多種致病菌，操作簡單、靈敏度高、重現(xiàn)性好。用于過敏原檢測的生物芯片主要是蛋白芯片，利用熒光標(biāo)記的靈敏性和抗原抗體結(jié)合的特異性來實(shí)現(xiàn)檢測。Harwanegg等[30]建立了以生物芯片免疫分析為基礎(chǔ)的過敏原微陣列技術(shù)對(duì)雞蛋、牛奶特異性IgE進(jìn)行檢測，而Heyries等[31]則采用微流控生物芯片技術(shù)對(duì)過敏原特異性抗體進(jìn)行化學(xué)發(fā)光分析檢測。生物芯片技術(shù)應(yīng)用于食品安全檢測，具有快速、微型化、自動(dòng)化、高通量、高特異性、高靈敏度等優(yōu)點(diǎn)；但是，檢測成本高，芯片上多種探針的存在容易造成假陽性的結(jié)果。盡管存在問題，其發(fā)展前景仍然十分廣闊，將生物芯片用于食物中過敏原的檢測有助于加強(qiáng)食品質(zhì)量監(jiān)管的力度，確保食品安全[32-33]。

3.3生物傳感器技術(shù)

生物傳感器是一類對(duì)生物物質(zhì)敏感并將其轉(zhuǎn)換為光、聲、電等信號(hào)進(jìn)行檢測的特殊傳感器[34]，由分子識(shí)別部分和轉(zhuǎn)換部分組成。待檢測物質(zhì)經(jīng)擴(kuò)散進(jìn)入生物材料后會(huì)發(fā)生相應(yīng)的生化反應(yīng)，而分子識(shí)別部分能識(shí)別反應(yīng)的信息，并由轉(zhuǎn)換部分轉(zhuǎn)化成各種信號(hào)經(jīng)儀表放大并輸出實(shí)現(xiàn)檢測。生物傳感器的種類很多，如微生物傳感器、DNA傳感器、酶傳感器和免疫傳感器等，廣泛的應(yīng)用于發(fā)酵工業(yè)、醫(yī)學(xué)、環(huán)境監(jiān)測以及食品工業(yè)中。用于食物中過敏原檢測的生物傳感器為免疫傳感器，利用抗原抗體的特異性結(jié)合檢測信號(hào)。目前國內(nèi)很少利用生物傳感器來檢測食物中過敏原，而國外利用此方法檢測食物中過敏原較多，如Maria等[35]用生物傳感器對(duì)橄欖油中摻雜的能引起過敏的榛實(shí)蛋白進(jìn)行了檢測，檢測限為0.08μg/g，靈敏性比ELISA法低。生物傳感器專一性強(qiáng)、分析速度快、準(zhǔn)確性高、成本低，但是它的使用壽命較短，穩(wěn)定性以及制備的復(fù)雜性制約著商業(yè)化和批量生產(chǎn)。目前采用生物傳感器對(duì)食物中過敏原進(jìn)行檢測已經(jīng)成為一種強(qiáng)有力的分析工具[36]，也是過敏原檢測發(fā)展的重要方向。

4 展 望

民以食為天，食品安全關(guān)系到廣大人民群眾的切身利益，而食物中過敏原的檢測在食品安全領(lǐng)域具有重要的地位，而有關(guān)這方面的檢測技術(shù)發(fā)展迅速。目前，無論是常用的檢測方法還是新興的檢測方法，它們在檢測食物中過敏原方面都有各自的優(yōu)點(diǎn)和不足，而將多種方法結(jié)合能更有效的檢測常見食物中過敏原甚至是一些潛在過敏原[37-38]。在我國，雖然已有一些針對(duì)食物中過敏原的檢測方法，但有關(guān)食品中過敏原檢測的研究缺乏理論基礎(chǔ)，加之制造工藝及核心技術(shù)的欠缺，開發(fā)應(yīng)用“高精尖”過敏原檢測技術(shù)還有不少難度。已采用的過敏原檢測方法，大多在靈敏性、重現(xiàn)性、復(fù)雜性等方面存在一定的局限性。如應(yīng)用較多的針對(duì)雞蛋、牛奶、花生、小麥等食品過敏原的ELISA檢測試劑盒，重現(xiàn)性差、耗時(shí)長，一次僅能檢測一種過敏原。隨著貿(mào)易全球化的發(fā)展，不同地域間食物的相互流通以及深加工技術(shù)的廣泛應(yīng)用使得過敏人群接觸食物中過敏原的種類日益增多，因此，開發(fā)高通量檢測食物中多種過敏原的技術(shù)顯得越來越重要。同時(shí)，要結(jié)合生物信息學(xué)分析、免疫血清學(xué)檢測、動(dòng)物/細(xì)胞致敏模型的建立等手段開展多級(jí)評(píng)價(jià)模式?？傊?，伴隨著食品生物技術(shù)的突飛猛進(jìn)，未來食物中過敏原檢測將向準(zhǔn)確、安全、經(jīng)濟(jì)、快速、普遍適用、高靈敏性的檢測方向發(fā)展。

[1]SAMPSON H A. Food allergy part 1: Immunopathogenesis and clinicaldisorders[J]. Jallergy Clin Immunol, 1999, 103(5): 717-728.

[2]SCOTT H, SICHERER M D, HUGH A. Food allergy[J]. J Allergy Clin Immunol, 2009, 124(3):116-125.

[3]ROSS M P, FERGUSON M, STREET D, et al. Analysis of foodallergic and anaphylactic events in the National Electronic Injury Surveillance System[J]. Allergy Clin Immunol, 2008, 121(1): 166-171.

[4]DEARMAN R J, KIMBER L. Determination of protein allergenicity studies in mice[J]. Toxicology Letters, 2001, 120(1/3): 181-186.

[5]DAVIS P J, SMALES C M, JAMES D C. How can thermal processing modify the antigenicity of proteins[J]. Allergy, 2001, 56(Suppl 1): 56-60.

[6]POMS R E, KLEIN C L, ANKLAM E. Methods for allergen analysis in food: a review[J]. Food Additions and Contaminants, 2004, 21(1): 1-31.

[7]SCHUMITI D, CHENG H, MALEKI S J, et al. Competitive inhibition ELISA for quantification of Ara h2, the major allergens of peanut[J]. Journal of AOAC Interantional, 2004, 87(6): 1492-1497.

[8]STEPHAN O, VIETHS S. Development of a real-time PCR and a sandwich ELISA for detection of potentially allergenic trace amounts of peanut (Arachis hypogaea) in processed foods[J]. Agric Food Chem, 2004, 52(12): 3754-3760.

[9]WATANABE Y, ABURATANI K, MIZUMURA T, et al. Novel ELISA for the detection of raw and processed egg using extraction buffer containing a surfactant and a reducing agent[J]. Journal of Immunological Methods, 2005, 300(1/2): 115-123.

[10]MA Xi, SUN Peng, HAN Pengli, et al. Development of monoclonal antibodies and a competitive ELISA detection method for glycinin, an allergen in soybean[J]. Food Chemistry, 2010, 121(2): 546-551.

[11]張?jiān)谲? 毛露甜, 向軍儉, 等. Dot-ELISA法同時(shí)檢測多種食品過敏原的實(shí)驗(yàn)研究[J].食品科技, 2005(4): 69-74.

[12]LUIS A, GONZALEZ I, GARCIA T, et al. Determination of food authenticity by enzyme-linked immunosorbent assay (ELISA)[J]. Food Control, 2008, 19(1): 1-8.

[13]MALMHEDEN Y I, ERIKSSON A, EVERITT G, et al. Analysis of proteins for verification of contamination or mislabeling[J]. Food and Agric Immunol, 2007, 6(2): 167-172.

[14]MALMHEDEN Y I, ERIKSSON A, EVERITTG, et al. Analysis of food proteins for verification of contam ination or mislabeling[J]. Food Agric Immunol, 1994, 6(3): 167-172.

[15]金丹, 張艷秋. 酶聯(lián)免疫火箭電泳法測定唾液溶菌酶[J]. 湖北中醫(yī)學(xué)院學(xué)報(bào), 2009, 11(1): 10-11.

[16]高彬文, 張素霞, 梁永紅. 化學(xué)發(fā)光直接競爭免疫分析法檢測豬尿中萊克多巴胺殘留[J]. 中國畜牧獸醫(yī), 2009, 36(12): 200-203.

[17]劉秀琴, 何軍芳, 劉長征. 化學(xué)發(fā)光免疫法和放射免疫法對(duì)甲狀腺激素檢測的比較分析[J]. 標(biāo)記免疫分析與臨床, 1999, 6(3): 170-172.

[18]SCHEIBE B, WEISS W, PRZYBILLA B, et al. Detection of trace amounts of hidden allergens: hazelnut and almond proteins in chocolate [J]. Journal of Chromatography B, 2001, 756(1/2): 229-237.

[19]LEE S, LIM H S, PARK J, et al. A new automated multiple allergen simultaneous test-chemiluminescent assay(MAST-CLA) using an AP720S analyzer[J]. Clinica Chimica Acta, 2009, 402(1/2): 182-188.

[20]FAESTE C K, HOLDEN L, PLASSEN C, et al. Sensitive time-resolved fluoroimmunoassay for the detection of hazelnut (Corylus avellana) protein traces in food matrices[J]. Journal of Immunological Methods, 2006, 314(1/2): 114-122.

[21]YANO T, SAKAI Y, UCHIDA K, et al. Detection of walnut residues in processed foods by polymerase chain reaction[J]. Bioscience Biotechnology and Biochemistry, 2007, 71(7): 1793-1796.

[22]HIRAO T, IMAI S, SAWAD A H, et al. PCR method for detecting trace amounts of buck wheat (Fagopyrum spp.) in food[J]. Bioscience Biotechnology and Biochemistry, 2005, 69(4): 724-731.

[23]HIRD H, LLOYD J, GOODIER R, et al. Detection of peanut using realtime polymerase chain reaction[J]. Eur Food Res Technol, 2003, 217(3): 265-268.

[24]王殿夫. 實(shí)時(shí)熒PCR法檢測食品中花生和芹菜成分[J]. 食品科學(xué), 2009, 30(14): 1-3.

[25]董薇, 曹際娟. 基于實(shí)時(shí)熒光PCR技術(shù)的食品中致敏原的檢測[J]. 沈陽農(nóng)業(yè)大學(xué)學(xué)報(bào), 2009, 40(2): 221-223.

[26]HUPFER C, DEMMEL A, BUSCH U. Validation of real-time PCR methods as proof of sesame in food[J]. Deutsche Lebensmittel-Rundschau, 2009, 105(2): 95-100.

[27]LOPEZ I, PARDO M A. Evaluation of a real-time polymerase chain reaction (PCR) assay for detection of anisakis simplex parasite as a foodborne allergen source in seafood products[J]. Journal of Agricultural and Food Chemistry, 2010, 58(3): 1469-1477.

[28]王傳濤, 劉道杰, 王術(shù)皓. 量子點(diǎn)在標(biāo)記免疫分析中的應(yīng)用研究進(jìn)展[J]. 臨床醫(yī)學(xué)雜志, 2007, 25(1): 73-74.

[29]文學(xué)方, 楊安樹, 陳紅兵. 量子點(diǎn)標(biāo)記技術(shù)在食品安全檢測中的應(yīng)用[J]. 食品科學(xué), 2009, 30(21): 399-402.

[30]HARWANEGG C, HUTTER S, HILLER R. Allergen microarrays for the diagnosis of specific IgE against components of cow s milk and hen s egg in a multiplex biochip-based immunoassay[J]. Methods Mol Biol, 2007, 385(1): 145-157.

[31]HEYRIES K A, LOUGHRAN M G, HOMSY A, et al. Microfluidic biochip for chemiluminescent detection of allergen-specific antibodies [J]. Biosensors & Bioelectronics, 2005, 23(12): 1812-1818.

[32]ROY S, SEN C K. cDNA microarray screening in food safety[J]. Toxicology, 2006, 3(1): 128-133.

[33]LIU-STRATTON Y, ROY S, SEN C K. DNA microarray technology in nutraceutical and food safety[J]. Toxicology, 2004, 150(1): 29-42.

[34]陳雄, 呂慧丹, 王建秀, 等. 納米生物傳感器的研究[J]. 世界科技研究與發(fā)展, 2007, 29(5): 39-43.

[35]MARIA G E G B, SMITS N G E, HAASNOOT W. Biosensor immunoassay for traces of hazelnut protein in olive oil[J]. Anal Bioanal Chem, 2009, 395(1): 119-126.

[36]張克堅(jiān). 生物傳感器及其應(yīng)用研究進(jìn)展[J]. 齊魯醫(yī)學(xué)檢測, 2004(2): 3-4.

[37]SCHNEIDER N, CORD-MICHAEL B, PISCHETSRIEDER M. Analysis of lysozyme in cheese by immunocapture mass spectrometry[J]. Journal of Chromatography B, 2010, 878(2): 201-206.

[38]LI Yan, REN Jujie, NAKAJIMA H, et al. Flow sandwich immunoassay for specific anti-OVA IgG antibody by use of surface plasmon resonance sensor[J]. Talanta, 2008, 77(2): 473-478.

Research Advance in Detection Technologies for Allergen in Food

ZHENG Yi-cheng1,2，HUA Ping3，YANG An-shu1,2,*，LIU Bo1,4，CHEN Hong-bing1,2
(1. State Key Laboratory of Food Science and Technology, Nanchang University, Nanchang 330047, China；2. Sino-German Joint Research Institute, Nanchang University, Nanchang 330047, China；3. Jiangxi Food Industrial Research Institute, Nanchang 330029, China；4. Department of Pharmacy, Jiangxi University of Traditional Chinese Medicine, Nanchang 330004, China)

Food allergy has become one of the global food safety problems, and the diseases originated from food allergy reaction is seriously affecting human life, so it is especially important to detect the allergen in food. In this paper, the commonly used technologies for the detection of allergen in food are reviewed briefly. Meanwhile, the future development is also discussed.

food allergy；allergen；detection technology

TS201.6

A

1002-6630(2010)21-0417-05

2010-06-28

江西省教育廳科學(xué)技術(shù)研究項(xiàng)目(贛教技字[2007]48號(hào))；江西省農(nóng)業(yè)廳農(nóng)牧漁業(yè)科研項(xiàng)目(贛農(nóng)字[2008]66號(hào))；南昌大學(xué)食品科學(xué)與技術(shù)國家重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室開放基金項(xiàng)目(SKLF-KF-201007)

鄭義成(1985—)，男，碩士研究生，研究方向?yàn)榧Z食油脂與植物蛋白工程。E-mail：whywan10000@163.com

*通信作者：楊安樹(1972—)，男，副教授，博士，研究方向?yàn)槭称焚|(zhì)量與安全。E-mail：yanganshuxjh@yahoo.com.cn