卵胞質(zhì)內(nèi)單精子顯微注射術(shù)治療梗阻性無精子癥妊娠分娩 1例

陳少輕 徐 琨

(解放軍第 255醫(yī)院生殖醫(yī)學(xué)中心 河北唐山 063000)

我院于 2009年 2月開展了卵胞質(zhì)內(nèi)單精子顯微注射術(shù)(ICSI),采用該術(shù)治療 1例梗阻性無精子癥患者,獲得臨床妊娠并成功分娩,報告如下。

1 病歷報告

患者,30歲,4次精液常規(guī)檢查,精液量為 4.0m L,精子密度為0。精漿果糖:0.0g/L,染色體核型正常,Y染色體微缺失檢查正常。生殖激素:FSH 2.5m IU/m L,LH 1.6m IU/m L,E 242.79pg/m L,T 6.86ng/mL。診斷為梗阻性無精子癥,婚后 6年未育。擬行睪丸取精(TESE)卵胞質(zhì)內(nèi)單精子顯微注射術(shù)(ICSI)。常規(guī)術(shù)前告知患者 TESE的風(fēng)險,經(jīng)患者夫妻知情同意后簽署同意書。夫妻行術(shù)前常規(guī)檢查,均正常。女方于前次月經(jīng)周期排卵后第 6天給予達(dá)菲林 0.05mg/d,于月經(jīng)第 4天給于國納芬75IU/d及尿促性激素 75IU/d,共 8天,第 12天監(jiān)測有 2個卵泡直徑≥18mm,停止上述 3種藥物,當(dāng)日肌肉注射 HCG 10 000 IU,注射 35h后經(jīng)陰道超聲引導(dǎo)下取卵,共獲卵 14枚。男方取較大側(cè)睪丸,局麻后常規(guī)切開至睪丸白膜,避開白膜下血管,在睪丸中部切開白膜 0.5cm,取約 25mg睪丸組織,5mg送病理檢查,余下的行 TESE。將睪丸組織放入 3mlHTF-HEPES培養(yǎng)液中,將其在培養(yǎng)皿底部的井字劃痕上來回搓動,磨碎曲細(xì)精管,組織懸液離心 10m in后棄上清,加 0.2mlHTF-HEPES。獲得的睪丸組織懸液作 10μL長滴 5個,蓋以礦物油,200倍倒置顯微鏡下檢查是否有精子。采用Nikon 2000倒置顯微鏡和 Eppendorf顯微操作系統(tǒng)。顯微固定針和注射針采用 Humagen HP-120-30和 MIC-35-30。顯微注射前先準(zhǔn)備一個Falcon1006培養(yǎng)皿,在皿中央加一個 10μL PVP微滴,再取備好的精子混懸液 5μL加在 PVP滴邊緣形成交接面,在皿周圍環(huán)繞PVP滴,用HTFHEPES培養(yǎng)液做 4個 5μL微滴,加礦物油覆蓋。將卵子移入HTF-HEPES培養(yǎng)液滴中,1枚/滴。用顯微注射針制動精子尾部,確認(rèn)精子被制動后吸入精子。用顯微固定針固定卵子,使第一極體位于 6/12點(diǎn)時鐘方位,吸入精子的顯微注射針從 3點(diǎn)時鐘方位進(jìn)入卵胞質(zhì)內(nèi)并回吸胞質(zhì),見凹陷的卵膜有回彈現(xiàn)象時,說明已刺入胞質(zhì)內(nèi),即注射精子入胞質(zhì)內(nèi)。退出顯微注射針,并檢查卵子形態(tài)是否正常。將已注射后的卵子移入 HTF(含 10%SPS)培養(yǎng)液中,置 37℃、5%CO2培養(yǎng)箱中培養(yǎng) 24h后,將胚胎再放入 1026(含 10%SPS)培養(yǎng)液中至胚胎移植。顯微注射后 17h觀察受精情況,看到兩個原核的為正常受精,3枚卵均受精,受精卵繼續(xù)培養(yǎng)至 72h,挑選優(yōu)質(zhì)胚胎 2枚進(jìn)行移植。胚胎移植 16d,尿檢顯示生化妊娠,36d后 B超見 1個孕囊顯示臨床妊娠,診斷為單胎妊娠,2009年 10月分娩一女嬰,體質(zhì)量2.6kg,發(fā)育正常,身體健康。

2 討論

ICSI作為輔助生殖技術(shù)的一種手段,其結(jié)果是令人鼓舞的,但仍存在眾多影響其成功的因素。①女方的年齡直接影響胚胎的質(zhì)量。隨著女方年齡的增長,卵巢功能下降,導(dǎo)致卵子質(zhì)量老化,卵胞質(zhì)成熟與核成熟不同步,卵胞膜彈性下降,老化易碎,尤其經(jīng) ICSI處理后,卵子受損嚴(yán)重,進(jìn)而影響其繼續(xù)發(fā)育,這樣就增加了治療難度,因此不育癥應(yīng)盡早發(fā)現(xiàn)、盡早治療。②顯微操作過程。盡量在短時間內(nèi)操作完成,在抽吸胞質(zhì)過程中,動作輕柔避免損傷細(xì)胞骨架,在注射精子時攜帶少量的 PVP或其它雜質(zhì),影響胚胎質(zhì)量,或者是污染胚胎。③ICSI的危險性。ICSI技術(shù)本身畢竟是侵襲性操作,有可能將父親攜帶的生殖方面的遺傳缺陷傳給后代,因此,應(yīng)對這些患者進(jìn)行遺傳學(xué)篩查并提供遺傳咨詢,治療前應(yīng)常規(guī)檢查染色體核型。