單核苷酸多態(tài)性標(biāo)記技術(shù)及其在水生蔬菜中的應(yīng)用

郝曉燕，張躍進(jìn)，郭宏波，柯衛(wèi)東

（1.西北農(nóng)林科技大學(xué)生命科學(xué)學(xué)院，陜西楊凌，712100；2.國家種質(zhì)武漢水生蔬菜資源圃，武漢市蔬菜科學(xué)研究所）

水生蔬菜是在淡水中生長(zhǎng)、可供食用的特色蔬菜，在我國主要有蓮藕、芋頭、茭白、慈姑、荸薺、水芹、芡實(shí)、菱角、莼菜、蒲菜等12種類型。因多數(shù)水生蔬菜含膳食纖維，醫(yī)學(xué)及食品科學(xué)研究結(jié)果均表明膳食纖維對(duì)高血脂、高血壓等心血管系統(tǒng)疾病，以及便秘、腸癌等消化系統(tǒng)疾病具有良好的調(diào)理和輔助治療功能[1]。目前蓮藕、菱白、慈姑、芡實(shí)、荸薺、菱角等品種的加工產(chǎn)品均已銷售到國外市場(chǎng)，出口量呈逐年增長(zhǎng)趨勢(shì)，國際市場(chǎng)需求量也很大。隨著海外需求量的不斷增長(zhǎng)以及消費(fèi)需求的多樣化，借助日益更新的分子技術(shù)培育優(yōu)質(zhì)、抗病性強(qiáng)和適合加工的品種將是水生蔬菜今后育種的方向。

隨著分子生物學(xué)和生物技術(shù)的迅猛發(fā)展，分子標(biāo)記技術(shù)日新月異。單核苷酸多態(tài)性 （single nucleotide polymorphism-SNP）是繼第一代分子標(biāo)記限制性片斷長(zhǎng)度 多態(tài)性 （restricted fragments length polymorphism-RFLP）和第二代分子標(biāo)記微衛(wèi)星DNA之后第三代分子標(biāo)記技術(shù)。因其具有在基因組中數(shù)量多、分布密度高，在基因分型過程中不需要根據(jù)片段大小將DNA分帶，即可實(shí)現(xiàn)大規(guī)模、高度自動(dòng)化，從而更適合于大樣本量的檢測(cè)分析，因此SNP被認(rèn)為是很有應(yīng)用前景的分子標(biāo)記技術(shù)[2]。分子標(biāo)記是物種表現(xiàn)型在分子水平上遺傳多態(tài)性的直接映射，分子水平的遺傳多態(tài)性表現(xiàn)為DNA核苷酸序列的差異，因此檢測(cè)手段更直接、精確。隨著人類、擬南芥及水稻基因組測(cè)序的完成，越來越多的生物基因組計(jì)劃正在被闡明。目前利用SNP標(biāo)記已發(fā)現(xiàn)與人類一些重要疾?。ㄏ?、糖尿病、精神分裂癥、癌癥、鐮狀細(xì)胞貧血、血友病等）緊密連鎖的標(biāo)記基因[3]。同樣，SNP在植物多樣性、群體遺傳、系統(tǒng)進(jìn)化和功能基因組學(xué)等領(lǐng)域亦已顯示出廣泛的應(yīng)用價(jià)值[4]?；谒卟嗽谖覈奶厥庑院椭匾裕约癝NP技術(shù)的廣泛應(yīng)用前景，本文對(duì)單核苷酸多態(tài)性特點(diǎn)、檢測(cè)技術(shù)及其在其他作物上的應(yīng)用進(jìn)行了綜述，并對(duì)其在水生蔬菜遺傳育種上的借鑒作用進(jìn)行了探討。

1 單核苷酸多態(tài)性的概念及特點(diǎn)

單核苷酸多態(tài)性主要是指在基因組水平上由單個(gè)核苷酸變異所引起的DNA序列多態(tài)性，在群體中發(fā)生頻率不小于1%。它是人類可遺傳變異中最常見的一種，所表現(xiàn)的多態(tài)性只涉及到單個(gè)堿基的變異，這種變異可由單個(gè)堿基轉(zhuǎn)換或顛換所引起，也可由堿基插入或缺失所致，但通常所說SNP并不包含后兩種情況[5]。所謂轉(zhuǎn)換是指同型堿基之間的轉(zhuǎn)換，如嘌呤與嘌呤（GA）、嘧啶與嘧啶（T-C）間的替換；所謂顛換是指發(fā)生在嘌呤與嘧啶（A-T、A-C、C-G、G-T）之間的替換。 研究發(fā)現(xiàn)，在變異中轉(zhuǎn)換發(fā)生頻率較高，而且以C-T轉(zhuǎn)換為主，其原因是CpG的C是甲基化的，容易自發(fā)脫氨基形成胸腺嘧啶T，CpG也因此變?yōu)橥蛔儫狳c(diǎn)[6～7]。Kanazin等[8]對(duì)5個(gè)大麥品系的54個(gè)基因分別進(jìn)行測(cè)序時(shí)，發(fā)現(xiàn)3個(gè)基因的SNP共有112種多態(tài)性。Tenaillon等[9]測(cè)算出玉米1號(hào)染色體上平均每104 bp中就有一個(gè)SNP多態(tài)位點(diǎn)?；蜓芯恐行母鶕?jù)其完成的92%秈稻（Oryza sativaL.ssp.indica)基因組草圖，估算出其SNP豐度為0.43%，即170萬個(gè)左右[10]。由此可見，作物中SNP多態(tài)性非常豐富，且數(shù)量明顯高于其他分子標(biāo)記。

在基因組DNA中，任何堿基均有可能發(fā)生變異，所以SNP幾乎遍布于整個(gè)基因組中。研究表明，編碼區(qū)內(nèi)SNP（coding SNP，cSNP）比較少，這主要是由于外顯子內(nèi)堿基變異率僅有周圍序列的1/5[11～12]，但它在研究遺傳性疾病時(shí)具有重要意義，因此cSNP的研究備受關(guān)注。在遺傳學(xué)分析中SNP作為一類遺傳標(biāo)記得以廣泛應(yīng)用，主要因其具有以下幾個(gè)特點(diǎn)：①標(biāo)記遺傳穩(wěn)定性高。SNP是基于單核苷酸的突變，所以其突變率低；②分布密度高。在人類基因組中平均每1 900個(gè)堿基對(duì)出現(xiàn)1個(gè)SNP，在玉米一號(hào)染色體中平均每104個(gè)堿基就出現(xiàn)1個(gè)SNP位點(diǎn)，幾乎可以在任何待測(cè)基因內(nèi)部或附近提供一系列標(biāo)記；③易于自動(dòng)化分析。SNP與傳統(tǒng)分子標(biāo)記方法存在明顯不同，不再以DNA長(zhǎng)度差異作為檢測(cè)手段，而是直接檢測(cè)序列變化，從而擺脫凝膠電泳的瓶頸限制，實(shí)現(xiàn)高效檢測(cè)[13]。

2 SNP的檢測(cè)方法

原則上任何能檢測(cè)單個(gè)堿基突變或多態(tài)的技術(shù)均可用于發(fā)現(xiàn)和識(shí)別SNP。近年來隨著生物技術(shù)的快速發(fā)展，SNP檢測(cè)技術(shù)日趨成熟，新的方法不斷涌現(xiàn)，按研究對(duì)象不同主要分為兩類：①對(duì)未知SNP位點(diǎn)的檢測(cè)。傳統(tǒng)方法包括如單鏈構(gòu)象多態(tài)性（SSCP）、溫度梯度凝膠電泳（TGGE）、變性梯度凝膠電泳（DGGE）、限制性片段長(zhǎng)度多態(tài)性（RFLP）、隨機(jī)擴(kuò)增多態(tài)性 DNA（RAPD）等，這些方法只能檢測(cè)SNP位點(diǎn)的有或無，不能確知突變位置和堿基類別，且不能用于SNP的發(fā)掘。而SNP的發(fā)掘需要伴隨著測(cè)序工作的進(jìn)行，所以對(duì)SNP進(jìn)一步研究則需對(duì)含SNP的DNA鏈進(jìn)行測(cè)序。由于這些方法都需通過電泳進(jìn)行檢測(cè)，因而難以實(shí)現(xiàn)高效、快速、自動(dòng)化的檢測(cè)目標(biāo)。

②對(duì)已知SNP位點(diǎn)的檢測(cè)。查找已知SNP的方法包括：以雜交為基礎(chǔ)的等位基因特異寡核苷酸片段分析（ASO）、突變錯(cuò)配擴(kuò)增檢驗(yàn) （MAMA）、基因芯片技術(shù)（gene chips）等。

目前興起的一些高通量、自動(dòng)化檢測(cè)SNP的方法，包括Taq Man探針技術(shù)、芯片技術(shù)陣列分析、變性高效液相色譜（DHPLC）、動(dòng)態(tài)等位基因特異的雜交、基質(zhì)輔助激光解析/電離-飛行時(shí)間質(zhì)譜 （MALDI-TOF MS）技術(shù)、毛細(xì)管電泳（CE）等[14]，這些技術(shù)的出現(xiàn)使SNP位點(diǎn)的基因分型更易于實(shí)現(xiàn)。但是使用成本較高。其中最直接的檢測(cè)SNP位點(diǎn)的方法是通過對(duì)已定位的序列標(biāo)簽位點(diǎn) （sequence tagged sites，STS） 和表達(dá)序列標(biāo)簽（expressed sequence tag，EST）進(jìn)行再測(cè)序發(fā)現(xiàn)植物基因組SNP，其優(yōu)點(diǎn)是EST包含有許多表達(dá)基因的序列資料，其中一些可能會(huì)涉及作物的重要農(nóng)藝性狀，對(duì)其進(jìn)行關(guān)聯(lián)分析可以實(shí)現(xiàn)輔助遺傳育種，或者通過設(shè)計(jì)特異的PCR引物擴(kuò)增某個(gè)特定區(qū)域的DNA片段，通過測(cè)序和遺傳特征的比較來鑒定該DNA片段是否可以作為SNP標(biāo)記，但缺點(diǎn)是誤差較大。綜上所述，每種方法都有其優(yōu)缺點(diǎn)，試驗(yàn)者可根據(jù)自身需求及試驗(yàn)設(shè)備等條件選擇適合自己的SNP檢測(cè)方法。

3 SNP在水生蔬菜基因組學(xué)和育種中的應(yīng)用

分子標(biāo)記已被廣泛用于人類、動(dòng)物和植物（或作物）的遺傳圖譜構(gòu)建、遺傳資源分類與系統(tǒng)進(jìn)化和功能基因組學(xué)等研究中。SNP以其特有的優(yōu)勢(shì)在人類遺傳學(xué)研究中已得到廣泛應(yīng)用，而其在作物中的應(yīng)用才剛剛起步，國內(nèi)外報(bào)道相對(duì)較少，從而顯示出其在作物應(yīng)用研究中具有廣闊前景。目前，在玉米、大豆、小麥中已有SNP報(bào)道，并表現(xiàn)出高度的種內(nèi)核苷酸多態(tài)性，但在功能基因組中的應(yīng)用尚處于起步階段[15]。而SNP在水生蔬菜的相關(guān)研究中尚未見報(bào)道。

3.1 遺傳圖譜的構(gòu)建

隨著SNP標(biāo)記的發(fā)現(xiàn)和定位功能的提高，作物遺傳連鎖圖譜標(biāo)記密度日益升高，這為作物育種提供了前所未有的便利。隨著標(biāo)記密度的逐漸加大，基因組掃描就能將數(shù)量性狀基因位點(diǎn)（QTL）定位于染色體更細(xì)微的區(qū)域內(nèi)，從而為新的主基因的發(fā)現(xiàn)和定位克隆打下良好的基礎(chǔ)；高密度SNP遺傳圖譜的出現(xiàn)可使我們更精確地進(jìn)行標(biāo)記輔助選擇（MAS）和標(biāo)記輔助導(dǎo)入（MAI），降低或消除目的基因之外的遺傳背景對(duì)這些技術(shù)帶來的不良影響。Nasu等[16]建立了213個(gè)共顯性，遍布于整個(gè)水稻基因組的SNP分子標(biāo)記，并將94個(gè)SNP整合到已有的遺傳圖譜中。Davis等[17]用SNP進(jìn)行EST作圖成功獲得高分辨率的玉米B73×Mo17隨機(jī)交配4代后的群體遺傳圖譜。SNP作為一類遺傳標(biāo)記用于遺傳圖譜構(gòu)建，以此來定位和識(shí)別具有重要功能的基因。建立起完整的高密度分子圖譜，就可以定位相應(yīng)的基因，這將為水生蔬菜中農(nóng)藝性狀和重要經(jīng)濟(jì)性狀的基因定位，培育高產(chǎn)、抗逆性和抗病性強(qiáng)的品種，提供了重要的技術(shù)支撐。

3.2 在遺傳資源分類和系統(tǒng)進(jìn)化中的應(yīng)用

生物體在漫長(zhǎng)的進(jìn)化過程中形成了自身特有的DNA堿基序列，比較物種間SNP差異，可以了解物種間親緣關(guān)系和進(jìn)化的生物學(xué)信息，從而對(duì)物種進(jìn)行精細(xì)鑒定和分類。

Wang等嘗試采用玉米中稱為“進(jìn)化位點(diǎn)”的tb1基因的SNP數(shù)據(jù)來回答栽培玉米的起源問題。他們從17個(gè)玉米基因型大約2.9 kb序列搜尋SNP，發(fā)現(xiàn)其中12個(gè)基因型屬于玉米的祖先，野生玉米在編碼tb1蛋白的基因部分序列僅有3%變異，而在啟動(dòng)子區(qū)域的變異卻非常高，但所有栽培玉米在該啟動(dòng)子區(qū)域的變異卻非常低，由此他們認(rèn)為玉米在長(zhǎng)期栽培過程中，影響啟動(dòng)子區(qū)域的選擇要比影響編碼區(qū)多得多，這些選擇導(dǎo)致了玉米表現(xiàn)型的變化[18]。Germano等[19]用核酸和葉綠體的2種特異性SNP標(biāo)記成功地對(duì)親緣關(guān)系較近、形態(tài)相似的云杉屬紅云杉和白云杉以及黑云杉進(jìn)行了區(qū)分，其中有2個(gè)SNP可將黑云杉與紅云杉和白云杉分開。比如，第410堿基位置存在SNP，在黑云杉中它編碼異亮氨酸，而在紅云杉和白云杉中卻編碼亮氨酸；有5個(gè)SNP將白云杉與紅云杉和黑云杉分開。Yamanaka等[20]對(duì)不同來源的糯稻品種進(jìn)行SNP分析，結(jié)果表明Waxy基因位點(diǎn)上兩個(gè)復(fù)等位基因Wxa和Wxb差別在于Wx基因中第一個(gè)內(nèi)含子的一個(gè)酶切位點(diǎn)單堿基發(fā)生替代 （由AGGT變?yōu)锳GTT)導(dǎo)致酶切位點(diǎn)改變而產(chǎn)生多態(tài)性，從而使Wx基因在該位點(diǎn)形成復(fù)等位基因Wxa和Wxb，同時(shí)在353個(gè)糯稻中發(fā)現(xiàn)11個(gè)是AGGT，由于認(rèn)為粳稻W(wǎng)x基因都AGTT，因此他們認(rèn)為糯稻來源于粳稻。

3.3 在功能基因組學(xué)中的應(yīng)用

單個(gè)堿基的差異可能決定一個(gè)基因功能的改變，SNP用于研究基因功能具有重要意義。利用SNP探索作物基因功能組學(xué)的研究在小麥、水稻中報(bào)道較多。

水稻抗稻瘟病基因Pi-ta與等位感病基因的區(qū)別在于基因編碼區(qū)存在7個(gè)堿基替換，造成氨基酸鏈中有5個(gè)氨基酸差異，通過表型分析發(fā)現(xiàn)，造成抗病基因與感病基因功能差異的關(guān)鍵因素是等位基因編碼的氨基酸鏈中第918個(gè)氨基酸的差異，抗病基因編碼丙氨酸，而感病基因則編碼為絲氨酸[21]。水稻淀粉酶IIa(SSIIa)基因位點(diǎn)存在5個(gè)SNP，其中一個(gè)SNP引起了氨基酸編碼的改變，并認(rèn)為靠近C末端的兩個(gè)SNP引起氨基酸的變化，可能是引起淀粉酶Ⅱa基因活性和淀粉粒群叢改變的關(guān)鍵因素[22]。水稻半矮稈基因sd21等位基因中大多數(shù)是由于基因組中編碼一種赤霉素氧化酶（GA20-ox）的基因編碼區(qū)一段核苷酸缺失造成GA20-ox基因功能喪失；另一種情況是在GA20-ox基因編碼區(qū)內(nèi)第798個(gè)堿基由C變?yōu)門，從而使氨基酸鏈第266個(gè)氨基酸由亮氨酸變?yōu)楸彼?，而亮氨酸在GA20-ox的氨基酸鏈中是高度保守的，由于單堿基的取代使基因編碼的氨基酸改變，導(dǎo)致了GA20-ox功能的喪失，使水稻由高稈突變?yōu)榘抂23]。Wang等[24]在研究了6個(gè)野生稻品種谷子中淀粉結(jié)構(gòu)和理化特性后發(fā)現(xiàn)，與栽培稻的長(zhǎng)鏈淀粉相比，野生稻谷子具有更高的膨脹力、水溶性、較低的β-淀粉分解限制和粘性，并認(rèn)為因野生稻中直鏈淀粉含量和支鏈淀粉結(jié)構(gòu)的差異會(huì)造成加工以及品質(zhì)上的差異。在水稻中，直鏈淀粉的含量常常是決定烹調(diào)和米食加工質(zhì)量的一個(gè)重要指標(biāo)，直鏈淀粉含量低的品質(zhì)優(yōu)。研究發(fā)現(xiàn)，所有直鏈淀粉含量低于18%的品種其序列都是AATTATA，而直鏈淀粉含量在中等水平以上的26個(gè)品種在該位置的序列都是AAGTATA，這種TG轉(zhuǎn)換與直鏈淀粉含量的相關(guān)性在育種實(shí)踐中很有價(jià)值[25]。

4 小結(jié)與展望

SNP具有多態(tài)性豐富，在作物基因組中分布密度大等優(yōu)點(diǎn)，在人類和重要作物上已顯示出其特有的優(yōu)勢(shì)和廣泛應(yīng)用前景，它在遺傳圖譜構(gòu)建、資源分類和遺傳進(jìn)化，以及功能基因組學(xué)方面的特長(zhǎng)將為其他經(jīng)濟(jì)作物提供良好的技術(shù)支撐。水生蔬菜是我國乃至世界蔬菜的特色種類，對(duì)其育種、遺傳學(xué)和基因組學(xué)方面的研究尚處于初級(jí)階段，盡快吸納新技術(shù)加速我國特色蔬菜的研究是當(dāng)務(wù)之急。

我國水生蔬菜資源豐富，其中以蓮藕資源最為豐富。盡管過去在形態(tài)學(xué)分類[26～27]、分子標(biāo)記技術(shù)[28]和品質(zhì)方面[29]做了一些工作，但無論是基礎(chǔ)研究還是應(yīng)用研究，都仍有許多工作需要開展?；A(chǔ)研究方面包括：美洲黃蓮作為中國蓮亞種的直接分子證據(jù)；中國蓮3種類型的進(jìn)化機(jī)理及其時(shí)間次序；藕蓮不開花或少開花的分子調(diào)控機(jī)理；藕蓮和子蓮產(chǎn)量和品質(zhì)的調(diào)控機(jī)理；花蓮不同花型、花色的進(jìn)化與分子雜交機(jī)制；應(yīng)用研究包括：藕蓮和子蓮高產(chǎn)品種的選育；藕蓮加工品種的選育；花蓮品種各花色和花型形的選育。而其他水生蔬菜種類與蓮藕相比，則還有更多的工作需要開展。

[1]Tungland B C,Meyer D.Non digestible oligo-and Polysaccharides(dietary fiber):their physiology and role in human health and food [J].Comprehensive Reviews in Food Science and Food Safety,2002,3:73-92.

[2]劉傳光，張桂權(quán).水稻單核苷酸多態(tài)性及其應(yīng)用[J].遺傳，2006，28（6）：737-744.

[3]Risch N,Merikangas K.The future of genetic studies of complex human diseases [J].Science,1996,273:1 516-1 517.

[4]杜春芳，劉惠民，李潤(rùn)植，等.單核苷酸多態(tài)性在作物遺傳及改良中的應(yīng)用[J].遺傳，2003，25（6）：735-739.

[5]杜瑋南，孫紅霞，方福德.單核苷酸多態(tài)性的研究進(jìn)展[J].中國醫(yī)學(xué)科學(xué)院學(xué)報(bào)，2000，8（22）：392-394.

[6]Johnson G C L,Told J A.Strategies in complex disease mapping [J].Current Opinion Genetics&Development,2000,10(3):330-334.

[7]Mullikin J C,Hunt S E,Cole C G,et al.A single-nu-cleotide polymorphisms map of human chromosome 22[J].Nature,2000,407(6803):516-520.

[8]Kanazin V,Talbert H,See D,et al.Discovery and assay of single-nucleotide polymorphisms in barley (Hordeum vulgare)[J].Plant Molecular Biology,2002,48(5):529-537.

[9]Maud I,Tenaillon,Mark C,et al.Patterns of DNA sequence polymorphism along chromosom-e 1 of maize (Zea mays ssp.maysL.)[J].PNAS,2001,98(16):9 161-9 166.

[10]Yu J,Hu S N,Wang J,et al.A draft sequence of the rice genome (Oryza sativaL.ssp.indica)[J].Science,2002,296(13):79-92.

[11]Li W,Sadler L A.Low nucleotide diversity in Man[J].Genetics,1991,129:513-523.

[12]Nickerson D A,Taylor S L,Weiss K M,et al.DNA sequence diversity in a 917 kb region of the human lipoprotein lipase gene[J].Nature Genetics,1998,19:233-240.

[13]Mochida K,Yamazaki Y,Ogihara Y.Discrimination of homoelogous gene expression in hexaploid wheat by SNP analysis of contigs grouped from A large number of expressed sequence tags [J].Molecular Genetics and Genomics,2004,270:371-377.

[14]汪維鵬，倪坤儀，周國華.單核苷酸多態(tài)性檢測(cè)方法研究進(jìn)展[J].遺傳，2006，28（1）：117-126.

[15]Rafalski A.Applications of Single Nucleotide Polymorphisms in Crop Genetics[J].Current Opinion in Plant Biology,2002(5):94-100.

[16]Nasu S,Suzuki J,Ohta R,et al.Search for and analysis of single nucleotide polymorphisms (SNPs)in rice(Oryza sativa,Oryza rufipogon)and establishment of SNP markers[J].DNA Research,2002，9(5):163-171.

[17]Davis G,Long M J,Lee M,et al.The Intermated B73 x Mo17 Genetic Map:a Community Resource 2001,(http://www.agron.missouri.edu)[EB//OL].

[18]Wang R L,Syeca A,Hey J,et al.The limits of selection during maize domestication[J].Nature,1999,398:236-239.

[19]Germano J,Klein A S.Species-specific nuclear and chloroplast single nucleotide polymorphisms to distinguish Picea glauca,P.mariana and P.rubens [J].Theoretical and Applied Genetics,1999,99:37-49.

[20]Yamanaka S,Nakamura I,Watanabe K N,et al.Identification of SNPs in the waxy gene among glutinous rice cultivars and their evolutionary significance during the domestication process of rice [J].Theoretical and Applied Genetics,2004,108(7):1 200-1 204.

[21]Bryan G T,Wu K S,Farrall L,et al.A single amino acid difference distinguishes resistant and susceptible alleles of the rice blast resistance genePi-ta [J].Plant Cell,2000,12(11):2 033-2 046.

[22]Umemoto T,Aoki N.Single-nucleotide polymorphisms in rice starch synthaseⅡa that alter starch gelatinisation and starch association of the enzyme [J].Functional Plant Biology,2005,32(9):763-768.

[23]Spielmeyer M,Ellis M H,Chandler P M.Semidwarf(sd21), “Green Revolution” Rice,contains a defective gibberellin 20-oxidase gene[J].Proceeding of the National Academy of Sciences of the United States of America,2002,99(13):9 043-9 048.

[24]Wang L F,Wang Y J,Porter R.Structure and physicochemical properties of six wild rice starch [J].Journal of Agricultural and Food Chemistry,2002,50:2 695-2 699.

[25]Ayres N M,McClung A M,Larkin P D,et al.Microsatellites and a single-nucleotide polymorphism in an extended pedigree of US rice germplasm [J].Theoretical and Applied Genetics,1997,94:773-781.

[26]倪學(xué)明.中國蓮 [M].北京：科學(xué)出版社，1987:1-163.

[27]王其超，張行言，胡春根.荷花分類新系統(tǒng)[J].武漢植物學(xué)研究，1997，15（1）：19-26.

[28]Guo H B,Li S M,Peng J,et al.Genetic diversity of Nelumbo accessions revealed by RAPD [J].Genetic Resources and Crop Evolution,2007,54:741-748.

[29]柯衛(wèi)東，黃新芳，傅新發(fā).蓮藕主要營(yíng)養(yǎng)品質(zhì)和農(nóng)藝性狀的遺傳分析[J].武漢植物學(xué)研究，2000，18（6）：519-522.