葛棗獼猴桃組培繁殖的研究

李桂君 宋嘉隆 吳 捷

（黑龍江省林業(yè)科學(xué)研究所 森林培育室，黑龍江 哈爾濱150081）

葛棗獼猴桃（Actinidia polygama）為獼猴桃科的多年生滕本植物，自然分布于我國東北三省、朝鮮和日本等地。其果實(shí)含有豐富的維生素、氨基酸和微量元素，果實(shí)和葉片中還含有許多生物活性物質(zhì)和醫(yī)藥成份，對早期快速生長的腫瘤具有明顯的抑制作用。日本人用其葉片制成保健茶葉，十分暢銷。寄生在果實(shí)中的癭蠅具有強(qiáng)心利尿、祛風(fēng)濕、回春等功效。所以，葛棗獼猴桃在市場上有十分廣闊的發(fā)展前景。葛棗獼猴桃在我國東北分布雖然較廣，但多是呈零星分布狀態(tài)，自然資源不多。加之用途廣泛，采收強(qiáng)度大，資源日趨減少。對葛棗獼猴桃進(jìn)行組織培養(yǎng)，有利于快速推廣其優(yōu)良品系，擴(kuò)大種群數(shù)量，為繁榮林區(qū)經(jīng)濟(jì)做出貢獻(xiàn)。此前，葛棗獼猴桃組培僅見于劉永立等的報(bào)道，他們從葉柄愈傷組織分化出了不定芽并長成了完整植株。而本研究則是通過腋芽增殖的途徑獲得了試管苗并建立了組培快繁體系。

1 材料和方法

2月下旬至3月上旬，剪取葛棗獼猴桃莖段，在室內(nèi)水培催芽。當(dāng)腋芽萌動(dòng)抽出的嫩莖葉長約2cm左右時(shí)，從莖部將其切下，放入自來水中沖洗5分鐘，洗去表面污物，向水中加入幾滴洗潔精，搖動(dòng)片刻后，置于自來水龍頭下沖洗至泡沫全無。倒去自來水后，將材料放入0.1%氯化汞溶液中消毒6至8分鐘，在超凈工作臺(tái)上，用滅過菌的蒸餾水浸泡清洗5-6次，將氯化汞殘液洗凈，用無菌濾紙吸干材料上的多余水分。切去斷口部分，將材料切成單芽莖段后接種到誘導(dǎo)培養(yǎng)莖中。

接種時(shí)先用手術(shù)刀將材料的剪口部位切去，用長鑷子夾取材料將其直接插入培養(yǎng)基約0.8~1.0cm并使其保持直立，每個(gè)培養(yǎng)基組合接六瓶，每瓶接種材料五個(gè)，接種后一周內(nèi)及時(shí)觀察雜菌污染情況，若發(fā)現(xiàn)培養(yǎng)瓶內(nèi)發(fā)生污染立即把未污染的材料轉(zhuǎn)移到新鮮的培養(yǎng)基或重新接種補(bǔ)齊。接種分別使用MS、WPM和WHITE三種基本培養(yǎng)基，補(bǔ)加0.5-2.0（單位：mg/L下同）的6－芐基嘌呤（BA）或1.0的6-呋喃氨基嘌呤（KT），0.05的α-萘乙酸（NAA）和1－4%的蔗糖，為了便于單因子比較培養(yǎng)基組合詳見表1。

繼代增殖使用的培養(yǎng)基為：MS+BA0.5+NAA0.02+2%蔗糖和WHITE+BA0.5+NAA0.02+2%蔗糖。

生根培養(yǎng)基按表二配制，其組成成分見表2。

培養(yǎng)基配完后加0.6%的瓊脂粉，溶化后用0.1N的NaOH將PH調(diào)至5.8，分裝后在1Kg/cm2條件下熱壓滅菌20min。

接種后的材料置于架上光照培養(yǎng)。培養(yǎng)時(shí)晝夜溫度變化于20~25℃，白天補(bǔ)充日光燈照明14h，光強(qiáng)度2000lx。

試管苗移栽采用珍珠巖，蛭石，沙壤土三種基質(zhì)。

2 結(jié)果和討論

2.1 誘導(dǎo)培養(yǎng)

材料接種后約一周，腋芽開始膨脹。再經(jīng)5~6天腋芽開裂長出新的幼芽。接種后20天新芽進(jìn)入正常生長階段。部分材料由于太過細(xì)弱或由于滅菌時(shí)間過長使外植體受到藥害，逐漸黃化枯萎，接種后25天時(shí)調(diào)查材料生長情況見表1。

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在以MS為基本培養(yǎng)基的組合中，以BA1.0+NAA0.05和2%蔗糖的2號培養(yǎng)基的生長情況最好，誘導(dǎo)率高達(dá)80.00%，BA的濃度為2.0和0.5時(shí)誘導(dǎo)率分別下降為76.77%和56.67%。在用KT1.0取代BA1.0的4號培養(yǎng)基中，誘導(dǎo)率為73.33%，說明在本實(shí)驗(yàn)條件下，KT的效果不及BA。因此，激素的合理使用對誘導(dǎo)效果有重要作用。若仍采用較優(yōu)的2號培養(yǎng)基的激素組合，而只將蔗糖濃度調(diào)整到1%和4%，誘導(dǎo)率則分別下降到56.67%和30.00%，這說明在葛棗獼猴桃的莖段培養(yǎng)中，蔗糖濃度不宜偏高和偏低，蔗糖濃度為4%時(shí)的誘導(dǎo)率較2%時(shí)降低幅度達(dá)62.50%，所以，較高的蔗糖濃度尤其不宜。

從同時(shí)進(jìn)行的7號和8號培養(yǎng)基組合來看，無機(jī)鹽總量中等的WPM培養(yǎng)基和無機(jī)鹽總量偏低的White培養(yǎng)基，其誘導(dǎo)率分別為70.00%和50.00%，均低于有同樣附加成分的MS培養(yǎng)基?？磥恚诟饤棲J猴桃莖段誘導(dǎo)培養(yǎng)階段，仍以無機(jī)鹽總量偏高的MS效果為好，無機(jī)鹽總量偏低的White培養(yǎng)基其誘導(dǎo)效果最差。

2.2 繼代增殖

當(dāng)材料長到3~4cm高時(shí)，可從節(jié)間處將其剪成單節(jié)莖段，轉(zhuǎn)入繼代培養(yǎng)基中進(jìn)行增殖。繼代培養(yǎng)采用MS和White兩種基本培養(yǎng)基，由于此時(shí)試管苗內(nèi)的激素成分已有所積累，故將BA和NAA濃度分別降至0.5至0.02。這時(shí)的材料已完全適應(yīng)培養(yǎng)基的條件且處在旺盛生長期，生長速度和增殖速度都很快。通過比較發(fā)現(xiàn)，從兩種繼代增殖培養(yǎng)基的效果看，MS培養(yǎng)基好于White培養(yǎng)基，可能是后者因無機(jī)鹽含量低，營養(yǎng)條件不足所致。經(jīng)統(tǒng)計(jì)，此階段試驗(yàn)材料的月增殖系數(shù)可達(dá)到3.0~4.0，完全能夠滿足建立快繁體系的要求。

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2.3 誘導(dǎo)無根苗生根

將繼代增殖的材料從節(jié)間處剪成單節(jié)莖段扦插在生根培養(yǎng)基中，14~17天莖基部開始生根，第25天調(diào)查的生根情況見表2。

從表2可以看出，不同培養(yǎng)基組合，其生根率有明顯差別，在激素相同的情況下，MS（半）的生根率高于MS培養(yǎng)基。這表明在生根階段適當(dāng)降低培養(yǎng)基的無機(jī)鹽濃度有利于生根，這與其他作者的結(jié)果一致。而基本培養(yǎng)基同為MS（半），NAA、IAA和IBA也同為0.5時(shí)，其生根率分別為88%、80%和84%。使用NAA者生根率最高，但根較細(xì)弱，且莖基部有少量組織；使用IAA時(shí)，生根率較低，但根較長，莖基部無愈傷組織；而使用IBA者，生根率較使用NAA時(shí)略低，但根較粗壯，且莖基部無愈傷組織。三者綜合比較，使用IBA者根較健康，且莖基部無愈傷組織產(chǎn)生，因此效果最好。

2.4 試管植株移栽

試管植株生根后，增加自然光照強(qiáng)度，使其更加健壯，當(dāng)根生長至1.5~2.5cm長時(shí)移栽效果最好。此時(shí)可去掉瓶塞，煉苗3、4天備用。

移苗基質(zhì)為珍珠巖、蛭石和壤土加沙土（1：1），但后者事先經(jīng)過了消毒處理，以防雜菌污染。栽苗的容器采用小號營養(yǎng)杯或植苗盤。

移栽時(shí)，仔細(xì)取出瓶苗，用清水洗去根部的培養(yǎng)莖，勿傷根系，移后，覆好基質(zhì)，壓實(shí)，澆足水，置于光線充足又無陽光直射處緩苗。在幼苗上方覆以塑料膜保持空氣濕度，每天適量噴水并適時(shí)打開塑料膜通風(fēng)換氣，隔日用1%~3%波爾多液噴霧，防止病害發(fā)生，1個(gè)月后去掉塑料膜進(jìn)入正常管理。經(jīng)調(diào)查，首批移栽入珍珠巖、蛭石和沙壤土中的試管苗成活率分別為85.00%、90.00%和81.67%。

葛棗獼猴桃試管植株移栽時(shí)，有兩個(gè)問題值得注意：一是試管植株本身具有完整根系，植株健康；二是移栽條件要有保障，基質(zhì)溫度23～25℃；基質(zhì)（土壤）含水量16～18%，水分不宜過大；空氣相對溫度65～70%。只要滿足上述條件，移栽成活率可達(dá)90%以上。

興安石竹利用腋芽增殖，產(chǎn)生的再生植株在遺傳上相對穩(wěn)定，因此這一途徑已在不少植物的快繁上得到了應(yīng)用。

[1]周以良主編．黑龍江省樹木志，黑龍江科學(xué)技術(shù)出版社，1986，哈爾濱。

[2]周以良主編．黑龍江植物志，東北林業(yè)大學(xué)出版社，2003，哈爾濱。

[3]龍曉峰．不同激素水平對西瓜、麗格秋海棠試管苗誘導(dǎo)的影響，內(nèi)蒙古農(nóng)業(yè)科技，2008（5）。

[4]馮健、蘇麗娜．長白山百合的離體快繁技術(shù)研究，北方園藝，2009（4）。

5.朱至清編著．植物細(xì)胞工程，化學(xué)出版社，2003，北京。

[5]劉永立等．葛棗獼猴桃組織培養(yǎng)中的器官形成與植株再生，果樹學(xué)報(bào)，2005，（3）