高危型HPV病毒含量與宮頸癌前病變程度的關(guān)系研究

張勁豐，安宏亮

(廣東省佛山市中醫(yī)院檢驗(yàn)科，廣東 佛山 528000)

預(yù)防和控制宮頸癌的關(guān)鍵是早期診斷和治療癌前病變——宮頸上皮內(nèi)瘤樣變(Cervical Intraepithelial,CIN)，阻斷其進(jìn)展到宮頸癌的潛在危險(xiǎn)。高危型HPV病毒的持續(xù)感染已被證明是導(dǎo)致宮頸癌及CIN的首要致病因素[1-3]。本文旨在通過對(duì)臨床病例的研究分析，探討高危型HPV病毒DNA含量與宮頸癌前病變關(guān)系。

材料與方法

1材料來源 取自2004年6月至2007年6月期間，在我院婦科宮頸病-宮頸癌篩查防治中心就診的同時(shí)行HR-HPV DNA、陰道鏡檢查及病理活檢的892例病例，年齡范圍在17～69歲，21～40歲病例占85.6%。

2病例納入標(biāo)準(zhǔn) 同時(shí)行HR-HPV DNA檢測(cè)、陰道鏡下病理活檢；三月內(nèi)未行抗病毒的物理、藥物治療；既往無因CIN而行宮頸手術(shù)史；排除同一病例因復(fù)查而重復(fù)納入統(tǒng)計(jì)的情況。

3陰道鏡病理活檢 在陰道鏡下取子宮頸異常部位或是多點(diǎn)活體組織做病理檢查。依據(jù)子宮頸病理結(jié)果，將病例分為正常、CIN-Ⅰ、CIN-Ⅱ～Ⅲ三組。

4 HR-HPV DNA檢測(cè) 采用美國Digene公司第二代基因雜交捕獲信號(hào)放大檢測(cè)試驗(yàn)(Hybrid CaptureⅡ，HC-Ⅱ)，它是目前FDA批準(zhǔn)的唯一一種用于SCC篩查的檢測(cè)HPV的試驗(yàn)。其原理是利用核酸分子雜交、酶聯(lián)免疫反應(yīng)、抗體捕獲、信號(hào)放大、化學(xué)發(fā)光等技術(shù)，檢測(cè)HR-HPV病毒DNA的含量，檢測(cè)靈敏度約1pg/ml。本試驗(yàn)檢測(cè)的HR-HPV病毒包括16/18/31/33/35/39/45/51/52/56/58/59/68共13種病毒亞型。以標(biāo)本的相對(duì)的熒光光度單位值(Relative Light Units，RLUs)與陽性標(biāo)準(zhǔn)品的閾值(Cut Off,CO)的比值表示。RLU/CO≥1.0為陽性，＜1.0為陰性。RLU/CO值越高，表示病毒含量越高[4-5]。不同宮頸病變級(jí)別的病毒含量原始結(jié)果為RLU/CO值，離散程度較大，將其對(duì)數(shù)轉(zhuǎn)換(Log10RLU/CO)以方便統(tǒng)計(jì)。驗(yàn)證對(duì)數(shù)轉(zhuǎn)換后定量結(jié)果的頻數(shù)分布規(guī)律。正常病例組陽性結(jié)果范圍在0～3.57，按照百分位數(shù)等分為三組：低度含量組0～1.19；中度含量組1.20～2.39；高度含量組2.40～3.58。

5統(tǒng)計(jì)方法 應(yīng)用卡方 (χ2)檢驗(yàn)各病例組HRHPV DNA陽性率是否存在差異。應(yīng)用SPSS 13.0軟件進(jìn)行數(shù)據(jù)處理和統(tǒng)計(jì)分析，以一元線性回歸分析HR-HPV DNA病毒含量與CIN病變程度的關(guān)系，單因素方差比較分析三組陽性病例的均值[5]。P＜0.05有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，P＜0.01有顯著統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

結(jié) 果

1 892 例病例HR-HPV DNA陽性率及與子宮頸病變的陽性對(duì)照結(jié)果見表1。各組HPV陽性率經(jīng)卡方檢驗(yàn)其差異有顯著統(tǒng)計(jì)學(xué)意義 (χ2=90.926，P＝0.000，P＜0.01)。

表1 892例病例HR-HPV DNA陽性率及與子宮頸病變的陽性對(duì)照

2 各組在低度含量 (0～1.19)、中度含量 (1.20～2.39)、高度含量(2.40～3.58)的分布比例，結(jié)果見表 2。

3各組HPV DNA含量平均值和95%置信區(qū)間，結(jié)果見表3。三組陽性病例結(jié)果均值經(jīng)方差分析，F(xiàn)=1.149，P>0.05，說明各組陽性結(jié)果均值的差異沒有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。DNA含量與子宮頸病變程度經(jīng)一元線性回歸，F(xiàn)=2.176，P＞0.05，說明DNA含量的高低與CIN病變程度不呈線性相關(guān)。

表2 各組HR-HPV DNA病毒含量(Log10RLU/CO)分布

表3 各組HR-HPV DNA病毒含量(Log10RLU/CO)均值和95%CI

4三組陽性病例DNA含量分布的箱體圖，長(zhǎng)方塊表示分布的范圍，中間黑色實(shí)線為均值，見圖1。

討 論

圖1 三組病例的DNA含量分布

宮頸癌的發(fā)生是多種病因長(zhǎng)期綜合作用的結(jié)果，自Hausen提出HPV可能與宮頸癌發(fā)病有關(guān)的假設(shè)后，國內(nèi)外的學(xué)者對(duì)此進(jìn)行了大量的研究[1-3]，結(jié)果顯示HR-HPV感染是宮頸癌及癌前病變的必要致病因素。本次研究也證明了HR-HPV感染與宮頸病變的發(fā)生密切相關(guān)，隨CIN病變程度的加重，HR-HPV感染率增高，歸因危險(xiǎn)度也增高。

從HR-HPV感染開始，由低度瘤樣變(CIN-Ⅰ級(jí))進(jìn)展到高度瘤樣變(CIN-Ⅱ～Ⅲ級(jí))，最終發(fā)生宮頸癌是一個(gè)漸進(jìn)的過程。CIN病變程度分級(jí)與感染的HR-HPV病毒DNA含量的關(guān)系，國內(nèi)外文獻(xiàn)報(bào)道有兩種相反的觀點(diǎn)[6-8]。國內(nèi)部分研究者采用此法研究顯示DNA含量與宮頸病變程度成正相關(guān)，這和DNA病毒含量的“高、中、低”的劃分標(biāo)準(zhǔn)明顯相關(guān)。我們認(rèn)為依據(jù)無CIN組數(shù)據(jù)的頻數(shù)分布規(guī)律，按照百分位數(shù)等分為“高、中、低”比單純的以絕對(duì)RLU/CO值來劃分更合統(tǒng)計(jì)學(xué)的要求。本次研究顯示各級(jí)CIN病變的HR-HPV DNA含量沒有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義的差別，DNA含量的高低與CIN病變分級(jí)并不完全一致，不能代表宮頸病變程度的高低。有研究發(fā)現(xiàn)不是所有的HR-HPV的感染和CIN-I級(jí)病變都會(huì)發(fā)展到宮頸癌，這和感染HPV病毒后，病毒的生物狀態(tài)密切相關(guān)。HPV-DNA與宿主基因整合后，會(huì)導(dǎo)致病毒的持續(xù)感染和宮頸病變的進(jìn)一步發(fā)生發(fā)展。5～10%的CINⅡ～Ⅲ病變發(fā)生DNA的整合，在CIN-Ⅰ的病變中則很少發(fā)生，這可能是HR-HPV DNA含量不與CIN病變程度成正相關(guān)的一個(gè)原因。因此，如何鑒別HPV病毒的持續(xù)感染和一過性感染也是很有意義的研究。

從各級(jí)CIN病變?cè)诘?、中、高三個(gè)濃度病例分布規(guī)律的研究顯示，CIN分級(jí)與HR-HPV DNA含量顯著相關(guān)。從病毒感染到出現(xiàn)形態(tài)學(xué)改變，HRHPV持續(xù)在較高的水平，逐漸由量變發(fā)生了質(zhì)變，提示病毒含量與體內(nèi)免疫的一個(gè)抗衡過程，病毒感染自然消退的過程以及少部分呈現(xiàn)出持續(xù)感染的過程，病毒含量越高，發(fā)生高級(jí)別CIN的可能性越大[6]。因此，HR-HPV定量檢測(cè)的結(jié)果，適用于篩查子宮頸病變的高危人群，可作為宮頸癌及癌前病變?cè)缙诤Y查和監(jiān)控其發(fā)生發(fā)展、監(jiān)測(cè)療效的有效方法 [4，8]。

近年來，宮頸癌發(fā)生率的下降，與通過HRHPV檢測(cè)來篩查宮頸癌及癌前病變的廣泛應(yīng)用分不開[6]，HR-HPV的檢測(cè)使宮頸癌的防治發(fā)生了理念性的改變。如能進(jìn)一步研究透澈HPV病毒各亞型的宮頸病變的致病性，病毒持續(xù)含量與子宮頸病變發(fā)生程度的關(guān)系，則能更快速、簡(jiǎn)便、準(zhǔn)確地篩查出宮頸癌及癌前病變及高危人群，可極大的節(jié)約醫(yī)療成本，提高社會(huì)效益。

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