SDS-AGE尿蛋白電泳技術(shù)在腎臟疾病中的應(yīng)用研究

楊小燕，吳泳泳，呂 春，雷文輝

(江西省贛州市人民醫(yī)院檢驗(yàn)科，江西贛州 341000)

蛋白尿是腎臟疾病的常見臨床表現(xiàn)，尿蛋白的選擇性在一定程度上反映腎臟病變的程度。腎活檢診斷腎臟疾病的準(zhǔn)確性雖然高，但由于腎活檢屬創(chuàng)傷性診斷技術(shù)，存在很多不足，如患者的恐懼；顧慮；可能造成出血；感染等。因此，本文采用十二烷基硫酸鈉-瓊脂糖凝膠(SDS-AGE)進(jìn)行非濃縮尿蛋白電泳技術(shù)分析，在一定程度上可反映腎臟病變的部位及程度，對臨床診斷和早期診斷腎臟疾病，特別對未開展腎活檢的基層醫(yī)院有重要臨床意義。

1 資料與方法

1.1 標(biāo)本采集

1.1 .1病例組 60例腎病患者均來自我院腎內(nèi)科2008年1月～2008年12月住院病人，年齡10～70歲，平均42歲，男38例，女22例。

1.1 .2對照組 健康人5例，無腎臟病史及其他慢性病史，尿蛋白含量0～100mg/24h。

1.2 儀器與試劑

1.2 .1儀器 法國Sebia公司產(chǎn)HYDRASYS全自動(dòng)程序化瓊脂糖凝膠電泳儀。

1.2 .2試劑 均使用該公司提供的專用標(biāo)準(zhǔn)液和試劑。

1.3 方法

1.3 .1 樣品采集及處理 收集新鮮晨尿5～10ml，標(biāo)本如不能及時(shí)測定放冰箱時(shí)間不超過1周，先用尿蛋白篩選定量法測定蛋白含量，如蛋白質(zhì)高于2g/L，則用生理鹽水稀釋至1.5g/L。

1.3 .2 操作步驟 取20μl SDS-溴酚藍(lán)稀釋液加入80μl已處理尿液，混勻，吸取5μl加入凝膠中(5孔/板)，擴(kuò)散10min。打開電泳儀裝上緩沖條帶，置凝膠于電泳板上啟動(dòng)，電泳15min。取出凝膠置染色缸烘干；染色；脫色；固定；掃描；報(bào)告結(jié)果。

1.3 .3 SDS-AGE尿蛋白電泳圖譜分析 根據(jù)尿蛋白分子量分布特點(diǎn)，以相對分子量為70KDa為界限，分為：(1)選擇性腎小球性蛋白尿(分子量為5～10KDa)：尿中主要為白蛋白；轉(zhuǎn)鐵蛋白和極少量分子量較大的IgG，IgA；(2)非選擇性腎小球性蛋白尿(分子量為7～20KDa)：尿中出現(xiàn)大量大分子蛋白質(zhì)，如IgM，α-巨球蛋白等；(3)腎小管性蛋白尿(分子量為 1～5KDa)：主要為低分子量蛋白條帶，一般白蛋白不超過總蛋白的40%，如 β-微球蛋白(β-MG)，視黃醇結(jié)合蛋白(RBP)，游離輕鏈等；(4)混合性蛋白尿(分子量為 1～20KDa)：低，中，高分子蛋白條帶均同時(shí)出現(xiàn)；(5)溢出性蛋白尿(分子量分別為25KDa

表1 腎活檢與SDS-AGE尿蛋白電泳分析結(jié)果

和50KDa)：主要是游離輕鏈；(6)生理性蛋白尿：淡染的白蛋白區(qū)帶或未見蛋白區(qū)帶。

表2 SDS—AGE尿蛋白電泳結(jié)果

2 結(jié)果

2.1 12例腎活檢患者SDS-AGE尿蛋白電泳結(jié)果,見表1。

2.2 我院腎內(nèi)科住院60例患者SDS-AGE尿蛋白電泳結(jié)果，見表2。

3 討論

SDS-AGE尿蛋白電泳技術(shù)，是利用SDS是一種陰離子型表面活性劑，蛋白質(zhì)與其連接，形成SDS-蛋白質(zhì)復(fù)合物，這種復(fù)合物蛋白本身的構(gòu)造已經(jīng)破壞，他們都表現(xiàn)出相同的構(gòu)造和相同的負(fù)電荷。當(dāng)這種SDS-蛋白質(zhì)復(fù)合物在具有篩選功能的瓊脂糖凝膠介質(zhì)上電泳時(shí)，蛋白質(zhì)按它們的分子量大小進(jìn)行分離，通過區(qū)分不同位置蛋白區(qū)帶，判斷尿蛋白分子的大小，進(jìn)而判斷為生理性，腎小管性，腎小球性，混合性，溢出性蛋白尿[1]。 SDS-AGE利用瓊脂糖凝膠的選擇成分及多孔性結(jié)合蛋白質(zhì)相對分子量區(qū)分不同蛋白組分，根據(jù)尿蛋白分子量不同，將尿蛋白分為小分子蛋白(β2微球蛋白，α1微球蛋白，視黃醇結(jié)合蛋白)；中分子蛋白(白蛋白，轉(zhuǎn)鐵蛋白)；大分子蛋白(IgG，IgA，IgM，α2-巨球蛋白)。當(dāng)腎小球通透性增加或?yàn)V膜缺損時(shí)，尿中出現(xiàn)中，大分子蛋白，稱為腎小球性蛋白尿；當(dāng)腎小管受損時(shí)，腎小管重吸收功能減弱，尿中出現(xiàn)中，小分子蛋白，稱為腎小管性蛋白尿；當(dāng)腎小球和腎小管同時(shí)發(fā)生病變時(shí)，尿中即出現(xiàn)大，中，小分子蛋白，稱為混合性尿；而生理性蛋白尿則多以中分子蛋白為主。

本文5例健康對照者電泳后均未見任何電泳條帶。60例蛋白尿患者電泳結(jié)果顯示：35例為腎小球性蛋白尿 (其中20例為選擇性腎小球性蛋白尿，15例為非選擇性腎小球性蛋白尿)；8例為腎小管性蛋白尿；10例為混合性蛋白尿；2例為溢出性蛋白尿；5例為生理性蛋白尿。同時(shí)作腎活檢的12例患者其病理結(jié)果顯示：6例為腎小球性蛋白尿(其中3例為選擇性腎小球性蛋白尿，3例為非選擇性腎小球性蛋白尿)，尿蛋白電泳出現(xiàn)大分子蛋白區(qū)帶，白蛋白為主；3例為腎小管性蛋白尿，電泳結(jié)果以小分子蛋白為主；3例為混合性蛋白尿，表明損傷同時(shí)累及腎小管和腎小球，電泳結(jié)果出現(xiàn)大，中，小分子蛋白。由此可見，尿蛋白電泳結(jié)果與腎活檢結(jié)果是相吻合的。腎活檢診斷腎臟疾病準(zhǔn)確性雖然高，但由于腎活檢屬創(chuàng)傷性診斷技術(shù)，存在很多不足，如患者的恐懼；顧慮；可能造成出血；感染等。本文結(jié)果表明尿蛋白電泳與腎活檢結(jié)果有很高的符合率，與陳立等的研究結(jié)果一致[2]，且尿蛋白電泳對患者無任何損傷，取材方便，報(bào)告快速準(zhǔn)確，掃描后圖形和膠片可永久保存，便于分析比較。因此，使用SDS-AGE尿蛋白電泳技術(shù)可區(qū)分尿中蛋白的組分，判斷尿蛋白來源，有助于早期診斷腎臟疾病，特別對未開展腎活檢的基層醫(yī)院具有廣泛的臨床應(yīng)用前景。

[1]沈 霞,張敏華,汪 萍,等.非濃縮尿蛋白電泳的臨床應(yīng)用[J].中華檢驗(yàn)醫(yī)學(xué)雜志,2001,24(5):266～268.

[2]陳 立,莊葉萍.SDS-AGE非濃縮尿蛋白電泳的建立和應(yīng)用[J].天津醫(yī)科大學(xué)學(xué)報(bào),2002,8(1):109.