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    幾種新型消毒劑抗豬瘟病毒效果比較

    2010-03-27 01:02:36臧瑩安金緯虎楊展基李春玲
    獸醫(yī)導刊 2010年5期
    關鍵詞:特靈中和劑戊二醛

    臧瑩安,金緯虎,楊展基,李春玲

    (1.仲愷農(nóng)業(yè)工程學院動物科學系,廣東廣州510225;2.廣東省梅州市大浦縣畜牧局,廣東大浦 514200;3.廣東省農(nóng)業(yè)科學院獸醫(yī)研究所,廣東廣州510640)

    消毒是預防和撲滅傳染病最為有效的措施之一,是傳染病防治工作中的一個重要環(huán)節(jié),選擇理想的消毒劑是做好傳染病防治工作的關鍵。近年來消毒劑的研制開發(fā)受到研究者的極大關注。豬瘟病毒屬披膜病毒科成員,對外界抵抗力強,對許多消毒劑有抵抗力。本試驗選擇豬瘟病毒為研究對象,研究百迪Ⅲ,百迪康,迪威安,迪威寧,力保健和消特靈對豬瘟病毒兔體試驗的效果,以期為豬瘟病的防治尋找有效的新型消毒劑。

    一、試驗材料

    (一)消毒劑 百迪Ⅲ(主要成分戊二醛、雙鏈季銨鹽),百迪康(主要成分戊二醛、癸甲溴銨),迪威安(主要成分碘),力保?。ㄖ饕煞诌^硫酸氫鉀、氯化鈉),消特靈(主要成分二氯異氰脲酸鈉)。均由廣州邁高化學有限公司提供。

    (二)豬瘟兔化疫苗農(nóng)業(yè)部蘭州生物藥廠生產(chǎn)的豬瘟弱毒疫苗毒(C株),20倍稀釋后使用。

    (三)禽巴氏桿菌由廣東省農(nóng)科院獸醫(yī)研究所分離鑒定和保存。

    (四)中和劑硫代硫酸鈉,甘氨酸,吐溫-80,氫氧化鈉。

    (五)試驗動物體重2~3 kg的健康家兔,由南方醫(yī)科大學提供。

    (六)胰蛋白胨大豆肉湯培養(yǎng)基(TSB)廣東省農(nóng)科院獸醫(yī)研究所實驗室自配。

    (七)基本實驗儀器恒溫箱(36±1℃)、干燥箱、高壓滅菌器、試管、恒溫水浴箱(46±l℃)、平皿(90)、吸管 (1 ml、10 ml)、酒精燈、滅菌棉簽等常用設備和器材。

    二、試驗方法

    本次試驗均按照獸用消毒劑技術規(guī)范( 試行 ) 進行。

    (一)中和劑的選擇殘留消毒劑的去除通常采用化學中和法:向消毒液中加入適量的中和劑,使消毒劑濃度得到稀釋,并且消毒作用受到化學中和。將巴氏桿菌復蘇計數(shù),配成濃度為109/ml,然后稀釋至106/ml按下述方法進行涂板計數(shù)。試驗分為6組:

    A:未接種的培養(yǎng)基,證明培養(yǎng)基是否污染。

    B:菌液接種于培養(yǎng)基,證明菌種與培養(yǎng)基是否適宜。

    C:中和劑1ml+菌液1ml,證明中和劑是否有抑菌作用。

    D:消毒劑1ml+菌液1ml,證明消毒劑在試驗濃度下是否有殺菌或抑菌作用。

    E :( 消 毒 劑 1 ml+ 菌 液 1 ml)+中和劑1 ml,消毒劑1 ml和菌液1 ml先作用5 min后再加入中和劑1 ml作用10 min后涂板計數(shù);證明中和劑能否中和殘留消毒劑的抑菌作用。

    F:( 消 毒 劑1 ml+ 中 和 劑1 ml)+菌液1 ml,消毒劑1 ml和中和劑1 ml作用10 min后再加入菌液1 ml作用5 min后涂板計數(shù);證明消毒劑與中和劑的反應物有無抑菌作用。

    分別取事先準備好的平板,按上述方法將中和劑、消毒劑和菌液分別混合作用,然后用移液槍各吸100 ml涂板計數(shù),D和E組接原液;B、C和F組按1:10稀釋至第3管涂板;每組2個平行樣本。

    結果判定:如A組不長菌,B、C、F組菌落數(shù)為90~110個,D組不長菌,通過第E組可判別所選中和劑及其濃度適宜。

    選用中和劑時要遵循下面一些原則:試驗所用試驗指標菌應為消毒試驗選用菌株中抵抗力最弱者,所用試劑、培養(yǎng)基及其他材料都應一致,應以消毒劑未用中和劑中和時的最低有效濃度作為試驗濃度。酚類消毒劑(3.0%~5.0%)、堿類消毒劑、酸類消毒劑、戊二醛、過氧乙酸(0.1%~0.5%)、含氯消毒劑(0.1%~0.5%)、季銨鹽類消毒劑(0.1%~0.5%)的常用中和劑分別為:吐溫80(3.0%~ 5.0%)、等當量酸、等當量堿、甘氨酸、硫代硫酸鈉(0.1%~0.5%)、硫代硫酸鈉(0.1%~1.0%)、吐溫80(0.1%~3.0%)。

    (二)消毒劑抗豬瘟病毒兔體試驗

    1.將不同消毒劑分別稀釋到不同濃度:百迪康、百迪Ⅲ和力保健稀 釋 為1:800、1:1000和1:1500;迪威安稀釋為1:300、1:500和1:800;消特靈稀釋為200 mg/L、100 mg/L和50 mg/L。

    2.將不同濃度的消毒劑4.5 ml與一萬只家兔最小感染量的豬瘟兔化疫苗0.5 ml混合。同時設生理鹽水作為空白對照組:將4.5 ml生理鹽水與一萬只家兔最小感染量的豬瘟兔化疫苗0.5 ml混合;病毒對照組:豬瘟兔化疫苗5.0 ml。分別20℃水浴5 min。

    3.分別取上述溶液1 ml于另外的滅菌試管,并向其中加入中和劑9 ml,混合后作用10 min。

    4. 以上各混合液耳靜脈注射家兔兩只,1 ml/只,所有家兔連續(xù)6 d測體溫,3次/日。試驗兔接毒后36~48 h,測量體溫超過注射前體溫0.5℃以上2個溫次者表明該濃度的消毒劑不能有效殺滅豬瘟病毒。

    體溫反應標準如下:

    定型熱反應(++):潛伏期48~96 h,體溫上升呈明顯曲線,至少有3個溫次超過常溫1℃以上,并稽留18~36 h可判為定型熱。

    輕熱反應(+):潛伏期48~96 h,體溫上升呈明顯曲線,至少有2個溫次超過常溫0.5℃以上,并稽留12~36 h。

    可 疑 反 應(±):潛 伏 期48~96 h,體溫曲線起伏不定,稽留不到12 h;或潛伏期在24 h以上,不足48 h及超過96 h至120 h出現(xiàn)熱反應。

    無反應(-):體溫正常。

    三、試驗結果

    (一)平板培養(yǎng)基上細菌菌落數(shù)

    (二)中和劑種類及濃度根據(jù)細菌平板計數(shù)結果(表1),選定百迪康、百迪Ⅲ、力保健、迪威安、消特靈適用的中和劑分別為甘氨酸(0.008%)和吐溫-80(0.08%)、甘氨酸(0.008%)和吐溫-80(0.08%)、硫代硫酸鈉(1%)、硫代硫酸鈉(1%)和NaOH(0.2%)、硫代硫酸鈉(1%)。

    (三)兔體試驗 見表2。

    由試驗結果可以看出:當百迪Ⅲ、百迪康、迪威寧、消特靈的濃度分別 ≥ 1:800、1:1000、1:300、1:700、1:800、200mg/L時,均可有效殺滅豬瘟病毒。

    表1 平板培養(yǎng)基上細菌菌落數(shù)(個)

    四、討論與分析

    本次試驗通過對幾種新型消毒劑對抗豬瘟病毒兔體試驗研究比較,發(fā)現(xiàn)同一種消毒劑的濃度不同,其體溫反應也不一樣。大多數(shù)消毒劑在高濃度時起殺菌作用,低濃度時則只有抑菌作用。所以當消毒液濃度不同時對豬瘟病毒作用效果不一樣,當濃度達到一定程度后可以殺豬瘟病毒,所以在生產(chǎn)臨床中對消毒藥的應用要注意濃度。在臨床實踐中,還要考慮消毒劑的成本、具體的消毒地點、消毒劑的保存及抗藥性等因素而選擇消毒藥。

    戊二醛復合消毒劑是一種新型復合型消毒劑,其主要活性成分為二甲基可可氯苯甲胺(季胺鹽)和戊二醛。季銨鹽是表面活性類消毒劑,能迅速滲透入胞漿膜脂質體和蛋白質體,改變細胞膜通透性,具有較強的殺菌力。它能形成離子化凝膠和膠囊,具有導電性,能影響蛋白質表面的溶解度,能使蛋白質變性沉淀,從而破壞酶的活性。戊二醛可以和胞壁脂蛋白發(fā)生交聯(lián),和胞壁磷壁酸中的酯聯(lián)殘基形成側鏈,從而封閉細胞壁,阻礙微生物對營養(yǎng)物質的吸收和廢物的排出。從表2可看出當百迪康的濃度≥1:1000時可有效地殺滅豬瘟病毒;當百迪Ⅲ的濃度≥1:800時可有效殺滅豬瘟病毒。

    含氯消毒劑的作用機制為氧化作用和氯化作用,而干擾細胞代謝。一般說來,有效氯濃度越高,作用時間越長,消毒效果越。超氯消毒劑是新一代氯制劑,具有高效、廣譜,無毒無副作用等特點,可用以帶畜消毒,飲水消毒。從表2可看出當力保健的濃度≥1:800時可有效的殺滅豬瘟病毒。

    碘主要以分子(I2)形式發(fā)揮殺菌作用,其原理是碘化和氧化菌體蛋白的活性基因,并與蛋白的氨基結合而導致蛋白變性和抑制菌體的代謝酶系統(tǒng)。試驗中迪威安中的碘分子與表面活性劑結合,制成碘附溶液,當用水稀釋時將緩慢釋放出碘分子,因而是一種高效的殺微生物消毒劑。對引起家畜和家禽主要疾病的病毒、細菌和真菌有殺滅作用。由表2可看出當?shù)贤驳臐舛取?:300時可有效的殺滅豬瘟病毒。

    消特靈粉是由二氯異氰酸鈉配制而成的粉劑,其有效氯含量大于20%。具有高效、廣譜、快速、低殘留等特點,現(xiàn)已廣泛應用于畜禽生產(chǎn)。由表2可看出當消特靈的濃度≥200 mg/L時可有效殺滅豬瘟病毒。但據(jù)報道,動物連續(xù)大量攝入含氯消毒劑可在體內蓄積并引起機體慢性中毒,這一點值得養(yǎng)殖生產(chǎn)者注意。

    表2 抗豬瘟病毒兔體試驗

    本次試驗只是幾種新型消毒劑抗豬瘟病毒的初步試驗,進一步的研究還有待于深化。

    (略)

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