p16蛋白和p27蛋白在惡性骨腫瘤臨床病理特征及預(yù)后關(guān)系①

王貴琴

(鄭州市骨科醫(yī)院 河南 鄭州 450052)

p16蛋白和p27蛋白在惡性骨腫瘤臨床病理特征及預(yù)后關(guān)系①

王貴琴

(鄭州市骨科醫(yī)院 河南 鄭州 450052)

目的 探討在臨床上應(yīng)用中p16和p27蛋白表現(xiàn)在惡性骨腫瘤的病理特征及在腫瘤的產(chǎn)生、發(fā)展及預(yù)后過(guò)程中起到的作用。方法 對(duì)52例軟骨肉瘤、74例骨肉瘤,26例軟骨瘤運(yùn)用免疫組織化學(xué)S-P法進(jìn)行檢驗(yàn),對(duì)照檢驗(yàn)結(jié)果,分別進(jìn)行對(duì)比和研究分析p16蛋白在軟骨肉瘤及p27蛋白在骨肉瘤不同病理分級(jí)、臨床分段、預(yù)后分組中的表達(dá)。結(jié)果 相比軟骨瘤,體現(xiàn)在軟骨肉瘤組織上的p16蛋白高表達(dá)率,差異具統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。相比軟骨肉瘤未復(fù)發(fā)組,其復(fù)發(fā)組體現(xiàn)的p16蛋白的高表達(dá)率,差異具統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。瘤組織分化程度與p16蛋白高表達(dá)率有正比例關(guān)系,p16蛋白高表達(dá)率在軟骨肉瘤不同組織學(xué)分級(jí)中相比,差異提示具統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。與軟骨瘤相比, p27蛋白體現(xiàn)在骨肉瘤組織的高表達(dá)率,差異具統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。與骨肉瘤高生存組做比較,p27蛋白高表達(dá)率在低生存組體現(xiàn)的差異具統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。p27表達(dá)與瘤組織分化程度有正比例關(guān)系,與臨床分期有負(fù)比例關(guān)系。結(jié)論 軟骨肉瘤發(fā)生、發(fā)展及不良預(yù)后的重要指標(biāo)體現(xiàn)在p16蛋白減少或缺失,而骨肉瘤的發(fā)生、發(fā)展及不良預(yù)后的重要指標(biāo)體現(xiàn)在p27蛋白減少或缺失,在臨床應(yīng)用上有重要的影響作用。

p16蛋白 p27蛋白 免疫組化

新近發(fā)現(xiàn)的腫瘤抑制基因中p16、p27基因能對(duì)人類(lèi)多種腫瘤及細(xì)胞系中有失活和突變作用,引起相應(yīng)蛋白的表達(dá)缺失,導(dǎo)致腫瘤細(xì)胞的異常增殖。p16蛋白、p27蛋白的研究對(duì)于骨腫瘤的診斷、鑒別診斷和判斷預(yù)后具有廣闊的前景。在細(xì)胞周期中p16在多種腫瘤細(xì)胞周期增殖和細(xì)胞分化調(diào)控中有著突出作用,是非常重要的調(diào)節(jié)因子。p27可起到抑制細(xì)胞增殖的作用,是細(xì)胞周期的負(fù)性調(diào)節(jié)因子。我們采用免疫組織化學(xué)S-P法分別觀察在52例軟骨肉瘤和26例軟骨瘤組織中p16蛋白提示的表達(dá)情況,分析了p16蛋白與軟骨肉瘤的組織學(xué)分級(jí)及預(yù)后的相關(guān)性;在74例骨肉瘤和26例軟骨瘤組織中p27蛋白的表達(dá)情況,分析了p27蛋白與骨肉瘤的組織學(xué)分級(jí)、臨床分期及預(yù)后的關(guān)系。

1 資料與方法

1.1 一般資料

52例普通型軟骨肉瘤及74例骨肉瘤選自2003年1月至2009年12月我院骨科存檔標(biāo)本蠟塊,其中軟骨肉瘤男性30例,女性22例,男女比1.4∶1,年齡29～61歲,平均年齡41歲。骨肉瘤男性46例,女性28例,男女比例1.6∶1,年齡12～59歲,平均年齡21歲,最高峰是11～21歲41例。病理組織分級(jí):參照Evans等組織學(xué)分級(jí)標(biāo)準(zhǔn),軟骨肉瘤可分為3級(jí)。術(shù)后5年未復(fù)發(fā)者39例(75.0%),復(fù)發(fā)者13例(25.0% )。骨肉瘤參照Price分級(jí)法;參照Enneking標(biāo)準(zhǔn)劃分臨床分期,低生存組為<1年生存期的患者,共計(jì)13例(17.6%),>3年者為高生存組,29例(39.2%)。隨訪(fǎng)全部病例。對(duì)照研究組選用26例軟骨瘤。

表1 p16蛋白在軟骨肉瘤和軟骨瘤組織中的表達(dá)

表2 p16蛋白在軟骨肉瘤預(yù)后分組中的表達(dá)

1.2 實(shí)驗(yàn)方法

運(yùn)用免疫組織化學(xué)鏈霉素親和生物素蛋白—過(guò)氧化物酶法(S-P法)對(duì)標(biāo)本切片(厚度4μm)染色,p16和p27蛋白試劑盒均按說(shuō)明書(shū)使用。陰性對(duì)照是利用磷酸鹽緩沖液(PBS)取代一抗;陽(yáng)性對(duì)照則里用已確診的結(jié)腸癌陽(yáng)性切片。

表3 p27蛋白在骨肉瘤和軟骨瘤組織中的表達(dá)

1.3 結(jié)果評(píng)定

p16和p27蛋白免疫組織化學(xué)染色陽(yáng)性反應(yīng)為棕黃色和(或)棕褐色顆粒,p16蛋白定位于細(xì)胞核或(和)細(xì)胞漿上,p27蛋白主要定位于細(xì)胞核上,自每張切片選10個(gè)高倍視野(×400)觀察陽(yáng)性細(xì)胞與細(xì)胞總數(shù)的比例關(guān)系,無(wú)表達(dá)為陰性(-);表達(dá)≤50%為陽(yáng)性(+);>51%為強(qiáng)陽(yáng)性(++)。

1.4 統(tǒng)計(jì)學(xué)處理

用Fishers精確概率計(jì)算法確定概率,用等級(jí)相關(guān)分析確認(rèn)二者的相關(guān)性,數(shù)據(jù)處理則使用SPSS 10.0統(tǒng)計(jì)學(xué)軟件包。

2 結(jié)果

2.1 p16蛋白表達(dá)、軟骨瘤與軟骨肉瘤的關(guān)系及軟骨肉瘤組織學(xué)分級(jí)情況

軟骨肉瘤與軟骨瘤相比,p16高表達(dá)率差異具統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.01),而p16高表達(dá)率與瘤組織分化程度呈正比例關(guān)系(P<0.1),不同組織學(xué)分級(jí)間p27高表達(dá)率相比(Ⅰ級(jí)與Ⅱ級(jí)、Ⅱ級(jí)與Ⅲ級(jí)、Ⅰ級(jí)與Ⅲ級(jí))差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05),見(jiàn)表1。

2.2 p16蛋白與軟骨肉瘤預(yù)后關(guān)系的表達(dá)

p16蛋白強(qiáng)陽(yáng)性率差異在復(fù)發(fā)組和未復(fù)發(fā)組比較上具統(tǒng)計(jì)學(xué)意義,見(jiàn)表2。p27蛋白體現(xiàn)在骨肉瘤的高表達(dá)率與骨軟骨瘤比較的差異體現(xiàn)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義,而p27表達(dá)與瘤組織分化程度有正比例關(guān)系,與臨床分期有負(fù)比例關(guān)系,見(jiàn)表3。

3 討論

對(duì)細(xì)胞G1/S期轉(zhuǎn)換有關(guān)鍵調(diào)控作用的基因p16蛋白,可抑制細(xì)胞周期蛋白依賴(lài)性激酶(CDK)4和6[1]。p16蛋白的失活引起G1期縮短,細(xì)胞周期加速,特別是DNA在沒(méi)有修復(fù)前過(guò)早地進(jìn)入S期,已經(jīng)是細(xì)胞惡性轉(zhuǎn)化的關(guān)鍵[2]。與腫瘤細(xì)胞分化及預(yù)后有關(guān)的p16,在研究結(jié)果中顯示,軟骨肉瘤p16蛋白高表達(dá)率明顯低于軟骨瘤(P<0.01),由此推斷p16蛋白的減少或缺失與軟骨肉瘤發(fā)生有關(guān)。軟骨肉瘤p16高表達(dá)率與瘤組織分化程度呈正相關(guān)(P<0.01),且在不同組織學(xué)分級(jí)間p16高表達(dá)率相比差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05),說(shuō)明p16表達(dá)對(duì)軟骨肉瘤組織學(xué)分級(jí)有指導(dǎo)作用,即p16表達(dá)率越低,分化程度越差[3]。在不同預(yù)后分組中,未復(fù)發(fā)組與復(fù)發(fā)組之間強(qiáng)陽(yáng)性率相比差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05),復(fù)發(fā)組高表達(dá)率明顯低于未復(fù)發(fā)組。由此可見(jiàn),p16對(duì)軟骨肉瘤的不良預(yù)后有重要影響,即表達(dá)越低,預(yù)后越差。p27蛋白是一個(gè)熱穩(wěn)定蛋白,其基因位于人染色體12p13處,是高度保守的蛋白分子。p27作為細(xì)胞周期的負(fù)性調(diào)控因子,通過(guò)阻止細(xì)胞G1/S期的轉(zhuǎn)換,抑制細(xì)胞增殖,使細(xì)胞有機(jī)會(huì)修復(fù)損傷的DNA或糾正DNA復(fù)制中產(chǎn)生的錯(cuò)誤。p27有誘導(dǎo)細(xì)胞調(diào)亡的作用,用腺病毒載體轉(zhuǎn)染乳腺癌細(xì)胞系MDAMB-231,可使p27過(guò)表達(dá),導(dǎo)致細(xì)胞調(diào)亡明顯增加;同時(shí),p27參與對(duì)細(xì)胞分化的調(diào)控,可誘導(dǎo)未成熟細(xì)胞進(jìn)行分化。近來(lái)研究表明[4],增生組織和癌組織中的p27表達(dá)顯著低于正常組織,其表達(dá)水平與腫瘤的惡性程度、侵襲性的強(qiáng)弱有關(guān),并與細(xì)胞增殖標(biāo)志呈顯著負(fù)相關(guān)。本研究結(jié)果顯示,骨肉瘤p27蛋白高表達(dá)率明顯低于軟骨瘤(P<0.01),由此推斷p27蛋白的減少或缺失與骨肉瘤發(fā)生有關(guān)。瘤組織分化程度越差,p27表達(dá)率越低;且p27表達(dá)率隨著臨床分期的增高而降低降低。在不同預(yù)后分組中,生存期<1年與生存期>3年之間強(qiáng)陽(yáng)性率相比差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.01),低生存期組高表達(dá)率明顯低于高生存期組[5]。綜上所述,作為細(xì)胞周期的調(diào)節(jié)因子的p16蛋白,對(duì)軟骨肉瘤中有重要作用,且對(duì)其的發(fā)生、發(fā)展及預(yù)后具有重要臨床意義。p27作為細(xì)胞周期的負(fù)性調(diào)控因子,p27蛋白減少或缺失是骨肉瘤的發(fā)生、發(fā)展及不良預(yù)后的重要指標(biāo),對(duì)臨床具有重要的指導(dǎo)意義。

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R5

A

1674-0742(2010)07(c)-0066-02

王貴琴:女,大專(zhuān),1966～,河南鄭州,主治醫(yī)師,研究方向:骨科病理或骨腫瘤病理,工作單位:鄭州市骨科醫(yī)院。

2010-05-10