樂(lè)果中毒大鼠肝臟損害及氯磷定治療的影響

高恒波 田英平 姚冬奇 蘇建玲 佟飛 馬玉騰 霍書(shū)花 陳慧 王英輝

急性有機(jī)磷中毒(acute organophasphorous pesticides poisoning，AOPP)是常見(jiàn)的農(nóng)藥中毒，尤其在發(fā)展中國(guó)家，農(nóng)業(yè)人口較多，發(fā)病率高，救治水平低，AOPP病死率可達(dá) 4%～30%[1]。本實(shí)驗(yàn)通過(guò)對(duì) SD大鼠胃內(nèi)灌注致死量樂(lè)果制備 AOPP模型，對(duì)中毒大鼠不予治療及給予氯磷定和阿托品治療或單用阿托品治療，觀察其病情變化，于染毒后不同時(shí)間取血測(cè)丙氨酸氨基轉(zhuǎn)移酶(ALT)進(jìn)行肝細(xì)胞損害的研究。報(bào)告如下。

1 材料與方法

1.1 動(dòng)物分組 SD大鼠 180只，體重 180～220 g(河北醫(yī)科大學(xué)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心提供)。隨機(jī)分為 6組，其中對(duì)照組 6只，未治療組 6只，治療組 168只分為 4組，組別為阿托品組、大、中、小劑量氯磷定 +阿托品組[2]，各治療組染毒后每個(gè)時(shí)段(1、2、4、6、8、10、12 d)6只。

1.2 試劑 樂(lè)果乳油，江蘇南京農(nóng)藥廠生產(chǎn)。氯磷定，北京四環(huán)制藥廠生產(chǎn)(批號(hào):070902)。阿托品，天津金耀氨基酸有限公司生產(chǎn)(批號(hào):0707032)。

1.3 實(shí)驗(yàn)方法 對(duì)照組:給 1ml 0.9%氯化鈉溶液灌胃。剩余各組:給予 2L D50(640 mg/kg)的樂(lè)果灌胃，用 0.9%氯化鈉溶液將設(shè)計(jì)量的樂(lè)果稀釋到 1 ml給大鼠一次性灌胃染毒。未治療組:無(wú)特殊處理。阿托品組:3 min左右給予阿托品10mg/kg肌內(nèi)注射，之后據(jù)大鼠流涎、流淚、呼吸困難等體征情況酌情追加給藥。小劑量氯磷定 +阿托品組:3 min左右給予阿托品10 mg/kg肌內(nèi)注射 +氯磷定 10mg/kg肌內(nèi)注射，之后阿托品據(jù)大鼠體征情況酌情給藥；此后氯磷定于中毒后 2、4、6分別給予5 mg/kg肌內(nèi)注射，然后停藥。中劑量氯磷定+阿托品組:3 min左右給予阿托品 10mg/kg肌內(nèi)注射 +氯磷定 10 mg/kg肌內(nèi)注射，之后阿托品據(jù)大鼠體征情況酌情給藥；氯磷定于中毒后 2、4、6 h分別給予 5 mg/kg肌內(nèi)注射，之后 5 mg/kg肌內(nèi)注射每 6小時(shí) 1次，用至 24h，改為 5mg/kg肌內(nèi)注射每 12小時(shí) 1次，用至 48 h停藥。大劑量氯磷定+阿托品組:3 min左右給予阿托品 10 mg/kg肌內(nèi)注射 +氯磷定 20 mg/kg肌內(nèi)注射，之后阿托品據(jù)大鼠體征情況酌情給藥；氯磷定突擊劑量 10 mg/kg肌內(nèi)注射:1次 /h，連用 3次，之后每 2小時(shí) 1次連用 3次，再每 3小時(shí) 1次用至 24 h，每 4小時(shí) 1次用至 48 h，最后每 6小時(shí) 1次用至第 4天，停用氯磷定。

1.4 6組大鼠中毒后表現(xiàn)與評(píng)定標(biāo)準(zhǔn) 流涎、流淚、肌顫、肌無(wú)力、抽搐、呼吸困難、發(fā)紺；肌無(wú)力評(píng)分標(biāo)準(zhǔn)參照 De Bleecker標(biāo)準(zhǔn)對(duì)大鼠 Ops中毒后肌無(wú)力癥狀進(jìn)行評(píng)分:0分:正?；顒?dòng)，無(wú)肌無(wú)力；1分:后肢肌無(wú)力導(dǎo)致共濟(jì)失調(diào)但仍能自主活動(dòng)；2分:尾部疼痛刺激后僅有輕微活動(dòng)；3分:尾部給予疼痛刺激后肢體不能活動(dòng)，不伴昏迷。

1.5 標(biāo)本采集 未治療組待大鼠死亡，治療組于染毒后 1、2、4、6、8、10、12 d取血，測(cè) ALT值分析其變化規(guī)律。

1.6 統(tǒng)計(jì)學(xué)分析 應(yīng)用 SPSS 11.0統(tǒng)計(jì)軟件，計(jì)量資料以 ˉx±s表示，進(jìn)行方差齊性檢驗(yàn)，有意義者進(jìn)行最小顯著差法(LSD法)，P＜0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 臨床表現(xiàn) 樂(lè)果染毒后，未治療組依次出現(xiàn)流涎、眼分泌物增多、下頜肌肉顫動(dòng)、全身肌顫、呼吸困難、口唇明顯發(fā)紺、肌力逐漸下降，所有大鼠于(9±8)h出現(xiàn)口吐白沫、抽搐而死亡。其他各治療組能很好地改善染毒大鼠癥狀，除阿托品治療組死亡 2只外，其余中毒大鼠均存活。給予氯磷定+阿托品治療組均比同等劑量單用阿托品治療組癥狀輕，恢復(fù)快(P＜0.01)，大劑量氯磷定+阿托品組比中小劑量組癥狀輕、恢復(fù)快(P＜0.01)。中劑量氯磷定 +阿托品組比小劑量組恢復(fù)快(P＜0.01)。 見(jiàn)表 1、2。

表 1 5組主要癥狀發(fā)生時(shí)間比較 n=6，h，ˉx±s

表2 4組主要癥狀持續(xù)時(shí)間比較n=6，h，ˉx±s

2.2 ALT結(jié)果

2.2.1 應(yīng)用氯磷定 3組與阿托品組比較結(jié)果:在染毒后第 6天 3組比較除中小劑量組間無(wú)差異外(P＞0.05)，其余均存在明顯差異(P＜0.05或 ＜0.01)，3氯磷定治療組 ALT峰值均明顯低于阿托品組(P＜0.05)。見(jiàn)表 3。

2.2.2 ALT峰值隨時(shí)間變化均有下列趨勢(shì):染毒后 ALT隨時(shí)間延長(zhǎng)逐漸升高，至 6 d時(shí)達(dá)高峰。見(jiàn)表 3、圖 1。

表 3 4組 ALT值比較 n=6，U/L，ˉx±s

圖 1 4治療組不同時(shí)期 ALT值變化曲線

3 討論

樂(lè)果屬工農(nóng)業(yè)生產(chǎn)常用的高毒類(lèi)有機(jī)磷農(nóng)藥，其中毒機(jī)制為通過(guò)抑制體內(nèi)膽堿酯酶(ChE)活力，從而產(chǎn)生一系列毒蕈堿及煙堿樣癥狀，嚴(yán)重時(shí)可導(dǎo)致患者死亡。有觀點(diǎn)認(rèn)為膽堿酯酶復(fù)能劑對(duì)樂(lè)果中毒療效可疑[3]，本實(shí)驗(yàn)?zāi)M不同劑量氯磷定治療 AOPP的方法，結(jié)果表明治療效果明顯。對(duì)于早期、足量、足療程應(yīng)用氯磷定治療 AOPP，臨床報(bào)道已經(jīng)不少[4]，本實(shí)驗(yàn)進(jìn)一步驗(yàn)證了突擊量應(yīng)用氯磷定治療AOPP的有效性及可行性。

肝臟是人體重要的代謝器官，是機(jī)體的重要防線，在解毒過(guò)程中起重要作用。AOPP患者普遍存在肝功能損害，嚴(yán)重者還可導(dǎo)致肝功衰竭，但臨床工作中往往被忽視。ALT主要存在于肝細(xì)胞漿內(nèi)，細(xì)胞內(nèi)濃度高于血清中 1 000～3 000倍。只要有 1%的肝細(xì)胞被破壞，就可以使血清酶增高一倍[5]。因此，ALT被世界衛(wèi)生組織推薦為肝功能損害最敏感的檢測(cè)指標(biāo)。本研究通過(guò)對(duì) ALT的測(cè)定，表明樂(lè)果中毒大鼠 ALT均有不同程度升高，提示中毒后肝細(xì)胞損害的存在，且其損害程度隨氯磷定用量增加而減少。因此恰當(dāng)?shù)膹?fù)能劑治療不僅可緩解臨床癥狀，還可減輕肝損害的程度。ALT峰值在第 6天出現(xiàn)，考慮與樂(lè)果在體內(nèi)半衰期長(zhǎng)及毒物在胃內(nèi)重吸收有關(guān)，因此有人主張中毒后反復(fù)洗胃 48h[6]，同時(shí)復(fù)能劑不能過(guò)早停用。這種肝損害的發(fā)生與肝細(xì)胞缺氧，細(xì)胞器的損傷(線粒體，溶酶體，粗面內(nèi)質(zhì)網(wǎng)，滑面內(nèi)質(zhì)網(wǎng)，胞膜)密切相關(guān)[7]。同時(shí)樂(lè)果可顯著誘導(dǎo)肝臟中的細(xì)胞色素氧化酶的活性[8]，對(duì)肝臟產(chǎn)生氧化脅迫，從而加重肝損害。

1 關(guān)里，王漢斌，趙得祿.肟類(lèi)復(fù)能劑治療急性有機(jī)磷農(nóng)藥中毒的研究現(xiàn)狀.中華內(nèi)科雜志，2004，43:157-158.

2 田英平，蘇建玲，李星海，等.急性樂(lè)果中毒大鼠實(shí)驗(yàn)治療研究.中國(guó)急救醫(yī)學(xué)雜志，2004，24:799-801.

3 葉任高主編.內(nèi)科學(xué).第 6版.北京:人民衛(wèi)生出版社，2006.964.

4 趙德祿，關(guān)里們，王漢斌.國(guó)內(nèi)外肟類(lèi)能劑在救治有機(jī)磷農(nóng)藥中毒中的應(yīng)用.中華急診醫(yī)學(xué)雜志，2003，12:382-383.

5 高英梅，石桂英，郝玉杰，等.急性重癥有機(jī)磷農(nóng)藥中毒 150例救治體會(huì).河北醫(yī)藥，2009，31，2088.

6 陳成偉主編.藥物與中毒性肝病.第 1版.上海:上?？茖W(xué)技術(shù)出版社，2002.75-80.

7 宋會(huì)霞，劉曉燕.重癥有機(jī)磷農(nóng)藥中毒 95例的搶救與護(hù)理.中國(guó)誤診學(xué)雜志，2010，10:387-388.

8 馬紅霞，程培英.樂(lè)果急性、亞急性暴露對(duì)大鼠膽堿酯酶及細(xì)胞色素氧化酶影響的研究.吉林農(nóng)業(yè)大學(xué)學(xué)報(bào)，2006，28:678-681.