酒石酸亞鐵比色法和高錳酸鉀滴定法測(cè)定茶多酚的比較

王燁軍，徐奕鼎，黃建琴，王文杰，方吳云

（1.安徽省農(nóng)業(yè)科學(xué)院茶葉研究所，祁門 245600；2.國(guó)家茶樹育種安徽分中心，祁門 245600）

酒石酸亞鐵比色法和高錳酸鉀滴定法測(cè)定茶多酚的比較

王燁軍1,2，徐奕鼎1,2，黃建琴1,2，王文杰1,2，方吳云1,2

（1.安徽省農(nóng)業(yè)科學(xué)院茶葉研究所，祁門 245600；2.國(guó)家茶樹育種安徽分中心，祁門 245600）

采用酒石酸亞鐵比色法和高錳酸鉀滴定法對(duì)26個(gè)茶樣進(jìn)行測(cè)試，比較兩種方法所得數(shù)據(jù)的差異，結(jié)果表明：酒石酸亞鐵比色法雖然快速、簡(jiǎn)便、重現(xiàn)性好，但與高錳酸鉀滴定法相比結(jié)果要高5.48～37.88%不等，高錳酸鉀滴定法相對(duì)而言數(shù)據(jù)更接近真實(shí)值。

茶多酚；茶水浸出物；酒石酸亞鐵比色法；高錳酸鉀滴定法

茶多酚（tea polyphenol,TP）是茶葉的主要有效成分之一，具有抗衰老、抗癌、清除人體自由基、抗輻射、降血糖血脂等多種生物學(xué)活性。茶多酚測(cè)定方法較多，酒石酸亞鐵比色法為國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)測(cè)定方法（GB8313-87～GB8313-2003），具有快速、簡(jiǎn)便、重現(xiàn)性好的特點(diǎn)。但酒石酸亞鐵比色法做出的數(shù)據(jù)往往偏高[1，2]。因此，為了探討測(cè)定數(shù)據(jù)偏高的原因，于2009年6月2日至4日，分別對(duì)26個(gè)茶樣采用酒石酸亞鐵比色法和高錳酸鉀滴定法進(jìn)行測(cè)試，比較兩種方法所得數(shù)據(jù)的差異，為茶葉多酚檢測(cè)推薦相對(duì)準(zhǔn)確、簡(jiǎn)便、通用的方法。

1 材料與方法

1.1 材料共測(cè)試樣品26個(gè)，其中1～17號(hào)樣為“國(guó)家級(jí)茶樹良種鳧早2號(hào)高效繁育推廣”送檢樣品；18～26號(hào)由國(guó)家科技支撐項(xiàng)目“主要經(jīng)濟(jì)作物減災(zāi)避災(zāi)關(guān)鍵技術(shù)集成與示范”支項(xiàng)目“茶樹減災(zāi)避災(zāi)關(guān)鍵技術(shù)集成與示范”提供。茶葉樣品采制參照《茶樹種質(zhì)資源描述規(guī)范和數(shù)據(jù)標(biāo)準(zhǔn)》[3]。2009年6月2日至6月4日進(jìn)行茶多酚測(cè)定。

1.2 儀器與試劑UV-2550紫外-可見分光光度計(jì)（日本島津公司生產(chǎn)），751、721分光光度計(jì)，所用試劑均為AR級(jí)。

1.3 測(cè)定方法茶多酚含量檢測(cè)采用酒石酸亞鐵比色法[4]和高錳酸鉀滴定法[5]。

2 結(jié)果與分析

2.1不同日期酒石酸亞鐵比色法測(cè)定結(jié)果比較

表1 不同日期酒石酸亞鐵比色法測(cè)定結(jié)果

表1為不同日期、由不同檢測(cè)人員采用酒石酸亞鐵比色法和UV-2550測(cè)定4個(gè)茶葉樣品所得結(jié)果。由表1知：6月2日和4日采用酒石酸亞鐵比色法所得結(jié)果差距不大，都在允許誤差范圍之內(nèi)，尤其是11、12和25號(hào)樣變異系數(shù)≤0.28。可見酒石酸亞鐵比色法和測(cè)定儀器的穩(wěn)定性都很好，茶葉樣品多酚含量在兩日內(nèi)也沒(méi)因儲(chǔ)放問(wèn)題而發(fā)生變化。2.2不同儀器酒石酸亞鐵比色法測(cè)定結(jié)果比較

表2 不同儀器酒石酸亞鐵比色法測(cè)定結(jié)果

表2為6月4日，采用酒石酸亞鐵比色法并利用UV-2550、751、721分光光度計(jì)三種儀器進(jìn)行比色所得結(jié)果。結(jié)果表明：采用三種儀器測(cè)定的數(shù)據(jù)變異系數(shù)以11號(hào)樣最大，12號(hào)樣最小，分別為2.43%和1.33%?？梢娋剖醽嗚F比色法所得數(shù)據(jù)偏高也不是因?yàn)閮x器精度原因所造成的。

2.3 不同批次試劑酒石酸亞鐵比色法測(cè)定結(jié)果比較

表3為原有試劑和新購(gòu)試劑，采用UV-2550于6月4測(cè)試所得結(jié)果，試劑1為6月2日測(cè)試所配試劑，試劑2為新購(gòu)藥品于6月4日所配試劑。由于原配試劑開瓶時(shí)間較長(zhǎng)，考慮到試劑純度問(wèn)題，故而新購(gòu)一批試劑用于測(cè)試。結(jié)果表明：試劑1測(cè)試結(jié)果普遍高于試劑2的測(cè)試結(jié)果，變異系數(shù)以26號(hào)樣最高，達(dá)到了2.72%，以25號(hào)樣最低，為1.97%，整體比較穩(wěn)定?？梢娫噭?由于存放時(shí)間影響，純度有所下降，但兩批試劑測(cè)試結(jié)果的變異系數(shù)在1.97～2.72%之間，屬于正常波動(dòng)。

表3 試劑對(duì)酒石酸亞鐵比色法結(jié)果的影響

2.4高錳酸鉀滴定法與酒石酸亞鐵比色法測(cè)定結(jié)果比較

表5為6月2日采用酒石酸亞鐵比色法（比色儀器為UV-2550）和6月4日采用高錳酸鉀滴定法所得結(jié)果。由表1知，茶葉樣品多酚含量在兩日內(nèi)沒(méi)有因儲(chǔ)放問(wèn)題而發(fā)生變化，故2組數(shù)據(jù)可以進(jìn)行比較。由表5可知，酒石酸亞鐵比色法測(cè)得結(jié)果普遍要比高錳酸鉀滴定法測(cè)的結(jié)果要高5.48～37.88%不等。尤其是18號(hào)樣酒石酸亞鐵比色法的結(jié)果高達(dá)39.93%，接近42.55%的水浸出物含量。此外，18～26號(hào)樣酒石酸亞鐵比色法測(cè)得結(jié)果比高錳酸鉀滴定法測(cè)的結(jié)果高5.48～12.99%，可能對(duì)于蒸青樣2種方法的差異度要小。

表4 水浸出物含量

表5 高錳酸鉀滴定法與酒石酸亞鐵比色法測(cè)定結(jié)果

3 討論

酒石酸亞鐵比色法是利用多酚類在一定pH值條件下與酒石酸亞鐵形成藍(lán)紫色絡(luò)合物[6]，用分光光度法定量，該法重復(fù)性好。而高錳酸鉀滴定法則除了能氧化茶葉中的多酚類物質(zhì)外，還能氧化部分非多酚類物質(zhì)，如維生素C（其含量不及1%）[7]。理論上講高錳酸鉀滴定法測(cè)定的茶多酚含量應(yīng)該比茶多酚的實(shí)際含量要稍高，然而通過(guò)測(cè)定26個(gè)茶樣的茶多酚含量發(fā)現(xiàn)：酒石酸亞鐵比色法測(cè)定的多酚含量卻遠(yuǎn)高于高錳酸鉀滴定法測(cè)定茶多酚的含量，幅度在5.48～37.88%不等。究其原因可能是：①茶葉中不同多酚的組分對(duì)酒石酸亞鐵的呈色能力有差異。如兒茶素組分中具有連位羥基的呈色能力比具有鄰位羥基的呈色強(qiáng)3倍，導(dǎo)致含連位羥基兒茶素含量高的綠茶或茶葉提取物的多酚測(cè)定結(jié)果偏高，尤其是兒茶素含量超過(guò)70%，用此方法測(cè)定的結(jié)果超過(guò)100%[6]。②酒石酸亞鐵比色法的換算系數(shù)是否準(zhǔn)確。目前酒石酸亞鐵比色法的換算系數(shù)采用3.913，用此系數(shù)測(cè)定某些品種茶葉樣品時(shí)，有的數(shù)值明顯偏高，因此換算系數(shù)采用3.913是否可取，值得研究。③酒石酸亞鐵比色法測(cè)得的結(jié)果偏高可能是因?yàn)榫剖醽嗚F比色法是測(cè)定茶葉中酚類物質(zhì)總量[2]。由表4、表5發(fā)現(xiàn)有的多酚的百分含量幾乎接近水浸出物含量，這與實(shí)際含量不相符，因?yàn)椴枞~水浸出物中除了含有多酚類物質(zhì)外，還有蛋白質(zhì)、咖啡堿、氨基酸等多種組分。

通過(guò)以上分析可知：酒石酸亞鐵比色法雖然重復(fù)性較好，數(shù)據(jù)穩(wěn)定，但所得結(jié)果差異較大，而高錳酸鉀滴定法所得數(shù)據(jù)相對(duì)而言更接近真實(shí)含量，至于滴定終點(diǎn)難以把握的問(wèn)題，如果利用自動(dòng)電位滴定儀能較好地解決。

[1] 陳惠衡，施玲，劉芳，等．酒石酸比色法和Folin-Denis 法測(cè)定茶多酚的比較[J]．中華預(yù)防醫(yī)學(xué)雜志，2008，42（4）：272～274.

[2] 黃皓，毛志方，涂云飛，等．兩種方法測(cè)定茶葉中茶多酚含量的比較[J].中國(guó)茶葉加工，2009，（2）：43～44.

[3] 陳亮，楊亞軍，虞富蓮，等．茶樹種質(zhì)資源描述規(guī)范和數(shù)據(jù)標(biāo)準(zhǔn)，中國(guó)農(nóng)業(yè)出版社，2005年10月第一版：70～72.

[4] GB/T8313-2002 茶 茶多酚的測(cè)定[S].

[5] 商業(yè)部茶葉畜產(chǎn)局,商業(yè)部杭州茶葉加工研究所.茶葉品質(zhì)理化分析[M].上海：上?？茖W(xué)技術(shù)出版社，1989：256～257.

[6] 商業(yè)部茶葉畜產(chǎn)局,商業(yè)部杭州茶葉加工研究所.茶葉品質(zhì)理化分析[M].上海：上?？茖W(xué)技術(shù)出版社，1989：256～258.

[7] 劉仲華，黃建安，王增盛，等．兒茶素提取工藝技術(shù)研究[J].湖南農(nóng)業(yè)大學(xué)學(xué)報(bào)，1997，23：537～542

TS207.3

B

1006-5768（2010）02-0061-03

2009-12-03

國(guó)家科技支撐項(xiàng)目“主要經(jīng)濟(jì)作物減災(zāi)避災(zāi)關(guān)鍵技術(shù)集成與示范”支項(xiàng)目“茶樹減災(zāi)避災(zāi)關(guān)鍵技術(shù)集成與示范”（2008BADC0B03）