正交法優(yōu)選關(guān)木通醋炙炮制工藝

董鳳勇

（德惠市城區(qū)防疫站，吉林德惠130300）

關(guān)木通為馬兜鈴科木質(zhì)藤本木通馬兜鈴去粗皮的木質(zhì)藤莖，木通馬兜鈴主產(chǎn)東北，習(xí)稱“關(guān)木通”。其主要成分有齊墩果酸，常春藤皂苷元，馬兜鈴酸Ⅰ、Ⅵ、B、D，青木香酸，馬兜鈴苷等［1-3］。本實驗以馬兜鈴總酸為指標(biāo)，采用分光光度法，結(jié)合正交設(shè)計對關(guān)木通的醋炙炮制工藝進(jìn)行了研究，以期篩選出醋炙炮制法減除馬兜鈴酸的最佳條件。

1 儀器、材料與試藥

1．1 儀器 T6系列紫外分光光度計（北京普析通用儀器有限責(zé)任公司）；AUY220分析天平（日本島津）；RE-52AA減壓旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀（上海亞榮生化儀器廠）；FW-100粉碎機(jī)（北京中興偉業(yè)儀器有限公司）。

1．2 材料與試藥 氨水，鹽酸，乙酸乙酯，無水乙醇，均為分析純（北京化工廠）；馬兜鈴酸A對照品（中國藥品生物制品檢定所）；關(guān)木通（長春市弘康醫(yī)藥藥材有限公司）；經(jīng)張連學(xué)教授鑒定為馬兜鈴科木質(zhì)藤本木通馬兜鈴去粗皮的木質(zhì)藤莖。

2 實驗方法

2．1 設(shè)計實驗 關(guān)木通醋炙炮制工藝中的影響因素有醋的種類，如陳醋、白醋還有醋精；炒炙前浸泡的時間與浸泡時醋的用量等。根據(jù)預(yù)實驗驗證得傳統(tǒng)工藝中常用的文火炮制可以得到穩(wěn)定的實驗結(jié)果，故確定選擇文火炮制；同時確定正交設(shè)計因素為：醋的種類選擇、炮制前的浸泡時間與醋的用量。各因素相應(yīng)安排了3個水平，選用L9（34）正交表安排試驗，因素水平的安排見表1。

表1 因素及水平

2．2 對照品的制備 精密稱定馬兜鈴酸A對照品2．4mg，置于50 mL容量瓶中，加無水乙醇定溶至刻度，得濃度為0．048mg／mL的儲備液。

2．3 方法學(xué)的考察

2．3．1 標(biāo)準(zhǔn)曲線的繪制 將馬兜鈴酸A對照品儲備液用無水乙醇稀釋成7個不同濃度的對照品溶液，濃度分別為 0．002，0．004，0．006，0．008，0．010，0．012，0．014，0．016 mg／mL。以無水乙醇為空白對照，在317 nm處測定吸光度值，分別測定3次。以馬兜鈴酸A濃度（C）為橫坐標(biāo)，以吸光度平均值（A）為縱坐標(biāo)繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線。

2．3．2 穩(wěn)定性實驗 取A1B1C1醋炙關(guān)木通乙醇提取液，以無水乙醇為空白對照，在 0，2，4，6，16，24 h 測定317 nm處的吸光度值。

2．3．3 精密度實驗 取A3B3C3醋炙關(guān)木通粉末供試品液，按含量測定方法重復(fù)測定6次，測得其含量平均值。

2．3．4 加樣回收率試驗 取已知含量的 A1B1C1醋炙關(guān)木通粉末（過四號篩）0．3 g，精密稱定，共5份，分別加入7．5%氨水60 mL，冷浸過夜，補足重量，濾過，取續(xù)濾液 10 mL，以 6 mol／L 鹽酸調(diào) pH ＝ 2，加10mL乙酸乙酯萃取4次，合并有機(jī)層，用20 mL水洗至中性，回收溶劑，殘渣加無水乙醇溶解并稀釋至10 mL，取2mL加無水乙醇并稀釋至10mL，加入一定量對照品，測定含量，計算加樣回收率。

2．4 樣品中馬兜鈴酸的測定

2．4．1 樣品的炮制 取關(guān)木通生藥，按照 L9（34）正交安排試驗。將9組樣品分別置炒鍋內(nèi)用中火炒制5min。冷卻、干燥，再次稱重，即得。

2．4．2 供試品溶液的制備 取炮制品0．3 g，精密稱定，加入 7．5%氨水 60 mL，稱重，冷浸過夜，補足重量，濾過，取續(xù)濾液10mL，以6 mol／L鹽酸調(diào) pH＝2，加10 mL乙酸乙酯萃取4次，合并有機(jī)層，用20 mL水洗至中性，回收溶劑，殘渣加無水乙醇溶解并稀釋至10 mL，取2 mL加無水乙醇并稀釋至10 mL，即得。

2．4．3 馬兜鈴總酸的含量測定 按上述方法將炮制后的待測藥材粉末制備成供試品溶液，利用紫外分光光度計，以無水乙醇為空白對照，在波長317nm處測定各樣品吸光度A值。代入回歸方程得出濃度值，計算其含量。

3 結(jié)果與分析

3．1 方法學(xué)考察結(jié)果

3．1．1 線性關(guān)系考察結(jié)果 由測定結(jié)果得回歸方程為 A＝55．229C－0．009 4（r＝0．999 8，n＝3）馬兜鈴酸A含量在0．002～0．016mg范圍內(nèi)與其吸光度呈良好線形關(guān)系。

3．1．2 穩(wěn)定性實驗、精密度試驗測定結(jié)果 分別通過對A1B1C1的穩(wěn)定性考察、對A3B3C3的精密度考察，得到各方法學(xué)考察的馬兜鈴總酸含量及其各組含量的平均值與標(biāo)準(zhǔn)偏差。結(jié)果表明：（1）A1B1C1在 0，2，4，6，16，24 h測定吸光度值，其標(biāo)準(zhǔn)偏差，即RSD% ＝0．510 2%，表明實驗的穩(wěn)定性良好；（2）A3B3C3在相同條件下對同一樣品分別測定6次，RSD% ＝0．725 7%，實驗的精密度良好；（3）穩(wěn)定性實驗RSD＜2%，精密度實驗RSD＜2%，符合2005版《中國藥典》規(guī)定。

3．1．3 加樣回收率的測定 結(jié)果表明，平均加樣回收率為 97．86%，RSD＝1．809% ＜5%，符合《中國藥典》規(guī)定。

3．2 L9（34）正交實驗馬兜鈴總酸含量的測定 結(jié)果表明，在不同的因素中馬兜鈴酸的含量測定結(jié)果值在0．701 3%～0．895 4%范圍內(nèi)，其中以醋炙法 A3B3C2中馬兜鈴總酸含量最高，A1B1C1中總酸含量最低。以馬兜鈴酸總酸為考察指標(biāo)，進(jìn)行F檢驗得到：醋的種類對總酸含量有顯著的影響，醋的用量與浸泡時間對結(jié)果影響不顯著。直觀分析對馬兜鈴酸總酸含量的影響因素的順序為C＞A＞B。通過正交實驗得到醋炙法炮制關(guān)木通最佳條件為A1B1C1（即：醋的用量15mL；浸泡時間：20min；醋的種類：陳醋）。

4 結(jié)論

本實驗通過正交方法對關(guān)木通進(jìn)行了L9（34）的正交設(shè)計，并采用紫外分光廣度法對其馬兜鈴總酸含量進(jìn)行了測定。得到了醋炙關(guān)木通炮制的最佳條件是 A1B1C1（即：醋的用量 15 mL；浸泡時間：20 min；醋的種類：陳醋）。醋炙法炮制關(guān)木通得到的含量結(jié)果穩(wěn)定。優(yōu)選的工藝穩(wěn)定可行。

［1］中華人民共和國藥典委員會．中國藥典［S］．北京：人民衛(wèi)生出版社，1995：12．

［2］張曉明，鄭法雷．馬兜鈴酸引起的腎臟損害［J］．國外醫(yī)學(xué)：泌尿系統(tǒng)分冊，2000（3）：60．

［3］趙輝，李占靈，張敬來．不同取代基馬兜鈴酸分子穩(wěn)定性研究［J］．河南農(nóng)業(yè)大學(xué)學(xué)報，2006，40（4）：436-439．