牙周膜干細(xì)胞向脂肪細(xì)胞方向定向誘導(dǎo)分化實(shí)驗(yàn)

賀慧霞 劉洪臣 王東勝 曹均凱 張海鐘 鄂玲玲

（中國(guó)人民解放軍總醫(yī)院 口腔醫(yī)學(xué)研究所，北京 100853）

牙周膜干細(xì)胞向脂肪細(xì)胞方向定向誘導(dǎo)分化實(shí)驗(yàn)

賀慧霞 劉洪臣 王東勝 曹均凱 張海鐘 鄂玲玲

（中國(guó)人民解放軍總醫(yī)院 口腔醫(yī)學(xué)研究所，北京 100853）

目的 探討人牙周膜干細(xì)胞（PDLSCs）向脂肪細(xì)胞定向分化潛能，分析其分化過(guò)程中形態(tài)與功能變化。方法 免疫磁珠法分離人PDLSCs，用成脂誘導(dǎo)液連續(xù)誘導(dǎo)21 d，通過(guò)倒置顯微鏡、透射電鏡、流式細(xì)胞儀、RTPCR、Western blot及免疫熒光方法觀察誘導(dǎo)細(xì)胞形態(tài)、結(jié)構(gòu)變化，分析其表面脂肪細(xì)胞特異性標(biāo)志——低密度脂蛋白（LPL）和過(guò)氧化物酶體增殖物受體γ（PPAR-γ）的基因及蛋白表達(dá)時(shí)相及表達(dá)量，油紅O染色檢測(cè)脂滴分泌情況。結(jié)果 誘導(dǎo)21 d，誘導(dǎo)細(xì)胞呈脂肪細(xì)胞樣圓形細(xì)胞，超微結(jié)構(gòu)觀察可見(jiàn)胞漿中大量脂肪細(xì)胞特征性脂滴。流式分析結(jié)果顯示，有96.54%的PDLSCs向脂肪細(xì)胞分化。誘導(dǎo)細(xì)胞表達(dá)脂肪細(xì)胞特異性表面標(biāo)志LPL mRNA和PPAR-γ mRNA及PPAR-γ蛋白，且隨誘導(dǎo)時(shí)間延長(zhǎng)PPAR-γ蛋白表達(dá)量增加。誘導(dǎo)細(xì)胞產(chǎn)生油紅O陽(yáng)性染色的脂滴。結(jié)論人PDLSCs在適當(dāng)條件下可定向分化為脂肪細(xì)胞樣細(xì)胞，并具有脂肪細(xì)胞形態(tài)、結(jié)構(gòu)和功能特點(diǎn)，具有可塑性。

牙周膜干細(xì)胞； 誘導(dǎo)； 分化； 脂肪細(xì)胞

牙周膜干細(xì)胞（periodontal ligament stem cells，PDLSCs）是牙周組織發(fā)育完成后存留于牙周膜中未分化的間充質(zhì)細(xì)胞。與骨髓基質(zhì)干細(xì)胞（bone marrow stromal stem cells，BMSCs）相似，PDLSCs不僅具有自我更新的能力，還具有在一定誘導(dǎo)條件下向脂肪、軟骨、神經(jīng)、肌肉等多個(gè)非來(lái)源組織的不同細(xì)胞分化的潛能。目前研究[1-2]已證實(shí)，BMSCs具有分化為包括骨、韌帶、脂肪、軟骨、肌肉在內(nèi)的幾乎所有組織細(xì)胞的潛能，并可向不同胚層的細(xì)胞類(lèi)型分化，成為多種組織或器官組織工程的種子細(xì)胞。PDLSCs也具有多向分化潛能，但目前有關(guān)PDLSCs橫向分化的報(bào)道較少。本研究從細(xì)胞、分子及基因水平探討PDLSCs向脂肪細(xì)胞分化的潛能、特點(diǎn)和機(jī)制，以進(jìn)一步認(rèn)識(shí)PDLSCs的生物學(xué)特性，為從不同角度認(rèn)識(shí)PDLSCs的特性，研究其分化機(jī)制提供依據(jù)。

1 材料和方法

1.1 主要試劑和儀器

LG-DMEM培養(yǎng)基、胎牛血清、L-谷氨酰胺（Gibco公司，美國(guó)），胰蛋白酶（Amresco公司，美國(guó)），Ⅰ型膠原酶（Sigma公司，美國(guó)），Dispase（Roche公司，美國(guó)），小鼠抗人STRO-1單克隆抗體（R＆D公司，美國(guó)）。磁珠結(jié)合的抗小鼠IgM二抗（Dynal公司，挪威）。兔抗人過(guò)氧化物酶體增殖物受體γ（peroxisome proliferator activated receptor-γ，PPAR-γ）、油紅O（Sigma公司，美國(guó)），羅丹紅標(biāo)記羊抗兔Ig G（中國(guó)博士德生物有限公司）。吲哚美辛、胰島素、3-異丁基-1-甲基黃嘌呤（3-isobutyl-1-methylxanthine，IBMX）、地塞米松（Cyagen-Bioscience公司，美國(guó)）。TRizol（Promega公司，美國(guó)），Ribonuclease核酸酶抑制劑（Takara D2310A）、M-MLV反轉(zhuǎn)錄酶（Promega M170A）、Taq DNA合成酶（Takara公司，美國(guó)）；cDNA第一鏈合成試劑盒、PCR Mastermix、Marker、EB染料（中國(guó)天根公司）。二氧化碳恒溫孵箱（Thermo Forma公司，美國(guó)），IX70型倒置相差顯微鏡（Olympus公司，日本），磁力架（15mL，Dynal公司，挪威），流式細(xì)胞儀（BD Bioscience公司，美國(guó)），PCR檢測(cè)系統(tǒng)（杭州博日科技有限公司），DYCP-31D型水平式電泳槽（北京六一儀器廠），紫外分光光度計(jì)UV-2000（Unico公司，美國(guó)）。

1.2 主要試劑配制

成脂誘導(dǎo)液A：基礎(chǔ)培養(yǎng)基A、100mmol·L-1吲哚美辛、250 mmol·L-1IBMX、5mg·mL-1胰島素、1mmol·L-1地塞米松、20%FBS。成脂誘導(dǎo)維持液B：基礎(chǔ)培養(yǎng)基B、5mg·mL-1胰島素。油紅O復(fù)合染液：油紅O干粉0.5 g，溶于100mL異丙醇，過(guò)濾后常溫棕色瓶保存。

1.3 方法

1.3.1 細(xì)胞培養(yǎng)和分離 收集臨床正畸拔除的、健康的前磨牙或阻生第三磨牙（15～29歲），參照Seo等[3]方法培養(yǎng)和分離PDLSCs。方法簡(jiǎn)述如下：無(wú)菌條件下，刮取根中1/3部牙周膜組織，剪碎，加入含3mg·mL-1Ⅰ型膠原和4mg·mL-1Dispase的消化液，37℃消化1 h，將細(xì)胞懸液通過(guò)70μm細(xì)胞篩網(wǎng)，用含20%胎牛血清的LG-DMEM培養(yǎng)基接種至培養(yǎng)瓶中，置37℃、含5%二氧化碳的孵箱中培養(yǎng)，3 d換液，細(xì)胞生長(zhǎng)達(dá)80%匯合時(shí)傳代，取第3代細(xì)胞用STRO-1免疫磁珠分選系統(tǒng)分離PDLSCs并鑒定[4]。

1.3.2 脂肪誘導(dǎo) 取磁珠分離的第2代PDLSCs，以每毫升2×104個(gè)密度接種于培養(yǎng)瓶?jī)?nèi)，培養(yǎng)3 d待細(xì)胞長(zhǎng)到90%匯合后，換A液誘導(dǎo)3 d，然后換B液誘導(dǎo)1 d。按照3∶1方案，連續(xù)誘導(dǎo)21 d，每日鏡下觀察細(xì)胞生長(zhǎng)及形態(tài)變化，以未誘導(dǎo)細(xì)胞為對(duì)照。

1.3.3 透射電鏡觀察 分別取誘導(dǎo)與未誘導(dǎo)細(xì)胞各約2×106個(gè)，1 200 r·min-1離心5min，以3%戊二醛固定2 h，再用1%四氧化鋨固定2 h，經(jīng)梯度丙酮脫水、環(huán)氧樹(shù)脂浸透包埋、超薄切片、醋酸雙氧鈾和醋酸鉛雙重染色后，透射電鏡觀察、攝片。

1.3.4 RT-PCR檢測(cè) 分別收集誘導(dǎo)和未誘導(dǎo)細(xì)胞各約2×106個(gè)，檢測(cè)低密度脂蛋白（low density lipoprotein，LPL）mRNA、PPAR-γmRNA表達(dá)時(shí)相和豐度。引物設(shè)計(jì)LPL：上游：5′-GGGCATGTTGACATTTACCC-3′，下游：5′-AGCCCTTTCTCAAAGGCTTC-3′（NM_000237，預(yù)計(jì)產(chǎn)物大小221bp）；PPAR-γ：上游：5′-TGAAACGAGTCAGCTGGATG-3′；下游：5′-TGAAATTCATGGCTGTGGAA-3′（NM_138711，162 bp）；β-actin：上游：5′-TGACGTGGACATCCGCAAAG-3′，下游：5′-CTGGAAGGTGGACAGCGAGG-3′（NM_001101，205 bp）。

1.3.5 PPAR-γ免疫熒光染色 收集連續(xù)誘導(dǎo)21 d的細(xì)胞，制作細(xì)胞爬片，PBS洗滌3遍。5%牛血清白蛋白封閉20min，加入PPAR-γ一抗（工作濃度為1∶50），4℃孵育過(guò)夜，PBS洗3遍。避光條件下加入TRITC標(biāo)記二抗，37℃孵育40min，PBS洗后甘油封片，激光共聚焦觀察。PBS代替一抗做陰性對(duì)照。

1.3.6 Western blot半定量檢測(cè)PPAR-γ蛋白表達(dá)收集未誘導(dǎo)和連續(xù)誘導(dǎo)21 d的細(xì)胞各約每毫升5×106個(gè)，常規(guī)方法加入RIPA裂解液于冰上進(jìn)行蛋白提取。紫外分光光度儀做蛋白定量分析，SDS－PAGE凝膠電泳，PVDF膜在300 mA的恒流條件下轉(zhuǎn)膜100min。再以5%脫脂奶粉4℃封閉過(guò)夜，加入兔抗人PPAR-γ抗體，同時(shí)加入β-actin作為內(nèi)參對(duì)照。常溫孵育4 h，TBS洗膜后，經(jīng)辣根過(guò)氧化物酶標(biāo)記的羊抗兔IgG孵育50min。最后將膜置于濾紙上，加入化學(xué)發(fā)光液，X線片顯影、定影、攝片。

1.3.7 油紅O染色 將連續(xù)誘導(dǎo)21 d的細(xì)胞棄誘導(dǎo)液，PBS洗2遍，10%甲醛固定10min。室溫下油紅O染色30min，棄染液，60%異丙醇洗2遍，蒸餾水洗2遍，蘇木素核復(fù)染，鏡下觀察。

2 結(jié)果

2.1 細(xì)胞形態(tài)觀察

與對(duì)照組比較（圖1左），PDLSCs脂肪誘導(dǎo)7 d，細(xì)胞體積變大，突起變短或消失，呈圓形、卵圓形或短梭形，胞漿中開(kāi)始出現(xiàn)高折光性的細(xì)小脂滴。隨著誘導(dǎo)時(shí)間的延長(zhǎng)，出現(xiàn)脂滴的細(xì)胞逐漸增多，成葡萄串狀，細(xì)胞體積逐漸增大，胞內(nèi)及細(xì)胞之間尚可見(jiàn)融合的脂滴（圖1右）。

圖1 PDLSCs對(duì)照組與脂肪誘導(dǎo)組細(xì)胞形態(tài)比較 倒置相差顯微鏡 ×200Fig 1 A comparison on cell morphology between control group and adipogenic induction group inverted phase contrast microscope ×200

2.2 透射電鏡觀察

與未誘導(dǎo)細(xì)胞比較（圖2左），誘導(dǎo)細(xì)胞呈脂肪細(xì)胞的超微結(jié)構(gòu)特點(diǎn)。表現(xiàn)為細(xì)胞體積顯著增大，胞漿中充滿了大小不等的脂滴，脂滴是無(wú)結(jié)構(gòu)的膜被囊狀小泡。胞漿內(nèi)細(xì)胞器較少，被壓向一邊。胞核增大，核仁大而明顯，異染色質(zhì)較多，位于核膜內(nèi)緣（圖2右）。

圖2 對(duì)照組與脂肪誘導(dǎo)組超微結(jié)構(gòu)比較Fig 2 Comparative study on cell ultrastructure between control group and induction group

2.3 RT-PCR檢測(cè)

脂肪誘導(dǎo)21 d，誘導(dǎo)細(xì)胞均表達(dá)脂肪細(xì)胞特異性基因LPL和PPAR-γ的mRNA（圖3），且LPLmRNA表達(dá)豐度高。對(duì)照組均不表達(dá)這2種基因。

圖3 脂肪誘導(dǎo)21 d，誘導(dǎo)細(xì)胞表達(dá)LPLmRNA和PPAR-γmRNAFig 3 After a 21-day-induction，the induced cells express LPL mRNA and PPAR-γmRNA

2.4 Western blot檢測(cè)

誘導(dǎo)細(xì)胞中脂肪細(xì)胞數(shù)量增加，細(xì)胞表面特異性分子PPAR-γ表達(dá)量也增多，誘導(dǎo)21 d較14 d蛋白表達(dá)量顯著增加（圖4）。對(duì)照組則無(wú)PPAR-γ表達(dá)。

圖4 脂肪誘導(dǎo)14、21 d，誘導(dǎo)細(xì)胞PPAR-γ蛋白表達(dá)量增加Fig 4 After induced by adipogenic medium for 14 d and 21 d，the induced cells increasingly express PPAR-γprotein

2.5 免疫熒光染色

大多數(shù)誘導(dǎo)細(xì)胞PPAR-γ抗體染色陽(yáng)性，胞漿呈紅色熒光，但熒光中等強(qiáng)度（圖5），對(duì)照組無(wú)熒光顯示。

2.6 油紅O染色

圖5 脂肪誘導(dǎo)細(xì)胞PPAR-γ抗體染色陽(yáng)性 TRITC免疫熒光×400Fig 5 The induced cell stained positively with PPAR-γantibody TRITC immunofluorescence staining ×400

脂肪誘導(dǎo)21 d，誘導(dǎo)細(xì)胞內(nèi)及細(xì)胞間有油紅O特異性著色的脂滴形成，脂滴大小不等，呈紅色，有的位于細(xì)胞內(nèi)融合成串珠狀，著色較淺；有的匯聚于細(xì)胞間成片狀，著色較重（圖6）。對(duì)照組無(wú)染色。

圖6 脂肪誘導(dǎo)21 d，誘導(dǎo)細(xì)胞產(chǎn)生大量油紅O染色的脂滴油紅O染色 ×100Fig 6 After 21-day-induction,oil red O staining revealed the appearance of fat drops oil red O staining ×100

3 討論

橫向分化潛能被認(rèn)為是干細(xì)胞的主要特性之一，也是鑒定干細(xì)胞的重要指標(biāo)。生理狀況下，牙周膜中沒(méi)有脂肪組織，PDLSCs的形成細(xì)胞中也沒(méi)有任何脂肪細(xì)胞，那么PDLSCs能否分化為功能性的脂肪細(xì)胞呢？本實(shí)驗(yàn)采用了地塞米松、胰島素、吲哚美辛和IBMX聯(lián)合誘導(dǎo)。其中地塞米松能激活核激素受體超家族成員糖皮質(zhì)激素受體，誘導(dǎo)脂肪合成和轉(zhuǎn)運(yùn)相關(guān)基因啟動(dòng)表達(dá)的重要調(diào)控蛋白C/EBP的表達(dá)，同時(shí)降低脂肪細(xì)胞分化抑制因子pref-1的表達(dá)[5]。IBMX則通過(guò)抑制cAMP的降解，提高細(xì)胞內(nèi)cAMP的水平，而cAMP是一種重要的脂肪誘導(dǎo)劑[6]。胰島素與胰島素受體-1（insulin receptor-1，IR-1）結(jié)合，能激活并調(diào)節(jié)ERK1/ERK2信號(hào)傳導(dǎo)途徑，通過(guò)降低核蛋白磷酸酶PPA的活性來(lái)調(diào)節(jié)CREB的磷酸化和轉(zhuǎn)錄活性。CREB的激活不僅促進(jìn)C/EBP的表達(dá)，也增加PPAR-γ的表達(dá)[7]。PPAR-γ在脂肪細(xì)胞分化的早期表達(dá)，是脂肪細(xì)胞分化過(guò)程中必需的關(guān)鍵轉(zhuǎn)錄因子，激活后可促使BMSCs、PDLSCs等向脂肪細(xì)胞分化，其表達(dá)水平反映了脂肪細(xì)胞分化的活躍程度。地塞米松、胰島素、IBMX和吲哚美辛這4種誘導(dǎo)劑聯(lián)合應(yīng)用誘導(dǎo)干細(xì)胞雖有文獻(xiàn)報(bào)道[8]，但用于PDLSCs成脂誘導(dǎo)研究極少，且誘導(dǎo)后細(xì)胞形態(tài)、功能變化研究尚未見(jiàn)報(bào)道。本實(shí)驗(yàn)采用此誘導(dǎo)方案，通過(guò)PPAR-γ流式細(xì)胞分析也證實(shí)其中有96.54%PDLSCs誘導(dǎo)分化為脂肪細(xì)胞，表明此方案是體外誘導(dǎo)PDLSCs向脂肪細(xì)胞方向分化有效途徑。

PDLSCs脂肪誘導(dǎo)過(guò)程中，細(xì)胞形態(tài)、結(jié)構(gòu)和功能均發(fā)生了顯著變化。誘導(dǎo)7 d細(xì)胞形態(tài)開(kāi)始由成纖維樣梭形細(xì)胞變?yōu)槎掏黄鸹蚨嘟切渭?xì)胞，至21 d時(shí)細(xì)胞體積增大，胞內(nèi)出現(xiàn)高折射率的脂滴，呈脂肪細(xì)胞樣細(xì)胞表現(xiàn)。進(jìn)一步通過(guò)透射電鏡發(fā)現(xiàn)了特征性細(xì)胞內(nèi)脂滴的形成，且細(xì)胞器較少。細(xì)胞形態(tài)變化常常伴隨著功能的改變，通過(guò)RT-PCR基因分析檢測(cè)到誘導(dǎo)細(xì)胞表達(dá)脂肪細(xì)胞特異性PPAR-γmRNA和LPLmRNA，而且免疫熒光和Western blot也顯示，誘導(dǎo)細(xì)胞分泌功能性PPAR-γ蛋白，且具有時(shí)間依賴(lài)性，而且分泌大量油紅O染色陽(yáng)性的脂滴。這些研究均表明，誘導(dǎo)細(xì)胞具有脂肪細(xì)胞的形態(tài)、結(jié)構(gòu)和功能，同時(shí)也表明PDLSCs具有橫向分化潛能。

從細(xì)胞來(lái)源看，成熟的脂肪細(xì)胞經(jīng)脂肪前體細(xì)胞誘導(dǎo)分化而來(lái)，而脂肪前體細(xì)胞又來(lái)源于中胚層中多能干細(xì)胞經(jīng)逐步分化產(chǎn)生的間充質(zhì)干細(xì)胞[9-10]。間充質(zhì)干細(xì)胞是如何分化為脂肪細(xì)胞呢？目前對(duì)其分化的分子機(jī)制尚不十分明了，但對(duì)其中的一些重要環(huán)節(jié)研究有了新的進(jìn)展。研究[11-12]發(fā)現(xiàn)，核激素受體家族成員PPAR-γ、轉(zhuǎn)錄因子家族成員C/EBP以及脂肪決定分化因子1是目前已鑒定出的、對(duì)脂肪細(xì)胞分化和脂肪生成起決定性作用的調(diào)控因子。各種信號(hào)分子形成網(wǎng)絡(luò)調(diào)控模式，調(diào)節(jié)著細(xì)胞向脂肪細(xì)胞的分化。其中細(xì)胞內(nèi)cAMP的水平起關(guān)鍵性作用，成脂誘導(dǎo)劑通過(guò)抑制cAMP的降解而提高胞內(nèi)cAMP的水平，cAMP可通過(guò)激活cAMP反應(yīng)元件結(jié)合蛋白來(lái)調(diào)控C/EBPa和C/EBPb表達(dá)，并進(jìn)而促進(jìn)脂肪細(xì)胞的產(chǎn)生[6]。而CREB的激活不僅可以促進(jìn)C/EBP的表達(dá)，還能夠增加PPAR-γ的表達(dá)。本實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明誘導(dǎo)細(xì)胞21 d PPAR-γ表達(dá)量顯著高于14 d的表達(dá)量，提示隨誘導(dǎo)時(shí)間延長(zhǎng)，可能有更多的PDLSCs分化為成熟的脂肪細(xì)胞。

PPAR-γ和LPL是成熟脂肪細(xì)胞的標(biāo)志酶。PPAR-γ是過(guò)氧化物酶體增殖劑激活受體，屬于Ⅱ型核激素受體超家族，是需要配體激活的一類(lèi)核受體。PPAR-γ不僅能刺激前脂肪細(xì)胞分化為成熟脂肪細(xì)胞，使脂肪細(xì)胞的數(shù)目增加，而且與成熟脂肪細(xì)胞內(nèi)脂肪形成密切相關(guān)，在脂肪細(xì)胞分化的早期起十分重要作用并促進(jìn)細(xì)胞內(nèi)脂質(zhì)積聚[13]。LPL則是脂肪細(xì)胞分化晚期表達(dá)的蛋白，特異性表達(dá)于脂肪細(xì)胞膜表面，是成熟的脂肪細(xì)胞標(biāo)志脂蛋白脂酶，參與脂質(zhì)代謝[9，14]。這些研究表明PDLSCs脂肪誘導(dǎo)后細(xì)胞分化為成熟的、功能性脂肪細(xì)胞。國(guó)內(nèi)韓劼等[15]曾報(bào)道對(duì)人牙周膜成纖維細(xì)胞進(jìn)行脂肪誘導(dǎo)，通過(guò)透射電鏡和油紅O染色發(fā)現(xiàn)有脂滴形成，認(rèn)為牙周膜細(xì)胞具有分化為脂肪細(xì)胞的潛能。實(shí)際上，牙周膜細(xì)胞是不同分化潛能和分化階段的混合細(xì)胞群，而形成脂滴只是脂肪細(xì)胞的特征之一。本研究對(duì)經(jīng)STRO-1免疫磁珠分離純化的PDLSCs進(jìn)行脂肪誘導(dǎo)，有96.54%的細(xì)胞分化為脂肪細(xì)胞，這些分化細(xì)胞具有成熟脂肪細(xì)胞的形態(tài)、結(jié)構(gòu)和功能。這不僅表明PDLSCs具有橫向分化潛能，也將為PDLSCs分化調(diào)控機(jī)制研究提供重要依據(jù)。另外，PDLSCs如此高效的成脂誘導(dǎo)潛能，有望成為修復(fù)軟組織缺損及整形美容的可靠、簡(jiǎn)便的又一干細(xì)胞來(lái)源。

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（本文編輯 湯亞玲）

Experiment on inducing human periodontal ligament stem cells into adipose cells

HE Hui-xia,LIU Hongchen,WANG Dong-sheng,CAO Jun-kai,ZHANG Hai-zhong,E Ling-ling.（Institute of Dental Research,General Hospital of Chinese PLA,Beijing100853,China）

ObjectiveTo explore the capability of human periodontal ligament stem cells（PDLSCs）differentiating into adipose cellsin vitroand to determine their changes in cell morphology,structure and function during differentiation.MethodsPDLSCs isolated by magnetic-activated cell selection were treated continuously with adipogenic medium for 21 d.Then the cell morphology,ultrastructure,adipose specific markers of low density lipoprotein（LPL）and peroxisome proliferator activated receptor-γ（PPAR-γ） were analyzed by inverted contrast microscope,transmission electron microscope（TEM）,flow cytometry,immunofluorescence,RT-PCR and Western blot,respectively. These adipose-like cells were also identified by oil red O staining to determine the formation of lipid droplet,and the non-induced cells were used as control.Results After continuous induction,the treated cells differentiated into adipose-like cells with round shape,and large amount of lipid drop in cytoplasm.96.54%of the PDLSCs were found to differentiate into adipose cells as showed by flow cytometry,the specific markers of LPL mRNA and PPAR-γ mRNA,and oil red O staining,respectively.Further,PPAR-γprotein was detected in the induced cells in a timedependent manner.ConclusionHuman PDLSCs have the potential of differentiating into adipose cells under appropriate condition,and the differentiated cells exhibited characteristics of adipose cells both from cell morphology and from their functions.

periodontal ligament stem cells； induce； differentiate； adipose cell

R 781

A

10.3969/j.issn.1000-1182.2010.02.022

1000－1182（2010）02－0203-05

2009-05-25；

2009-10-29

中國(guó)博士后科學(xué)基金資助項(xiàng)目（20070420077）；中國(guó)博士后科學(xué)基金特別資助項(xiàng)目（200801061）；國(guó)家自然科學(xué)基金資助項(xiàng)目（30772450）

賀慧霞（1970—），女，甘肅人，副主任醫(yī)師，博士

劉洪臣，Tel：010-66939974