人涎腺腺樣囊性癌相關(guān)同源異型盒基因差異表達(dá)的研究

夏輝 李龍江 韓波 潘劍 高寧

（口腔疾病研究國(guó)家重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室，四川大學(xué)，四川 成都 610041）

人涎腺腺樣囊性癌相關(guān)同源異型盒基因差異表達(dá)的研究

夏輝 李龍江 韓波 潘劍 高寧

（口腔疾病研究國(guó)家重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室，四川大學(xué)，四川 成都 610041）

目的 研究人涎腺腺樣囊性癌及正常腺體中同源異型盒基因的表達(dá)差異，認(rèn)識(shí)該基因與涎腺腺樣囊性癌發(fā)生發(fā)展的關(guān)系。方法 設(shè)立6組嚴(yán)格配對(duì)的腺樣囊性癌/癌旁腺體標(biāo)本及2組腺樣囊性癌細(xì)胞株/癌旁腺體標(biāo)本，采用定制的含232條人類同源異型盒基因探針的Oligo芯片進(jìn)行分析，歸納2組間差異基因信息。熒光實(shí)時(shí)定量PCR技術(shù)檢測(cè)高度可疑的涎腺腺樣囊性癌相關(guān)基因在不同樣本中的mRNA表達(dá)水平，統(tǒng)計(jì)學(xué)分析找出明顯異常表達(dá)的同源異型盒基因。結(jié)果 組織樣本出現(xiàn)上調(diào)的同源異型盒基因67條，下調(diào)基因54條；細(xì)胞樣本中出現(xiàn)上調(diào)的同源異型盒基因12條，下調(diào)基因15條；同時(shí)出現(xiàn)在組織及細(xì)胞樣本中的上調(diào)基因1條（TGIF）；下調(diào)基因7條，出現(xiàn)頻數(shù)較高的為EVX1、PITX1。熒光實(shí)時(shí)定量PCR檢測(cè)顯示TGIF、EVX1在ACC-M與正常腺體組織的表達(dá)量有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異。結(jié)論 同源異型盒基因作為細(xì)胞正常增殖和分化的關(guān)鍵基因，可能與涎腺腺樣囊性癌形成過(guò)程密切相關(guān)。

腺樣囊性癌； 同源異型盒基因； 基因芯片

同源異型盒基因作為細(xì)胞正常增殖和分化的關(guān)鍵基因，掌控著細(xì)胞的發(fā)展方向，與細(xì)胞惡性轉(zhuǎn)化及惡性增殖密切相關(guān)。尋找和確定在涎腺腺樣囊性癌發(fā)病中起作用的關(guān)鍵同源異型盒基因，將對(duì)涎腺腺樣囊性癌發(fā)病機(jī)制的研究探索及其臨床治療提供一個(gè)新的契機(jī)。本研究通過(guò)定制表達(dá)譜芯片和熒光實(shí)時(shí)定量PCR技術(shù)，對(duì)人涎腺腺樣囊性癌及正常腺體標(biāo)本進(jìn)行基因表達(dá)差異的定性和定量研究，探索差異表達(dá)的同源異型盒基因在涎腺腺樣囊性癌發(fā)生、發(fā)展及去分化過(guò)程中的變化規(guī)律。

1 材料和方法

1.1 病例及樣本采集

四川大學(xué)華西口腔醫(yī)院頭頸腫瘤病房涎腺腺樣囊性癌住院患者6例，男性4例，女性2例，年齡32～71歲，平均年齡48.2歲。其中3例位于右頜下腺，2例位于左腭，1例位于左舌下腺。依UICC（2002年）[1]TNM分期，T2期2例，T3期3例，T4期1例。所有患者均經(jīng)活檢確診，且術(shù)前未接受任何治療。原發(fā)灶切除后，于病灶中心區(qū)切取5mm×5mm×5mm組織塊，剔去多余組織；同時(shí)于病灶外2 cm處切取同樣大小的正常腺體組織。DEPC液清洗血跡，無(wú)菌紗布輕拭水跡。將各標(biāo)本均分為二，一份行10%甲醛溶液固定，石蠟切片，蘇木精-伊紅染色，病理學(xué)觀察；另一份放入DEPC液預(yù)處理的凍存管內(nèi)，并立即投入液氮中，以備RNA提取。樣本采集過(guò)程于10 min內(nèi)在無(wú)菌下完成，以避免RNA降解和試驗(yàn)者RNase污染。人涎腺腺樣囊性癌細(xì)胞系A(chǔ)CC-2（低轉(zhuǎn)移株）及ACC-M（高轉(zhuǎn)移株）由四川大學(xué)口腔疾病研究國(guó)家重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室保存，按常規(guī)方法復(fù)蘇。

1.2 總RNA的抽提、純化及質(zhì)檢

將組織塊標(biāo)本稱重后，首先在液氮中研碎，然后在組織勻漿機(jī)上充分勻漿，移至15 mL RNase free離心管中離心，去上清液，加入預(yù)冷的總RNA提取液Trizol（Invitrogen公司，美國(guó)，每100mg組織加入1mL Trizol）。轉(zhuǎn)入1.5mL的新鮮EP管內(nèi)，氯仿提取，異丙醇沉淀，沉淀溶解于生物級(jí)純水中備用。為了更好地去除基因組DNA的污染，采用無(wú)RNase的DNA酶Ⅰ處理，從而提高樣品純度。應(yīng)用分光光度儀檢測(cè)總RNA的質(zhì)量和濃度，采用OligodT親和純化法純化樣品總RNA，1%瓊脂凝膠電泳質(zhì)檢（正常電泳圖譜有清晰的28 s、18 s和5 s條帶）。RNA總量不足的標(biāo)本進(jìn)行平行的線性放大，以便進(jìn)行后續(xù)檢測(cè)。

1.3 定制同源異型盒基因表達(dá)譜芯片

利用美國(guó)國(guó)立生物技術(shù)信息中心網(wǎng)站上的人類基因組數(shù)據(jù)庫(kù)，以Homeobox（同源異型盒）為檢索詞檢索得到同源異型盒基因各成員，依相關(guān)生物學(xué)軟件設(shè)計(jì)寡核苷酸芯片探針共232條。定制芯片使用進(jìn)口Oligo基片，點(diǎn)樣儀采用GeneMachine公司的OmniGrid 100，總共點(diǎn)制8張芯片。陽(yáng)性點(diǎn)14個(gè)，陰性點(diǎn)1個(gè)，芯片內(nèi)每個(gè)矩陣的第一列和第二列的前面7個(gè)點(diǎn)為質(zhì)控點(diǎn)，各矩陣的質(zhì)控點(diǎn)都相同；每個(gè)基因在同一芯片內(nèi)重復(fù)4次試驗(yàn)。

1.4 芯片雜交

實(shí)驗(yàn)標(biāo)記方法應(yīng)用cDNA直接標(biāo)記法，其中實(shí)驗(yàn)組RNA采用cy3熒光標(biāo)記，對(duì)照組RNA采用熒光cy5標(biāo)記。標(biāo)記后利用等量的探針進(jìn)行雜交。掃描雜交芯片，讀取數(shù)據(jù)，計(jì)算ratio值（cy3/cy5比值），判定結(jié)果。ratio值在0.5～2.0范圍內(nèi)的基因不存在表達(dá)差異，ratio≥2.0為上調(diào)基因，ratio≤0.5為下調(diào)基因。

1.5 逆轉(zhuǎn)錄成cDNA

提取組織中的總RNA后，以其中的mRNA作為模板，采用隨機(jī)引物利用逆轉(zhuǎn)錄酶反轉(zhuǎn)錄成cDNA。實(shí)驗(yàn)采用MBI公司的Revert AidTMFrist Strand cDNA Synthesis Kit，在PCR儀上進(jìn)行擴(kuò)增。

1.6 設(shè)計(jì)引物

根據(jù)GeneBank上TGIF、EVX1及PITX1的mRNA序列CDS區(qū)，分別設(shè)計(jì)3對(duì)引物。為了避免基因組DNA的污染，上下游引物均設(shè)計(jì)為跨過(guò)內(nèi)含子。引物間片段長(zhǎng)分別為18、20、18 bp。另外選取人的18 s序列作為參照物，同樣設(shè)計(jì)引物。

1.7 常規(guī)PCR擴(kuò)增，熒光實(shí)時(shí)定量PCR檢測(cè)TGIF、

EVX1、PITX1和參照物18 s

采用瓊脂糖凝膠電泳定性檢測(cè)目的基因的擴(kuò)增水平，熒光實(shí)時(shí)定量PCR檢測(cè)TGIF、EVX1、PITX1和參照物18 s，測(cè)定每個(gè)樣品管中熒光強(qiáng)度增加到某一特定閾值（threshold）時(shí)的擴(kuò)增循環(huán)數(shù)（Ct值），根據(jù)Ct值與標(biāo)準(zhǔn)模板初始拷貝的對(duì)數(shù)值作圖，得到該樣品的標(biāo)準(zhǔn)曲線。該實(shí)驗(yàn)重復(fù)3次進(jìn)行。

1.8 數(shù)據(jù)處理和統(tǒng)計(jì)學(xué)分析

在測(cè)定TGIF、EVX1及PITX1基因的同時(shí)測(cè)定作為內(nèi)參的內(nèi)源性管家基因18 s，并以18 s為比較標(biāo)準(zhǔn)，折算出各樣本起始模板數(shù)的相對(duì)數(shù)量關(guān)系。

具體方法采用Livak和Schmittgen根據(jù)數(shù)學(xué)推導(dǎo)得出的比較閾值法，公式如下：目的基因的相對(duì)量=2－△△Ct，△Ct=[Ct GI（待測(cè)樣品）－Ct18 s（待測(cè)樣品）]－[Ct GI（校正樣品）－Ct18 s（校正樣品）]。在該公式中，Ct是熱循環(huán)儀檢測(cè)到反應(yīng)體系中熒光信號(hào)的強(qiáng)度值，GI是目的基因，校正樣品是任何被選做代表1倍目的基因表達(dá)量的樣品。所以，2－△△Ct表示的是實(shí)驗(yàn)組目的基因的表達(dá)相對(duì)于對(duì)照組的變化倍數(shù)。

采用統(tǒng)計(jì)學(xué)軟件SPSS 12.0對(duì)每組的2－△△Ct進(jìn)行單因素方差分析，如有差別采用LSD法進(jìn)行多組間參數(shù)的兩兩比較。

2 結(jié)果

2.1 臨床標(biāo)本病理結(jié)果

標(biāo)本組織學(xué)切片行蘇木精-伊紅染色，病理診斷證實(shí)為涎腺腺樣囊性癌，癌旁組織為正常腺體組織。

2.2 RNA質(zhì)檢結(jié)果

圖1 15例樣本總RNA電泳圖，可見(jiàn)清晰的28 s、18 s、5 s 3條區(qū)帶Fig 1 Electrophoregram of total RNA examples（15 specimens）showed three zones as 28 s,18 s and 5 s

本實(shí)驗(yàn)收集6組涎腺腺樣囊性癌患者標(biāo)本（腺樣囊性癌組織，癌旁正常腺體組織），2組涎腺腺樣囊性癌細(xì)胞樣本（ACC-2、ACC-M及正常腺體組織），共計(jì)15個(gè)樣本，分別將提取的總RNA進(jìn)行1%瓊脂糖凝膠電泳，可見(jiàn)清晰的28 s、18 s、5 s 3條區(qū)帶（圖1），質(zhì)檢合格。

2.3 定制芯片雜交、掃描及信號(hào)分析

每張芯片中檢測(cè)2個(gè)樣本（實(shí)驗(yàn)組與對(duì)照組），涎腺腺樣囊性癌組織、細(xì)胞分別與正常腺體組織樣本作對(duì)照。芯片雜交前掃描圖像及各組試驗(yàn)雜交后掃描圖像見(jiàn)圖2。綠色代表低表達(dá)基因，紅色代表高表達(dá)基因，黃色為無(wú)差異表達(dá)?？梢?jiàn)芯片信號(hào)強(qiáng)度高，片內(nèi)信號(hào)均一，同一樣品2張芯片2個(gè)重復(fù)點(diǎn)相關(guān)系數(shù)均高于80%，同一芯片內(nèi)部質(zhì)控陽(yáng)性點(diǎn)信號(hào)的差異系數(shù)大于0.33的不超過(guò)30%，各項(xiàng)指標(biāo)均達(dá)到標(biāo)準(zhǔn)，實(shí)驗(yàn)成功。

圖2 定制芯片雜交、掃描及信號(hào)結(jié)果Fig 2 The maps of hybridization,scanning and signal of the performed gene expression microarray

2.4 共同差異基因的篩選

本研究共檢測(cè)6組組織樣本和2組細(xì)胞樣本，將8張雜交芯片的數(shù)據(jù)文件導(dǎo)入EXCEL軟件，以升序排列ratio值，分別篩選出芯片中試驗(yàn)組出現(xiàn)上、下調(diào)的Homeobox基因并存檔。對(duì)照8張芯片的差異表達(dá)基因，統(tǒng)計(jì)各差異表達(dá)Homeobox基因在各組樣本中出現(xiàn)的頻度（frequence，F(xiàn)），F(xiàn)值較高的共同差異表達(dá)基因見(jiàn)表1。

表1 在涎腺腺樣囊性癌和正常涎腺組織中差異表達(dá)的部分同源異型盒基因Tab 1 Homeobox genes with differential expression between salivary adenoid cystic carcinoma and normal surrounding tissues

統(tǒng)計(jì)結(jié)果顯示：出現(xiàn)上調(diào)的Homeobox基因67條，F(xiàn)值≥3的基因?yàn)?條，同時(shí)出現(xiàn)在組織及細(xì)胞樣本中的上調(diào)基因1條（TGIF）。下調(diào)的Homeobox基因數(shù)量累計(jì)共54條，F(xiàn)值≥3的基因?yàn)?0條。EVX1的頻數(shù)較高且同時(shí)在組織及細(xì)胞樣本中出現(xiàn)下調(diào)，PITX1的頻數(shù)較高，但在細(xì)胞樣本中無(wú)差異表達(dá)。

2.5 熒光實(shí)時(shí)定量PCR的結(jié)果

選取3條篩選出的基因（TGIF、EVX1和PITX1）進(jìn)行熒光實(shí)時(shí)定量PCR檢測(cè)，將實(shí)驗(yàn)所得目標(biāo)基因和內(nèi)參基因的Ct值用公式進(jìn)行數(shù)據(jù)處理，2-ΔΔCt值就是各個(gè)樣本間基因表達(dá)量的倍數(shù)關(guān)系。具體結(jié)果見(jiàn)表2。

表2 各組實(shí)時(shí)定量PCR一般資料Tab 2 The results of real time PCR

將EVX1、PITX1及TGIF在NT（正常腺體組織）、ACC-2及ACC-M中的表達(dá)量進(jìn)行單因素方差分析，EVX1的P值為0.001，PITX1的P值為0.000，TGIF的P值為0.029，均有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異。將各組細(xì)胞樣本與正常腺體樣本進(jìn)行兩兩比較，發(fā)現(xiàn)EVX1在ACC-M中的表達(dá)量顯著低于正常腺體組織，兩者均值相差約200倍；PITX1在ACC-2及ACC-M中的表達(dá)量與正常腺體組織相比均無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)差異；TGIF在ACC-M中的表達(dá)量顯著高于正常腺體組織，兩者均值相差約8倍（圖3）。

圖3 TGIF、EVX1及PITX1的相對(duì)表達(dá)量Fig 3 The relative expression of TGIF，EVX1 and PITX1

3 討論

同源異型盒基因是一類在進(jìn)化上高度保守的DNA序列，最初作為同源異型突變中的果蠅座位而得名[2]。目前研究發(fā)現(xiàn)的同源異型盒基因家族成員有大約200個(gè)，存在酵母乃至人類幾乎所有的真核細(xì)胞中，占脊椎動(dòng)物整個(gè)基因組數(shù)量的0.2%[3]。同源異型盒基因均具有183個(gè)核苷酸長(zhǎng)度的同源區(qū)，編碼由61個(gè)氨基酸組成的同源蛋白域，即同源異型域（homeodomain，HD）[4]。該區(qū)域通常折疊成3個(gè)螺旋狀結(jié)構(gòu)，并通過(guò)第2、3螺旋間的螺旋－折角－螺旋模塊與靶基因的DNA序列特異性錨定結(jié)合，進(jìn)而實(shí)現(xiàn)對(duì)下游受控基因的激活或抑制作用[5]。同源異型盒基因通過(guò)編碼一類特殊的轉(zhuǎn)錄調(diào)節(jié)因子對(duì)所在細(xì)胞的分化進(jìn)行調(diào)節(jié)；并且還能通過(guò)調(diào)節(jié)控制信息傳遞相關(guān)分子和多種激素的合成來(lái)影響相鄰細(xì)胞間及遠(yuǎn)距離的信息傳遞，從而調(diào)節(jié)胚胎的發(fā)育和成熟。研究[6]發(fā)現(xiàn)，同源異型盒基因在成人組織細(xì)胞的增殖、分化過(guò)程中也發(fā)揮著主控作用。同源異型盒基因發(fā)生突變，個(gè)體發(fā)育以及組織器官形成就可能出現(xiàn)異常，嚴(yán)重者還可以誘發(fā)細(xì)胞的惡性轉(zhuǎn)化，最終形成腫瘤[7]。此外，還有學(xué)者發(fā)現(xiàn)同源異型盒基因可能在惡性腫瘤轉(zhuǎn)移中起復(fù)雜的制衡作用[8]。

本研究利用定制表達(dá)譜芯片在6組人涎腺腺樣囊性癌/癌旁正常腺體組織間發(fā)現(xiàn)差異表達(dá)基因共121條（上調(diào)基因67條，下調(diào)基因54條），通過(guò)比較6組人涎腺腺樣囊性癌組織和2組涎腺腺樣囊性癌細(xì)胞樣本的Homeobox基因表達(dá)譜，找出其中具有共性的異常表達(dá)基因，以搜索出可能與涎腺腺樣囊性癌發(fā)生、分化相關(guān)的Homeobox基因。

在67條上調(diào)基因中，DLX5的表達(dá)頻數(shù)最高，但在2組細(xì)胞樣本中均無(wú)差異表達(dá)，而TGIF的表達(dá)頻數(shù)雖然相對(duì)較低，但在組織樣本及細(xì)胞樣本中均出現(xiàn)了差異表達(dá)。由于細(xì)胞樣本成分相對(duì)均一，能更好地反映腫瘤的細(xì)胞學(xué)特性，因此選用上調(diào)基因TGIF進(jìn)行熒光實(shí)時(shí)定量PCR檢測(cè)。在54條下調(diào)基因中，EVX1出現(xiàn)頻數(shù)最高，在組織樣本及細(xì)胞樣本中均有差異表達(dá)，高度懷疑EVX1與涎腺腺樣囊性癌的發(fā)生發(fā)展密切相關(guān)，因此進(jìn)行了進(jìn)一步的熒光實(shí)時(shí)定量PCR檢測(cè)。PITX1在組織樣本中出現(xiàn)頻數(shù)較高，而在細(xì)胞樣本中無(wú)差異表達(dá)。由于基因芯片的結(jié)果可能存在假陽(yáng)性或假陰性的情況，因此對(duì)該基因進(jìn)行了熒光實(shí)時(shí)定量PCR檢測(cè)，通過(guò)定量的方法發(fā)現(xiàn)PITX1在細(xì)胞樣本和組織樣本中的表達(dá)無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)差異，進(jìn)一步驗(yàn)證了基因芯片結(jié)果的可靠性。

通過(guò)基因芯片篩選和熒光實(shí)時(shí)定量PCR技術(shù)的進(jìn)一步驗(yàn)證，以下2條基因被認(rèn)為是與涎腺腺樣囊性癌高度相關(guān)的基因。1）TGIF：TGIF在高轉(zhuǎn)移細(xì)胞株ACC-M中相對(duì)表達(dá)量顯著升高，推測(cè)該基因可能與涎腺腺樣囊性癌的轉(zhuǎn)移能力相關(guān)。TGIF主要的功能為抑制轉(zhuǎn)錄作用，其突變會(huì)導(dǎo)致前腦及顱顏發(fā)育畸形。目前已證實(shí)TGIF是針對(duì)轉(zhuǎn)化生長(zhǎng)因子-β（transforming growth factor-β，TGF-β）和視黃醛信號(hào)傳導(dǎo)通路的抑制分子，且MAPK通路的活化能延長(zhǎng)其半衰期，是TGF-β信號(hào)傳導(dǎo)通路的抑制分子，而TGF-β早期抑制腫瘤生長(zhǎng)，晚期促進(jìn)腫瘤浸潤(rùn)與轉(zhuǎn)移。但TGIF在腫瘤發(fā)生中的作用尚不清楚。研究認(rèn)為TGIF能抑制TGF-β1對(duì)細(xì)胞生長(zhǎng)和細(xì)胞周期的負(fù)調(diào)控作用，多數(shù)腫瘤細(xì)胞和間質(zhì)細(xì)胞能分泌TGF-β1，這些腫瘤細(xì)胞有可能利用TGIF，抑制TGF-β對(duì)自身的生長(zhǎng)抑制作用，從而促進(jìn)腫瘤的發(fā)生、發(fā)展與轉(zhuǎn)移。胡忠良等[9]將TGIF反義寡核苷酸瞬時(shí)轉(zhuǎn)染胃癌細(xì)胞株SGC-7901，并進(jìn)行相關(guān)細(xì)胞學(xué)檢測(cè)，結(jié)果發(fā)現(xiàn)SGC-7901細(xì)胞轉(zhuǎn)染TGIF反義寡核苷酸后，細(xì)胞增生受到部分抑制，但細(xì)胞的凋亡和細(xì)胞周期分布無(wú)明顯改變。TGF-β1處理后，TGIF反義寡核苷酸轉(zhuǎn)染的SGC-7901細(xì)胞的增生受到明顯抑制。還有研究[10]發(fā)現(xiàn)，TGIF通過(guò)抑制TGF-β和視黃醛可能促進(jìn)食管癌的發(fā)生與發(fā)展。2）EVX1：基因芯片檢測(cè)時(shí)EVX1在ACC-2、ACC-M中均表現(xiàn)為下調(diào)差異基因，在6組涎腺腺樣囊性癌組織樣本中有5組出現(xiàn)該基因的下調(diào)。熒光實(shí)時(shí)定量PCR顯示EVX1在ACCM中的表達(dá)量明顯低于正常腺體組織，兩者均值相差約200倍，具有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異。EVX1在ACC-M和ACC-2中相對(duì)表達(dá)量的差異說(shuō)明該基因可能對(duì)涎腺腺樣囊性癌的發(fā)生、發(fā)展及誘導(dǎo)分化起重要的抑制作用。EVX1蛋白可能是胚胎形成時(shí)重要的轉(zhuǎn)錄抑制因子，但其在人類中的作用目前尚沒(méi)有相關(guān)研究報(bào)道。

本實(shí)驗(yàn)通過(guò)定制表達(dá)譜芯片和熒光實(shí)時(shí)定量PCR技術(shù)，發(fā)現(xiàn)TGIF、EVX1在涎腺腺樣囊性癌組織和正常涎腺組織中有明顯差異表達(dá)，推測(cè)這2條基因可能在涎腺腺樣囊性癌的發(fā)生、發(fā)展及誘導(dǎo)分化中起重要的作用。

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（本文編輯 湯亞玲）

Research on the differently expressed Homeobox genes related to adenoid cystic carcinoma

XIA Hui,LI Long-jiang,HAN Bo,PAN Jian,GAO Ning.（State Key Laboratory of Oral Diseases,Sichuan University,Chengdu610041,China）

ObjectiveTo investigate the differently expressed Homeobox genes between adenoid cystic carcinoma of salivary gland and normal gland tissue,and find out the effect of Homeobox genes on oncogenesis and differentiation of adenoid cystic carcinoma of salivary gland.MethodsSix strictly paired specimens including adenoid cystic carcinoma and its surrounding normal gland tissue and two pairs of specimens including cell strain of adenoid cystic carcinoma and its surrounding normal gland tissue were established.Customized Oligo microarray which contains probes of 232 human Homeobox genes was used to analyze and conclude two groups of different genes data.RTPCR technique was used to examine the mRNA expressing level of highly suspected relevant genes of adenoid cystic carcinoma in different specimens.Obvious differently expressed Homeobox genes were found through statistical analyses.Results In tissue specimens Homeobox genes were found 67 up-regulated and 54 down-regulated,and in cell specimens Homeobox genes were found 12 up-regulated and 15 down-regulated.One up-regulated gene and 7 down-regulated genes were found both in tissue and cell specimens,among which EVX1 and PITX1 were the most frequent.RT-PCR showed that there was statistical expressing difference between TGIF,EVX1 and normal gland tissue in ACC-M.ConclusionAs the key gene to cellular proliferation and differentiation,Homeobox genes are closely relevant to the oncogenesis of adenoid cystic carcinoma of salivary gland.

adenoid cystic carcinoma； Homeobox gene； gene microarray

R 739.8

A

10.3969/j.issn.1000-1182.2010.02.019

1000－1182（2010）02－0190-05

2009-07-02；

2009-11-27

高等學(xué)校博士學(xué)科點(diǎn)專項(xiàng)科研基金資助項(xiàng)目（0040610-079）；四川大學(xué)校青年基金資助項(xiàng)目（040305505051）

夏輝（1978—），男，江蘇人，講師，博士

李龍江,Tel：028-85501428