南瓜中多糖測(cè)定方法的探討

李宏高， 魏利軍

(1.陜西科技大學(xué)生命科學(xué)與工程學(xué)院， 陜西 西安 710021； 2.陜西省輕工業(yè)研究設(shè)計(jì)院， 陜西 西安 710054)

0 前 言

南瓜中含碳水化合物15%左右(老南瓜)，其中含有大量的功能性多糖.南瓜多糖能顯著刺激胰島素的分泌，降低空腹血糖的水平，有促進(jìn)單核巨噬功能、增強(qiáng)肌體自我保護(hù)的作用.南瓜中的多糖從化學(xué)結(jié)構(gòu)上來分析，它不同于單糖與低聚糖(雙糖)，是非還原性的糖類，這種多糖在性質(zhì)上與單糖、低聚糖不同，一般不溶于水，有的即使能溶于水，也只是形成膠體溶液，無甜味，一般不能形成結(jié)晶，在酶或酸的作用下以水解程度不等而完全生成為單糖，再用堿性酒石酸銅測(cè)定出含量.由于國標(biāo)中沒有測(cè)多糖的方法[1]，本文根據(jù)多糖的這一特性，經(jīng)多次實(shí)驗(yàn)最終確定了它的測(cè)定方法，且檢測(cè)結(jié)果的準(zhǔn)確度和精密度均到了滿意的效果.

1 實(shí)驗(yàn)部分

1.1 主要試劑和儀器

主要化學(xué)試劑：堿性酒石酸銅(甲液 、乙液)；濃鹽酸：市售，n=12 mol/L；30%的氫氧化鈉；3，5-二硝基水楊酸試劑(甲液、乙液)：將甲乙兩液混合，貯于棕色瓶中于7～10天后使用；10%NaOH溶液；葡萄糖 (AR)；酒石酸甲鈉(AR)；所有試劑如未注明規(guī)格均為分析純.

儀器：pHD-3C酸度計(jì)，上海大普儀器有限公司；Spectrumlab22pc 可見分光光度計(jì)；其它為常用理化實(shí)驗(yàn)儀器.

1.2 樣品

陜西佳縣老南瓜.

1.3 測(cè)定方法

1.3.1 水解

準(zhǔn)確稱取樣品0.5 g放入250 mL三角瓶中，加水50 mL溶解，加濃鹽酸25 mL，裝上回流裝置于沸水浴中水解2 h，取出，用水冷卻至室溫，加30%的氫氧化鈉中和至中性，用水稀釋至250 mL容量瓶中備用.

1.3.2 滴定

在200 mL三角瓶中加入堿性酒石酸銅試劑甲、乙液各5 mL，加水20 mL，置電爐上到煮沸，用樣品水解液進(jìn)行滴定，記錄消耗水解液的毫升數(shù).

1.3.3 多糖含量計(jì)算

式中：f—10 mL費(fèi)林氏溶液相當(dāng)于葡萄糖的量，v—樣品消耗量，m—樣品稱取量，X%—南瓜多糖質(zhì)量百分?jǐn)?shù).

2 結(jié)果與討論

2.1 結(jié)果分析

表1 兩種方法測(cè)定結(jié)果比較

2.1.1 與標(biāo)準(zhǔn)法測(cè)定結(jié)果的比較[2]

南瓜樣品分別用國家標(biāo)準(zhǔn)規(guī)定的葡萄糖氧化酶-比色法(GB/T16285-1996)和本法同時(shí)測(cè)定，分析結(jié)果見表1.

2.1.2 方法的準(zhǔn)確度

由表1看出，相對(duì)誤差Er(%)均較小，說明同一樣品用兩種不同方法測(cè)定，其測(cè)定結(jié)果基本相同，無顯著性差異.為了檢驗(yàn)本法的準(zhǔn)確度，平行采用9份南瓜樣品，分別加入葡糖糖標(biāo)準(zhǔn)溶液進(jìn)行了加標(biāo)回收實(shí)驗(yàn)，其回收率R1#=95.6～102.0(%)，R2#=96.0～99.6(%)，說明該法的準(zhǔn)確度較高.

2.1.3 方法的精密度

對(duì)同一南瓜樣重復(fù)進(jìn)行了9次測(cè)定，測(cè)定結(jié)果的相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差為：RSD1#=2.72%，RSD2#=2.86%.從本法測(cè)定結(jié)果的均值和RSD值來看，該法的重現(xiàn)性好，精密度較為理想.

2.2 討論

表2 溶液pH對(duì)南瓜多糖含量的影響

2.2.1 pH對(duì)南瓜多糖量的影響

在溫度為65 ℃時(shí)，南瓜溶解度為75.82%～81.30%，在不同pH下測(cè)定南瓜的含糖量，結(jié)果見表2.

由表2看出，隨著pH的升高，南瓜多糖量增加，但pH升高到一定程度，隨著pH的升高，南瓜多糖量下降，所以測(cè)定南瓜多糖量適宜的pH為5.00～5.20.

2.2.2 南瓜的溶解度對(duì)南瓜多糖量的影響

表3 溶解度對(duì)南瓜多糖量的影響

在溫度為65 ℃，pH為5.00～5.20時(shí)測(cè)定南瓜多糖含量，不同的溶解度對(duì)南瓜提取物多糖含量的影響如表3所示.

由表3看出，隨著溶解度的增大，南瓜多糖含量增大，然而到達(dá)一定程度，南瓜多糖量會(huì)隨著溶解增大而降低，所以最適宜的溶解度為75.82.%～81.30%.

表4 滴定溫度對(duì)南瓜多糖量的影響

2.2.3 滴定時(shí)溫度[3]

隨著反應(yīng)溫度的升高，反應(yīng)液中南瓜多糖含量增加；相反，隨著溫度的下降，南瓜多糖含量減少(如表4所示)，但是反應(yīng)溫度和溶液的pH、南瓜的溶解度等因素是相互影響、相互制約的.

由表4可以看出，滴定溫度為65 ℃比較適宜，它基本上和溶液的pH、溶解度要求相一致.

2.2.4 煮沸時(shí)間[4]

一般煮沸時(shí)間短，消耗樣品多，測(cè)定出南瓜多糖的含量高.反之，消耗樣品量少.測(cè)出的南瓜多糖含量低.

2.2.5 滴定速度[5]

滴定速度快，消耗樣品量多，測(cè)定南瓜多糖含量高.反之，消耗樣品量少，測(cè)出的南瓜多糖含量低.

3 結(jié)束語

用酸水解法測(cè)定南瓜中多糖含量的方法操作簡單，測(cè)定快速，適應(yīng)性強(qiáng)，準(zhǔn)確度和精密度高.除可測(cè)定南瓜中的多糖外，本法還可推廣到其他原料中的多糖測(cè)定，是一種可以滿足生產(chǎn)實(shí)際的準(zhǔn)確而快捷的測(cè)定多糖的方法.

參考文獻(xiàn)

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