光阻法檢查注射液中不溶性微粒影響因素分析

呂長(zhǎng)淮，吳 瑋，胡 丹

（安徽省宿州市藥品檢驗(yàn)所，安徽宿州 234000）

不溶性微粒指除氣泡外可流動(dòng)的、隨機(jī)存在于液體制劑包括滅菌粉針劑所制成的液體中的不溶性外來(lái)物質(zhì)。不溶性微粒檢查指檢查靜脈用注射劑（溶液型注射液、注射用無(wú)菌粉末、注射用濃溶液）及供靜脈注射用無(wú)菌原料藥中不溶性微粒的大小及數(shù)量[1]。檢查注射液中不溶性微粒的方法主要有顯微計(jì)數(shù)法和光阻法?！吨袊?guó)藥典》2000年版將光阻法收錄作為檢查注射液中不溶性微粒第二法，用以檢查100 ml以上注射液，2005年版將其改為第一法，作為注射液中不溶性微粒檢查的首選方法，適用范圍擴(kuò)大為100 ml以下小容量注射液及注射用無(wú)菌粉末，2010年版將適用范圍進(jìn)一步擴(kuò)大至供靜脈注射用無(wú)菌原料藥。光阻法具有操作簡(jiǎn)單、快速、靈敏、自動(dòng)化及智能化程度高、取樣體積準(zhǔn)確等特點(diǎn)，是目前注射液中不溶性微粒檢測(cè)較為先進(jìn)的技術(shù)，被各國(guó)藥典廣泛收錄作為控制注射液質(zhì)量的重要方法。在近年來(lái)的應(yīng)用研究中發(fā)現(xiàn)，光阻法檢查注射液中不溶性微粒過(guò)程中存在諸多影響因素，現(xiàn)對(duì)其影響因素作一歸納概述，以便在標(biāo)準(zhǔn)修訂時(shí)參考，使檢測(cè)方法更趨合理完善。

1 取樣方式的影響

光阻法檢測(cè)注射液中不溶性微粒的取樣方法，《中國(guó)藥典》2005年版和2010年版規(guī)定：25 ml及25 ml以上的注射液，采取直接傾注法檢測(cè)；25 ml以下的注射液，采取直接取樣或合并取樣；對(duì)于注射用無(wú)菌粉末和黏度大的注射液可稀釋后再測(cè)定。

1.1 小容量注射液全體積取樣方式的影響

小容量注射液全體積取樣法（單支直測(cè)法）能觀察每支情況，污染機(jī)會(huì)少，可考察多支安瓿檢查結(jié)果的重現(xiàn)性，體現(xiàn)出瓶間差異，但實(shí)際操作中存在以下影響因素。①全體積取樣時(shí)，第一瓶或前幾瓶的讀數(shù)應(yīng)棄去，至少需5~10 ml，使管道被所測(cè)樣品充滿，有些樣品與管道中水相混的過(guò)程可能會(huì)產(chǎn)生氣泡、乳光等現(xiàn)象，使測(cè)定數(shù)據(jù)偏高。②對(duì)于一些水溶性差的樣品，如果用全體積法測(cè)定，樣品在管道中與水相混時(shí)，可能會(huì)在局部析出沉淀，不僅使測(cè)定結(jié)果偏高，甚至造成管路堵塞。③全體積取樣操作較難控制，暫停鍵按慢了，管路吸入空氣，使結(jié)果偏高；暫停鍵按早了，樣品不能完全抽取，結(jié)果偏低[2]。④小體積注射液全體積取樣時(shí)，偶有劑量不足或取樣頭位置離開(kāi)液面等原因造成管內(nèi)有氣泡產(chǎn)生。⑤某些安瓿底部中間突起，全體積取樣時(shí)，須將取樣針沿安瓿壁插入底部，盡可能多地抽取溶液，一般每支測(cè)定時(shí)總要剩下0.1 ml藥液，取樣針可保留0.3~0.4 ml的樣品，再加上瓶?jī)?nèi)殘存的死體積，對(duì)于1 ml、2 ml等小規(guī)格的樣品，全體積取樣幾乎不可能實(shí)施，操作不當(dāng)即可吸入氣泡[3]。⑥安瓿在割鋸掰開(kāi)時(shí)，會(huì)大量引入微粒[4]，在開(kāi)啟瓶口時(shí)，瓶口會(huì)有碎玻璃屑或粉塵落入瓶中，使測(cè)定數(shù)據(jù)偏高。

1.2 小容量注射液合并取樣方式的影響

對(duì)于1 ml、2 ml等小規(guī)格不宜采用全體積取樣的樣品，采用合并取樣時(shí)也存在影響因素。①小規(guī)格注射液合并取樣時(shí)取樣量大，用砂輪割鋸安瓿會(huì)大量增加微粒，實(shí)際操作中，如果割鋸后直接掰開(kāi)，會(huì)大量引入微粒，使測(cè)定數(shù)據(jù)偏高。盡管在用砂輪割鋸安瓿后用微粒檢查用水淋洗劃痕，在安瓿掰開(kāi)時(shí)，仍會(huì)有玻璃屑或粉塵落入安瓿內(nèi)，使測(cè)定數(shù)據(jù)偏高。②合并取樣體積在30 ml以下測(cè)量時(shí)，因藥液量少，攪拌器露出水面將氣泡帶入探頭中，使測(cè)值出現(xiàn)異常[5]。

2 儀器對(duì)測(cè)定的影響

微粒檢測(cè)儀器自身也存在干擾因素，如微氣泡、靜電凝集等均可產(chǎn)生假性微粒[6]。注射用粉針劑用純凈水溶解后，用兩臺(tái)儀器分別測(cè)定，結(jié)果差異較大，可能與儀器的傳感器分辨率、微粒計(jì)數(shù)的準(zhǔn)確性等因素有關(guān)[7]，還可能與儀器設(shè)計(jì)原理、儀器光路以及儀器的標(biāo)定有關(guān)[8]。

3 其他影響因素

3.1 顏色的影響

部分顏色較深的注射液光阻法測(cè)定其不溶性微粒計(jì)數(shù)結(jié)果偏高，可能是由于光束無(wú)法穿透深色樣品池，如復(fù)方丹參注射液和當(dāng)歸注射液，但用顯微計(jì)數(shù)法測(cè)定計(jì)數(shù)結(jié)果相對(duì)較低[9]。

3.2 黏度的影響

黏度大的注射液也會(huì)影響測(cè)定，直接測(cè)定會(huì)造成儀器管路堵塞，應(yīng)用純化水或適宜溶劑稀釋后測(cè)定。

3.3 析出結(jié)晶的影響

易析出結(jié)晶的注射液，易堵塞管路，也不適宜采用光阻法測(cè)定。邱逢鋼等[10]探討用光阻法測(cè)定甘露醇注射液不溶性微粒，測(cè)定時(shí)將甘露醇注射液在30℃水浴上加熱20 min，使藥液溫度保持在25~30℃，再采用光阻法檢測(cè)，可以克服測(cè)試過(guò)程中因析出結(jié)晶發(fā)生微孔管堵塞，使測(cè)定順利進(jìn)行，為易析出結(jié)晶注射液的測(cè)定提供了可行的方法。

3.4 攪拌速度

藥液的攪拌速度對(duì)測(cè)定結(jié)果也有影響，而且不同品種影響程度不同[11]。

4 結(jié)語(yǔ)

光阻法作為檢測(cè)注射液中不溶性微粒的主要方法，已顯示出其優(yōu)越性；但由于存在如上所述的影響因素，使得檢測(cè)結(jié)果有時(shí)會(huì)有偏差，適用范圍有一定的局限性。所以《中國(guó)藥典》2005年版和2010年版雖然將光阻法作為首選方法，但仍保留了顯微計(jì)數(shù)法，當(dāng)光阻法測(cè)定結(jié)果不符合規(guī)定或供試品不適于用光阻法測(cè)定時(shí)，應(yīng)采用顯微計(jì)數(shù)法進(jìn)行測(cè)定，并以顯微計(jì)數(shù)法的測(cè)定結(jié)果作為判定依據(jù)，保證了檢測(cè)結(jié)果的準(zhǔn)確性。

正因?yàn)楣庾璺z測(cè)注射液中不溶性微粒存在諸多干擾因素，使其研究領(lǐng)域和范圍不斷向縱深拓展，采用統(tǒng)計(jì)學(xué)手段對(duì)小容量注射劑不溶性微粒測(cè)定結(jié)果進(jìn)行分析，可獲知其不溶性微粒污染的統(tǒng)計(jì)學(xué)特征，從而有助于在整體上了解小容量注射劑不溶性微粒污染的現(xiàn)狀[12]。對(duì)注射液[13]和注射用無(wú)菌粉末[14]不溶性微粒光阻法檢查結(jié)果進(jìn)行不確定度分析，以找出影響不確定度的因素。隨著光阻法技術(shù)應(yīng)用研究的深入，影響測(cè)定的因素會(huì)逐步得到解決，光阻法檢測(cè)注射液中不溶性微粒這一先進(jìn)技術(shù)在控制靜脈用注射劑質(zhì)量上將會(huì)發(fā)揮越來(lái)越重要的作用。

[1]國(guó)家藥典委員會(huì).中國(guó)藥典(二部)[S].北京:化學(xué)工業(yè)出版社,2010:附錄71.

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