鹽酸小檗堿含量測定方法概述

呂長淮

（安徽省宿州市藥品檢驗(yàn)所，安徽宿州 234000）

鹽酸小檗堿為抗菌藥，主要用于志賀菌屬、霍亂弧菌等敏感病原菌所致的胃腸炎、細(xì)菌性痢疾等腸道感染。鹽酸小檗堿為《中國藥典》收載品種，含量測定《中國藥典》2005年版二部對其原料藥采用容量法，制劑采用高效液相色譜法，有效地控制了該藥的質(zhì)量。鹽酸小檗堿常制成各種復(fù)方制劑和多種劑型廣泛應(yīng)用于臨床。對鹽酸小檗堿及其復(fù)方制劑中鹽酸小檗堿含量測定方法研究的文獻(xiàn)較多，現(xiàn)就近年來研究的含量分析方法作一概述。

1 紫外-可見分光光度法（UV）

UV法由于具有靈敏度和精密度較高，操作簡便、快速等特點(diǎn)，廣泛用于各種藥物制劑的分析中。賀子華[1]分別采用容量法、UV法和高效液相色譜法（HPLC）對鹽酸小檗堿片進(jìn)行含量測定，經(jīng)三種方法對樣品進(jìn)行分析比較，認(rèn)為容量法測定含量結(jié)果均符合規(guī)定；HPLC法分析鹽酸小檗堿片中含有其他生物堿的量較多，鹽酸小檗堿的量較少；但采用UV法測定鹽酸小檗堿片的含量方法較為簡便，專屬性強(qiáng)。

2 二階導(dǎo)數(shù)光譜法（SDS）

SDS是解決干擾物質(zhì)與被測物光譜重疊，消除膠體等散射影響和背景吸收，提高光譜分辨率的一種數(shù)據(jù)處理技術(shù)，常用于藥物分析中。崔穎等[2]探討SDS測定芪黃顆粒中小檗堿的含量，采用 SDS，利用小檗堿在 351.0 nm和 363.6 nm（谷-峰）處振幅 D 值與濃度 C 值的關(guān)系（C=131.27D＋0.090 5，r=0.999 9）計(jì)算其含量。結(jié)果對照品溶液和供試品溶液在351.0 nm和363.6 nm處均出現(xiàn)谷－峰振幅，而陰性對照液在此處振幅約為零，不影響小檗堿的測定，掃描速度240 nm/min，狹縫寬度2 nm，△λ＝3 nm，平均加樣回收率為 100.3%，RSD為0.73%，導(dǎo)數(shù)測定過程中改變△λ，振幅D值則發(fā)生改變，該法采用對照品對照法，對照品及樣品的振幅D值同時改變，但其比值不變，故對實(shí)驗(yàn)結(jié)果無影響。徐英瑜等[3]建立SDS測定葛根芩連微丸中鹽酸小檗堿的含量，采用SDS，以無水乙醇為溶劑，測定波長分別為365 nm和274 nm，掃描速度40 nm/min。結(jié)果在365 nm處，鹽酸小檗堿有一最大振幅，其他樣品及基質(zhì)在此處的二階導(dǎo)數(shù)光譜與零線幾乎重合，不影響鹽酸小檗堿含量的測定，鹽酸小檗堿在4～12 μg/ml濃度范圍內(nèi)線性關(guān)系良好（r＝0.999 6），平均回收率為100.5%，RSD 為 1.65%。

3 原子吸收分光光度法（AAS）

AAS通常借比較對照品溶液和供試品溶液的吸光度，求得供試品中待測元素的含量。遲文俊等[4]采用間接AAS測定片劑中鹽酸小檗堿的含量，運(yùn)用離子對分析技術(shù)、萃取技術(shù)和光譜技術(shù)相結(jié)合的方法，收集有機(jī)相在原子吸收分光光度計(jì)上，用Co空心陰極燈在240.7 nm處測得的各有機(jī)相的吸收度，選擇最佳測定條件。樣品經(jīng)萃取，測定吸收度，用回歸方程 A＝0.035 9C＋0.006 0，求出 Co 的含量，按小檗堿離子∶硫氫酸鈷離子為2∶1的關(guān)系，換算得出小檗堿的含量。本方重復(fù)性好，準(zhǔn)確度高，平均回收率為 99.8%，RSD 為 1.21%。研究結(jié)果表明，在該法中利用Co標(biāo)準(zhǔn)曲線，能夠有效控制片劑中小檗堿的含量，靈敏度高，操作簡單，使AAS的應(yīng)用領(lǐng)域由原來的單純測定無機(jī)金屬元素，拓寬為可間接測定生物堿類有機(jī)藥物的含量。

4 薄層掃描法（TLC）

TLC是使用薄層掃描儀對薄層色譜的斑點(diǎn)進(jìn)行掃描的一種分光光度法，具有檢測光譜范圍寬，掃描速度快，數(shù)據(jù)處理和操作簡便，結(jié)果重現(xiàn)性好等特點(diǎn)。楊輝[5]采用TLC法建立復(fù)方黃連顆粒中鹽酸小檗堿含量測定方法，采用高效硅膠G薄層板，以正丁醇－冰乙酸－水（5∶1∶1）為展開劑，檢測波長為345 nm。 結(jié)果鹽酸小檗堿在 0.091 2～0.273 6 μg范圍內(nèi)呈良好的線性關(guān)系，相關(guān)系數(shù) r＝0.998 6，平均回收率為 100.80%，RSD＝3.53%（n＝5），可作為復(fù)方黃連顆粒中鹽酸小檗堿的含量控制方法。莫可豐等[6]建立TLC法測定膚陰潔中鹽酸小檗堿含量的方法，采用雙波長反射法線性薄層掃描法對處方中主要成分鹽酸小檗堿進(jìn)行含量測定，采用硅膠GCMC-Na薄層板，以正丁醇－冰醋酸－水（7∶1∶2）為展開劑，檢測波長為 λS＝430 nm，λR＝600 nm，結(jié)果平均回收率為 100.8%，RSD 為 2.3%?？邓暮偷萚7]研究建立熒光薄層掃描法測定衛(wèi)胃顆粒中鹽酸小檗堿的含量，樣品經(jīng)提取、薄層展開后，采用熒光掃描法對衛(wèi)胃顆粒中鹽酸小檗堿進(jìn)行含量測定，以苯-乙酸乙酯-甲醇-異丙醇-水（6∶3∶1.5∶1.5∶0.3）為展開劑，激發(fā)波長 λ＝366 nm。 結(jié)果鹽酸小檗堿在 0.031 04～0.155 20 μg 范圍內(nèi)呈良好的線性關(guān)系，回收率為 100.8%，RSD＝1.9%。

5 毛細(xì)管電泳法（HPCE）

HPCE法是近年來發(fā)展較快的一種新型、高效、快速的分離分析技術(shù)，是經(jīng)典電泳技術(shù)和現(xiàn)代微柱分離相結(jié)合的產(chǎn)物。目前，HPCE法已被廣泛應(yīng)用于藥物分析中，具有分辨率和靈敏度高、快速、分析耗費(fèi)低、樣品預(yù)處理簡單等特點(diǎn)。凌寧生等[8]利用毛細(xì)管區(qū)帶電泳對金芪降糖片進(jìn)行分離分析，采用HPCE法快速地對金芪降糖片中3種生物堿進(jìn)行分析并測定其中鹽酸小檗堿的含量。采用未涂層石英毛細(xì)管（50 cm×100 μm），以 40 mmol/L 磷酸氫二鈉－甲醇（65∶35）為緩沖液，254 nm 為測定波長，進(jìn)樣壓力 0.5 Psi，5 s，分離電壓 14 kV，柱溫25℃。結(jié)果在12 min內(nèi)測定鹽酸小檗堿，鹽酸小檗堿平均含量為 1.52%（g/g），在 0.01～0.20 mg/ml范圍內(nèi)線性關(guān)系良好（r＝0.999 9），平均回收率為 100.9%，RSD＝1.92%。 張琦等[9]研究采用HPCE法的毛細(xì)管區(qū)帶電泳分離模式分離測定清經(jīng)膠囊中小檗堿含量，采用熔融石英毛細(xì)管柱（50 cm×75 μm），運(yùn)行緩沖液為 0.2 mol/L 乙酸鈉溶液－甲醇（8∶2），265 nm 為測定波長，進(jìn)樣壓力20 kPa·s，運(yùn)行電壓15 kV，毛細(xì)管柱溫25℃。 結(jié)果鹽酸小檗堿進(jìn)樣濃度在 9.95～159.20 mg/L 范圍內(nèi)線性關(guān)系良好（r＝0.999 9），平均加樣回收率為 100.4%，RSD＝1.9%(n=5)。

6 高效液相色譜法（HPLC）

HPLC法具有分離效率高，分析速度快，重現(xiàn)性好，專屬性強(qiáng)等優(yōu)點(diǎn)，廣泛應(yīng)用于藥物分析中，特別適合復(fù)方制劑中的多種成分的分離。HPLC法測定鹽酸小檗堿含量研究的文獻(xiàn)較多，許波等[10]建立了HPLC法測定增效黃連素膠囊中鹽酸小檗堿的含量，采用ODS柱，以0.1%十二烷基硫酸鈉的甲醇-0.2 mol/L 酒石酸（80∶20）為流動相，流速為 1.2 ml/min，醋酸氫化可的松為內(nèi)標(biāo)物，用紫外檢測器于240 nm波長處檢測，結(jié)果鹽酸小檗堿的線性范圍為 0.01～0.09 mg/ml，平均回收率為99.2%，RSD為0.93%，且重現(xiàn)性和準(zhǔn)確性良好，分析速度快，完成一次分析只需15 min，大大節(jié)省了分析時間。張秀橋等[11]建立三黃瀉心湯中鹽酸小檗堿含量的HPLC測定方法，盧日剛等[12]研究建立HPLC法測定婦康洗液中鹽酸小檗堿含量的方法，對復(fù)方制劑中含有的小檗堿進(jìn)行含量測定研究，結(jié)果較為滿意。黃連中結(jié)構(gòu)相似的小檗堿型生物堿主要有小檗堿、黃連堿、巴馬亭和藥根堿等，近年來亦多采用HPLC法測定其含量。劉傳玲等[13]建立HPLC法測定黃柏中鹽酸小檗堿含量的方法，王振軍等[14]研究建立 HPLC法測定克痔栓中鹽酸小檗堿含量的方法，利用HPLC法較高的分離特點(diǎn)，分離出制劑中的鹽酸小檗堿，較好地控制了制劑的質(zhì)量。

鹽酸小檗堿作為抗菌藥，常制成復(fù)方制劑和各種劑型廣泛應(yīng)用于臨床，對其含量測定方法以HPLC法應(yīng)用研究較為普遍，因HPLC法具有較高的分離效率和較快的分析速度，最適宜復(fù)方制劑，特別適用于成分復(fù)雜的多組分制劑，而UV法測定鹽酸小檗堿的含量近年來已較少使用。隨著鹽酸小檗堿新的復(fù)方制劑和新劑型的問世，將會產(chǎn)生更多、更新、更完善的含量測定方法，使鹽酸小檗堿制劑質(zhì)量得到有效的控制。

[1]賀子華.鹽酸小檗堿片質(zhì)量分析方法比較[J].安徽醫(yī)藥,2003,7(6)∶461.

[2]崔穎,張靜澤,張喜云,等.導(dǎo)數(shù)光譜法測定芪黃顆粒中小檗堿的含量[J].武警醫(yī)學(xué)院學(xué)報(bào),2003,12(1)∶25.

[3]徐英瑜,毛書征.二階導(dǎo)數(shù)光譜法同時測定葛根芩連微丸中鹽酸小檗堿和黃芩苷含量[J].中國醫(yī)院藥學(xué)雜志,2001,21(12)∶731.

[4]遲文俊,白景錄,顧春玲,等.間接原子吸收分光光度法測定片劑中鹽酸小檗堿的含量[J].衛(wèi)生職業(yè)教育,2001,19(7)∶147.

[5]楊輝.TLCS法測定復(fù)方黃連顆粒中鹽酸小檗堿的含量[J].安徽醫(yī)藥,2006,10(1)∶25.

[6]莫可豐,尹梅芳.薄層掃描法測定膚陰潔中鹽酸小檗堿的含量[J].中國醫(yī)院藥學(xué)雜志,2001,21(11)∶667.

[7]康四和,王春紅,陳昌彪.熒光薄層掃描法測定衛(wèi)胃顆粒中鹽酸小檗堿的含量[J].中國藥師,2002,5(9)∶547.

[8]凌寧生,李玉紅,李林,等.毛細(xì)管電泳法測定金芪降糖片中小檗堿的含量[J].中國藥科大學(xué)學(xué)報(bào),2003,34(4)∶51-53.

[9]張琦,趙因,張新申.高效毛細(xì)管電泳法測定清經(jīng)膠囊中小檗堿含量[J].藥物分析雜志,2003,23(2)∶133.

[10]許波,高良美.高效液相色譜法測定增效黃連素膠囊中鹽酸小檗堿和甲氧芐啶的含量[J].藥物分析雜志,2001,21(1)∶21.

[11]張秀橋,周東斌,劉炎文,等.三黃瀉心湯傳統(tǒng)湯劑與中藥配方顆粒湯劑中鹽酸小檗堿含量測定比較[J].中國醫(yī)院藥學(xué)雜志,2002,22(7)∶408.

[12]盧日剛,唐敏玲,韋向紅,等.RP-HPLC法測定婦康洗液中鹽酸小檗堿的含量[J].藥物分析雜志,2002,22(3)∶195.

[13]劉傳玲,董麗萍,叢永壯.HPLC法測定黃柏中小檗堿的含量[J].中國藥事,2005,19(6)∶383.

[14]王振軍,祝紅達(dá),楊遠(yuǎn)榮,等.高效液相色譜法測定克痔栓中鹽酸小檗堿的含量[J].中國醫(yī)院藥學(xué)雜志,2005,25(7)∶678.