病證結(jié)合方證相應(yīng)在證候動(dòng)物模型研究中的應(yīng)用

劉麗梅,王瑞海,陳 琳,劉治中

(中國(guó)中醫(yī)科學(xué)院中醫(yī)基礎(chǔ)理論研究所中醫(yī)方證研究中心,北京 100700)

病證結(jié)合方證相應(yīng)在證候動(dòng)物模型研究中的應(yīng)用

劉麗梅,王瑞海,陳 琳,劉治中

(中國(guó)中醫(yī)科學(xué)院中醫(yī)基礎(chǔ)理論研究所中醫(yī)方證研究中心,北京 100700)

病證結(jié)合;方證相應(yīng);證候動(dòng)物模型

病證結(jié)合、方證相應(yīng)是目前中醫(yī)藥領(lǐng)域中正在積極探索的中醫(yī)藥科研方法和臨床診療模式。筆者選取中國(guó)期刊全文數(shù)據(jù)庫(kù)(C N K I)期刊全文數(shù)據(jù)庫(kù)1994～2008年近 10年的文獻(xiàn),以病證結(jié)合/方證相應(yīng)/方證對(duì)應(yīng)等為關(guān)鍵詞檢索,篩選出相關(guān)文章,對(duì)病證結(jié)合方證相應(yīng)在動(dòng)物模型實(shí)驗(yàn)研究中的應(yīng)用進(jìn)行綜述,以期有益于中醫(yī)藥基礎(chǔ)研究。

1 中醫(yī)證候動(dòng)物模型研究面臨的困難

證候動(dòng)物模型的研究已經(jīng)有 40多年的歷史,從病因角度可分為兩大類(lèi):中醫(yī)傳統(tǒng)病因造模和西醫(yī)疾病造模[1]。在中醫(yī)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物模型的研究與應(yīng)用上,近幾十年來(lái)取得了一定的進(jìn)展,至今中醫(yī)動(dòng)物模型已涉及了八綱辨證、臟腑辨證等 20余種證型的研究方法、思路及各種檢測(cè)指標(biāo)等,建立了百余種證的動(dòng)物模型[2、3]。雖然證的模型曾為中醫(yī)的研究帶來(lái)了生機(jī)和活力,但中醫(yī)病因模型由于不確定和非特異性因素較多、造模條件不易控制、造模因素去除后可恢復(fù)、與臨床實(shí)際的結(jié)合較差,因而影響了這類(lèi)模型在疾病病理研究中的應(yīng)用。西醫(yī)疾病模型只有西醫(yī)的疾病及相關(guān)癥狀,沒(méi)有將疾病與中醫(yī)證候相聯(lián)系,最主要的問(wèn)題是采用單純的現(xiàn)代醫(yī)學(xué)疾病動(dòng)物模型進(jìn)行中醫(yī)藥研究難以體現(xiàn)中醫(yī)藥的理論特色,這兩類(lèi)模型均有一定的局限性[1、3]。“證”是對(duì)疾病過(guò)程動(dòng)態(tài)描述后獲得的總的認(rèn)識(shí),在不同的發(fā)展時(shí)期有不同的變化特點(diǎn)?！白C”的概念過(guò)于寬泛,一個(gè)證通常包括多種病,證的層次越一般,包括的病種就越多。因此,指望制造一種代表多種疾病的證的動(dòng)物模型是不可能的,需要具體的病種作為載體[3、4]。

2 中醫(yī)證候動(dòng)物模型發(fā)展趨勢(shì)

復(fù)制病證結(jié)合動(dòng)物模型則可能成為解決中醫(yī)證候動(dòng)物模型研究這個(gè)難題的突破口。可結(jié)合現(xiàn)有的單因素“病”制備動(dòng)物模型,再迭加其他與中醫(yī)病因、病機(jī)相關(guān)因素制備復(fù)合“病證結(jié)合”動(dòng)物模型,在動(dòng)物實(shí)驗(yàn)時(shí)做到“病證結(jié)合、方證相應(yīng)”[4]。病證結(jié)合動(dòng)物模型的優(yōu)勢(shì)在于它使很多“證”的不確定因素由于“病”的限制變得更加清晰,更符合臨床實(shí)際,更能精確地闡明中醫(yī)證候的本質(zhì)[5]。病證結(jié)合動(dòng)物模型由于融合了中醫(yī)證候模型和現(xiàn)代醫(yī)學(xué)病理學(xué)模型兩方面共同的因素和特點(diǎn),使模型動(dòng)物同時(shí)具有西醫(yī)疾病和中醫(yī)證候特征。理論上講,可以更為全面客觀地反映中藥藥效作用情況。而在動(dòng)物模型的研制上,病證結(jié)合的動(dòng)物模型,如脾虛型潰瘍性結(jié)腸炎動(dòng)物模型、腎陰虛型高血壓動(dòng)物模型、血瘀型子宮肌瘤動(dòng)物模型等,都是西醫(yī)的病和中醫(yī)的證的結(jié)合。這些模型運(yùn)用于中藥非臨床有效性的評(píng)價(jià),一定程度上可以克服單純用中醫(yī)證候模型或現(xiàn)代醫(yī)學(xué)病理模型進(jìn)行評(píng)價(jià)中藥藥效的不足[6]。

現(xiàn)在常用的病證結(jié)合模型有 3種:①先造疾病模型再施以中醫(yī)病因造成中醫(yī)相應(yīng)的證候;②先施以中醫(yī)病因造成中醫(yī)相應(yīng)的證候再造疾病模型,這兩種模型的共同特點(diǎn)是疾病模型再加上中醫(yī)病因造模;③在動(dòng)物疾病與人類(lèi)疾病具有相同的病理生理和解剖結(jié)構(gòu)基礎(chǔ)上,直接采用符合臨床實(shí)際的西醫(yī)疾病模型,不再另外施加任何中醫(yī)病因,對(duì)該種模型首先進(jìn)行疾病的診斷,再直接動(dòng)態(tài)觀察疾病模型在發(fā)生、發(fā)展和轉(zhuǎn)歸中中醫(yī)證候的演變[1]。

3 病證結(jié)合方證相應(yīng)原則在中醫(yī)證候動(dòng)物模型實(shí)驗(yàn)研究中的應(yīng)用

利用病證結(jié)合方證相應(yīng)原則開(kāi)展實(shí)驗(yàn)動(dòng)物模型研究目前受到極大的關(guān)注,并且在心臟病、高血壓、腦出血、血管內(nèi)皮功能、子宮內(nèi)膜異位癥的病證結(jié)合模型研究中取得了一定的成果,為其他病證的研究起到了示范作用。

3.1 在心肌梗死心氣虛血瘀證和心陽(yáng)虛血瘀證中的研究應(yīng)用

將中西醫(yī)臨床和基礎(chǔ)研究中規(guī)范的、成熟的、統(tǒng)一的標(biāo)準(zhǔn)和方法引入中醫(yī)動(dòng)物模型研究,可以成為中醫(yī)病證動(dòng)物模型建立和評(píng)價(jià)的基本思路。王碩仁等報(bào)道,實(shí)驗(yàn)研究的心氣虛、心陽(yáng)虛血瘀病證模型是移植心肌梗死致心力衰竭大鼠的現(xiàn)代實(shí)驗(yàn)醫(yī)學(xué)成熟的制作模型。采集四診信息并結(jié)合八綱辨證,運(yùn)用中西醫(yī)結(jié)合學(xué)會(huì)虛證和血瘀證的診斷標(biāo)準(zhǔn)進(jìn)行臟腑氣血虛實(shí)辨證,將其定性的問(wèn)診內(nèi)容替代以同等意義的定量測(cè)試指標(biāo)進(jìn)行評(píng)價(jià)。研究結(jié)果表明,人類(lèi)疾病中的心肌梗死、心力衰竭的臨床表現(xiàn)(形似)和病理(神同)是可以通過(guò)大鼠模型大部分再現(xiàn)和模擬的,同時(shí)人類(lèi)心氣虛證和向心陽(yáng)虛證發(fā)展的某些軀體類(lèi)證候表觀也能通過(guò)大鼠心肌梗死、心衰疾病模型模擬出來(lái),成為中西醫(yī)結(jié)合的病證動(dòng)物模型[7]。

3.2 在慢性心肌缺血血瘀證中的研究應(yīng)用

許文玉等報(bào)道,采用病證結(jié)合的方法即動(dòng)物左冠狀動(dòng)脈前降支第一間隔支起始部遠(yuǎn)端放置A m e r o i d縮窄環(huán)的方法復(fù)制慢性心肌缺血血瘀證模型。實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示,慢性心肌缺血血瘀證模型小型豬血中 T X B2、6-K-P G F1α、T N F-α濃度和心功能等指標(biāo)與假手術(shù)組相比都發(fā)生了明顯變化;T X B2與E D V呈負(fù)相關(guān),與 T N F-α呈正相關(guān),T N F-α表達(dá)水平與 E D V、E S V均呈負(fù)相關(guān),隨心功能的惡化,其表達(dá)量增高。說(shuō)明血小板的激活程度與心功能有關(guān),心功能越差,血小板的活性越高,血栓形成的危險(xiǎn)性就越大,尤其易造成微血栓[8],提示血小板的激活指標(biāo)可以作為反映心功能狀態(tài)的指標(biāo)之一。

3.3 在腦出血中的研究應(yīng)用

在中醫(yī)藥研究中,腦出血?jiǎng)游锬Ｐ偷脑炷７椒ㄓ心z原酶誘導(dǎo)法、腦內(nèi)注血法、自發(fā)性腦出血大鼠法、明礬溶液腦內(nèi)注射法、病證結(jié)合法。賈真等對(duì)這些方法的應(yīng)用進(jìn)行了綜述并做評(píng)價(jià)。指出在西醫(yī)病理型腦出血?jiǎng)游锬Ｐ退斐傻摹安　钡幕A(chǔ)上,從本病多種致病因素及本病多種病證之間相互轉(zhuǎn)化的角度入手,建立某種“證”的模型,并從血腫的大小、神經(jīng)體征的缺失評(píng)分及中醫(yī)所特有的舌象、脈象等角度進(jìn)行評(píng)價(jià),設(shè)計(jì)一種符合中醫(yī)臨床腦出血?jiǎng)游锬Ｐ蚚9]。孫景波等用腦內(nèi)注射膠原酶配合大鼠自體糞便灌胃的方法,復(fù)制中風(fēng)病痰熱腑實(shí)證大鼠模型,結(jié)果表明通腑醒神膠囊治療組大鼠神經(jīng)體征和糞便干結(jié)、煩躁、鼻分泌物多、喉中痰鳴等痰熱腑實(shí)證表現(xiàn)明顯減輕,腦組織含水量明顯低于痰熱腑實(shí)證模型組和單純腦出血模型組(P均 <0.01)。該實(shí)驗(yàn)反證了該病證結(jié)合模型的可行性[10]。

3.4 在高血壓腦出血陽(yáng)類(lèi)證中的研究應(yīng)用

在高血壓腦出血陽(yáng)類(lèi)證的病證結(jié)合大鼠模型研究中,鄭春葉等報(bào)道從疾病、病因、病機(jī)、證候等角度出發(fā),采用多因素(高血壓性腦出血、中藥藥物所致陽(yáng)熱并腑實(shí)、病因病機(jī)模擬肝腎陰虛、肝陽(yáng)上亢證)進(jìn)行復(fù)制,并從行為學(xué)、證候相關(guān)指標(biāo)、微觀指標(biāo)以及針對(duì)陽(yáng)類(lèi)證治療等角度對(duì)模型進(jìn)行評(píng)價(jià)。該實(shí)驗(yàn)采用的制模方法比較符合中醫(yī)陽(yáng)類(lèi)證病因病機(jī)理論,模型的形成過(guò)程也與臨床出血性中風(fēng)病陽(yáng)類(lèi)證發(fā)生、發(fā)展過(guò)程接近,即肝腎陰虛※肝陽(yáng)上亢,加之痰熱腑實(shí),導(dǎo)致氣血逆亂、直沖犯腦、血溢脈外;組織學(xué)檢查、神經(jīng)功能評(píng)估、生化指標(biāo)檢測(cè)結(jié)果均表明,該模型具有人類(lèi)高血壓腦出血陽(yáng)類(lèi)證的基本特征。該模型的評(píng)價(jià)從病因入手進(jìn)行正論,從臨床癥狀本身進(jìn)行本證,從客觀指標(biāo)進(jìn)行佐證,中藥治療進(jìn)行反證。但是對(duì)于眩暈、頭痛、煩躁、口苦等主觀感受癥狀,目前仍缺乏理想的評(píng)價(jià)方法,尚有待進(jìn)一步探索[11]。

3.5 在高血壓肝火上炎證中的研究應(yīng)用

S H R是國(guó)際公認(rèn)的原發(fā)性高血壓實(shí)驗(yàn)研究的動(dòng)物模型。既往研究結(jié)果表明,S H R的癥狀、體征、組織學(xué)、病理學(xué)及生化指標(biāo)等,都隨周齡增長(zhǎng)而發(fā)生變化。屈會(huì)化等報(bào)道,根據(jù) S H R的生物學(xué)特征研究文獻(xiàn)、臨床高血壓的辨證分型標(biāo)準(zhǔn)、中醫(yī)動(dòng)物模型證候?qū)傩匝芯课墨I(xiàn)、參照臨床證候觀察量表設(shè)計(jì)標(biāo)準(zhǔn),在初步確定了 S H R證候?qū)傩杂^察指標(biāo)后,將臨床定性的問(wèn)診內(nèi)容,盡可能代以定量或半定量的同等意義的觀察和測(cè)試指標(biāo),即將高血壓臨床中所表現(xiàn)的眩暈、頭痛、面紅目赤、煩躁易怒、心悸、便秘、尿赤、舌象等四診信息,轉(zhuǎn)化為一般行為、旋轉(zhuǎn)耐受時(shí)間、痛閾、易激惹程度、飲水量、飲食量、大小便狀況、毛發(fā)色澤、毛發(fā)生長(zhǎng)速度、體溫、體重、舌象、眼球突出度、眼結(jié)膜色度、血壓、心率等宏觀表征和行為學(xué)指標(biāo)的觀察,并建立了相應(yīng)的觀察和測(cè)定方法以及操作規(guī)范。采用上述方法,針對(duì)早期 S H R的證候?qū)傩赃M(jìn)行了初步的宏觀表征及行為學(xué)研究。綜合辨析所得到的信息,該模型基本符合高血壓中醫(yī)辨證分型中肝火上炎證的診斷。S H R早期階段(14～18周齡)的中醫(yī)證候?qū)傩灶?lèi)似人類(lèi)高血壓肝火上炎證[12]。

3.6 在絡(luò)氣郁滯型血管內(nèi)皮功能障礙中的研究應(yīng)用

在建立絡(luò)氣郁滯-內(nèi)皮功能障礙病證結(jié)合大鼠動(dòng)物模型中,吳相春等報(bào)道以束縛即刻即可引起血清 H c y增高、N O降低為切入點(diǎn),將慢性束縛應(yīng)激與高蛋氨酸飲食結(jié)合起來(lái),立足于發(fā)病學(xué)、臨床表現(xiàn)和治療效應(yīng),并結(jié)合相關(guān)疾病(內(nèi)皮功能障礙)和相關(guān)證(絡(luò)氣郁滯)的現(xiàn)代認(rèn)識(shí),所建立的絡(luò)氣郁滯內(nèi)皮功能障礙病證結(jié)合大鼠模型基本符合中醫(yī)絡(luò)病理論。根據(jù)中醫(yī)以方測(cè)證的理論,應(yīng)用傳統(tǒng)中藥對(duì)病證結(jié)合復(fù)合模型進(jìn)行治療,同時(shí)根據(jù)辨證論治的理論,以攝食量、體重、1%蔗糖水?dāng)z取量、尾懸掛試驗(yàn)、CORT、5-HT、ET、NO等作為評(píng)價(jià)指標(biāo),對(duì)其療效進(jìn)行觀察,這樣一方面可以確定證候模型的可靠性,另一方面又可以確定疾病的狀況。結(jié)果表明,本病證結(jié)合復(fù)合模型的建立是成功的。該制作方法簡(jiǎn)單,評(píng)價(jià)指標(biāo)客觀,為脈絡(luò)-血管系統(tǒng)病的研究提供了實(shí)驗(yàn)基礎(chǔ)[13]。

3.7 在絡(luò)氣虛滯型血管內(nèi)皮功能障礙中的研究應(yīng)用

在建立絡(luò)氣虛滯型血管內(nèi)皮功能障礙病證結(jié)合動(dòng)物模型中,梁俊清等報(bào)道以絡(luò)氣虛滯血管內(nèi)皮功能障礙患者的臨床研究資料為背景,結(jié)合“饑則損氣”、“勞則氣耗”的中醫(yī)病機(jī)理論,首先以高蛋氨酸飲食誘發(fā)高同型半胱氨酸血癥致血管內(nèi)皮功能障礙為病理基礎(chǔ)模型,采用“基礎(chǔ)進(jìn)食 +強(qiáng)迫負(fù)重游泳”的方法誘發(fā)氣虛證候,所建模型表現(xiàn)出的精神萎靡、眼瞼下垂、反應(yīng)遲鈍、體質(zhì)量下降等一般狀況與臨床患者絡(luò)氣虛滯證候特征基本吻合,同時(shí)血管內(nèi)皮功能障礙也較 H C Y組進(jìn)一步加重。另外,以方測(cè)證,應(yīng)用單味益氣、益氣活血配伍、通絡(luò)復(fù)方 3種通絡(luò)方藥對(duì)所建模型進(jìn)行干預(yù),使上述證候及血管內(nèi)皮病變得到不同程度的改善。提示所建立的絡(luò)氣虛滯型血管內(nèi)皮功能障礙動(dòng)物模型,基本反映了該類(lèi)患者的病理及證候特點(diǎn),提示所建立的絡(luò)氣虛滯型血管內(nèi)皮功能障礙模型是成功的。由于此方面的研究剛剛起步,基于目前的研究技術(shù)手段,在所建動(dòng)物模型身上只檢測(cè)到該類(lèi)患者的部分證候,卻未反映出該類(lèi)患者的其他或特異性證候表現(xiàn)。因此,尚需更多的實(shí)驗(yàn)進(jìn)一步探討該模型所表現(xiàn)出的證候與臨床患者證候的一致性[14]。

3.8 在腎虛血瘀證子宮內(nèi)膜異位癥不孕癥動(dòng)物模型中的研究應(yīng)用

冉青珍等報(bào)道,模擬女性“腎虛血瘀”的中醫(yī)病因病機(jī),與傳統(tǒng)的自體移植子宮內(nèi)膜異位癥動(dòng)物模型相結(jié)合,建立病證結(jié)合的子宮內(nèi)膜異位癥動(dòng)物模型。具體模型有:①“墮胎傷腎”致“腎虛血瘀”模型;②“產(chǎn)褥期勞倦”致“血瘀”模型;③“產(chǎn)褥期受寒 ”致“產(chǎn)后留瘀 ”模型;④“產(chǎn)褥期氣滯”致 “產(chǎn)后留瘀”模型;⑤子宮內(nèi)膜異位癥“自體移植法”疾病模型;⑥疾病模型。對(duì)于以上模型,用中醫(yī)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物證候?qū)W指標(biāo)與理化檢驗(yàn)指標(biāo)共同評(píng)價(jià)該模型的臨床代表性,并與單純的自體移植子宮內(nèi)膜異位癥動(dòng)物模型相比較。結(jié)果表明,病證結(jié)合子宮內(nèi)膜異位癥大鼠既能反映腎虛血瘀的中醫(yī)證候基本特點(diǎn),又與現(xiàn)代醫(yī)學(xué)子宮內(nèi)膜異位癥相關(guān)不孕癥疾病的特點(diǎn)相一致。該病證結(jié)合子宮內(nèi)膜異位癥大鼠可代表子宮內(nèi)膜異位癥不孕患者進(jìn)行妊娠功能方面的中醫(yī)藥研究[15]。

4 小結(jié)

綜上所述,病證結(jié)合的方法是中醫(yī)證候動(dòng)物模型的一個(gè)發(fā)展方向。制作模型時(shí),從疾病、病因、病機(jī)、證候等角度出發(fā),采用多因素進(jìn)行復(fù)制,病因的選擇既要根據(jù)臨床流行病學(xué)特點(diǎn),又要結(jié)合臨床實(shí)際,使病因病機(jī)符合中醫(yī)理論及西醫(yī)學(xué)對(duì)疾病的認(rèn)識(shí),從病因、臨床癥狀、客觀指標(biāo)、方藥治療等幾方面進(jìn)行論證,建立基于臨床成熟和規(guī)范的辨證標(biāo)準(zhǔn)的中醫(yī)證候動(dòng)物模型評(píng)價(jià)體系。應(yīng)用病證結(jié)合原則建立中醫(yī)證候動(dòng)物模型的研究剛剛起步,成熟的模型建立要根據(jù)不同疾病、證候特點(diǎn)不斷完善,需要一個(gè)不斷探索、修正的過(guò)程,并要經(jīng)過(guò)實(shí)踐檢驗(yàn),才能真正地為中醫(yī)藥研究和臨床應(yīng)用提供可靠的實(shí)驗(yàn)依據(jù)。

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1006-3250(2010)01-0088-03

2009-07-09

劉麗梅 (1965-),女,黑龍江人,副研究員,醫(yī)學(xué)學(xué)士,從事中藥研究及中醫(yī)方證基礎(chǔ)研究。