SP染色法檢測宮頸癌細胞Caspase-3活性

林小博

(漯河醫(yī)學(xué)高等?？茖W(xué)校 河南 漯河 462002)

宮頸癌是婦科最常見的惡性腫瘤之一。早婚、早育、多產(chǎn)及性生活紊亂的婦女有較高的患病率,宮頸癌早期沒有任何癥狀,隨著病情進展,患者可出現(xiàn)異常陰道流血。此外,白帶增多也為宮頸癌常見癥狀,約80%的宮頸癌患者有此癥狀,本實驗旨在通過免疫組織化學(xué)技術(shù)研究化療前后宮頸癌細胞Caspase-3活性,為宮頸癌的治療提供相關(guān)依據(jù)。

1 資料與方法

1.1 一般資料

31例病例來自于本實驗室在周邊醫(yī)院收集新鮮標本,有性生活史,平均(31.19±5.17)歲,其中鱗癌21例,宮頸腺癌10例。宮頸癌組織分期為Ⅰ期13例、Ⅱ期8例,低分化3例、中高分中低分化者7例。標本經(jīng)過5%福爾馬林溶液固定,石蠟包埋。

1.2 方法

采用SP法檢測Caspase-3,抗Caspase-3小鼠單克隆抗體(碧云天生物技術(shù)研究所提供),工作濃度 l:1000,DAB顯色,蘇木素復(fù)染。以PBS緩沖液代替-抗做空白,染色步驟嚴格按說明書進行。

1.3 判斷標準

顯微鏡觀察并收集圖像,Caspase-3陽性以細胞核或細胞質(zhì)呈淺黃色或棕黃色顆粒樣物質(zhì)。每個標本在400倍的觀察隨機5個視野計數(shù),按陽性細胞所占百分比及著色程度進行結(jié)果判定。按陽性細胞比例判定:陽性細胞≤10%1分,10%～50%2分,>50%3分;按染色程度判定:陰性為0分;淡黃色為1分;中度黃色為2分,棕黃色為3分。按陽性細胞得分×染色程度得分計總分,總分<3為陰性,≥3為陽性[1]。

1.4 統(tǒng)計學(xué)方法

2 結(jié)果

Caspase-3在宮頸癌細胞中31例(27%)表達,陽性信號定位于細胞質(zhì),呈彌漫發(fā)布;化療前顯陽性的慢性宮頸癌和宮頸癌分別為57%和27%,化療后分別為59%和31%;在臨床分期中,I II期11例化療前分別為26%和18%,化療后分別為31%和21%;在病例分級中,化療前G1期表達為9例(31%);組織類型中鱗癌10例(23%),而在淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移中,無淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移的表達有17例(37%);化療后分別為33%、30%、23%,以上數(shù)據(jù)SPSS 12.0軟件處理,P<0.05,組間有一定的差異性,具有可比性。

3 討論

細胞凋亡是生物體內(nèi)一種主動的自我調(diào)控過程。一些特定的基因在這一過程中起決定性的作用,細胞凋亡過程受抑與惡性腫瘤的發(fā)生、發(fā)展密切相關(guān)。Csapases是一組與秀麗隱桿線蟲同源的執(zhí)行哺乳動物細胞凋亡的主要蛋白酶家族[2],絕大部分細胞凋亡依賴于Caspases的存在。大多數(shù)觸發(fā)細胞凋亡的因素,最終均需要通過Caspase-3介導(dǎo)的信號傳導(dǎo)途徑導(dǎo)致細胞凋亡。

caspase-3是caspase家族中最重要的成員[3]。Caspases酶原包括 3個部分:原域、大亞單位和小位。酶原本身的活性很低,但可以通過不同的方式被激活?；罨?Caspases通過特異性裂解底物而發(fā)揮其執(zhí)行細胞細胞凋亡,因此又稱死亡蛋白酶,他們通過與眾多蛋白質(zhì)因子的相互作用調(diào)控細胞凋亡[4]。

Caspase3為調(diào)節(jié)效應(yīng)型,分解細胞蛋白,執(zhí)行凋亡。相關(guān)研究顯示,瘤細胞Caspase3下調(diào)可阻斷凋亡信號傳導(dǎo),從而抵制細胞誘導(dǎo)凋亡。Caspase3基因甲基化、基因突變及表達異?？墒笴aspase3蛋白表達下調(diào),使一些腫瘤細胞得以逃避機體誘發(fā)凋亡的監(jiān)控。

本研究顯示,化療前與化療后相比,宮頸癌中Caspase3的表達上升,高于化療前水平,可以說明Caspase-8表達變化可能與宮頸癌癌的發(fā)生、發(fā)展有關(guān)。它們都直接參與介導(dǎo)細胞凋亡的過程,在不同的細胞凋亡因素刺激下,caspase在細胞內(nèi)可以通過多種不同途徑被活化,活化后的caspase通過切斷與周圍細胞的聯(lián)絡(luò),重組細胞骨架,阻止DNA復(fù)制和修復(fù),破壞DNA和核結(jié)構(gòu),誘導(dǎo)凋亡小體的形成等,在細胞凋亡過程中起著重要作用。因此,Caspase3表達對宮頸癌病情進展的監(jiān)測、轉(zhuǎn)移潛能及預(yù)后估計等具有潛在研究價值。

[1]李晟磊,劉宗文,趙秋民.食管鱗癌組織中RECKmRNA和蛋白的表達及意義[J].中國腫瘤臨床,2007,34(22):1280～1286.

[2]馬惠芳,林彩霞,任秀君.針刺對腦缺血大鼠海馬區(qū)凋亡細胞及Caspase-9蛋白表達的影響[J].中國中醫(yī)藥信息雜志,2009,16(11):25～26.

[3]Worf BB,Green DR.Suicidal Tendencies:Apoptotic cell Death by Caspase-Family Proteinase[J].J Biol Chem,1999,27(29):20049～20052.

[4]張保華,王澤華.不同宮頸組織中caspase-3基因的表達及其臨床意義[J].臨床醫(yī)學(xué),2003,23(6):523～524.