BRAF在前列腺癌組織中的表達及意義

王 輝，侯 瑞，楊 光，徐文林，呂 申

(1.大連醫(yī)科大學 附屬第一醫(yī)院 超聲科，遼寧 大連116011；2.大連醫(yī)科大學 附屬第二醫(yī)院 中心實驗室，遼寧 大連 116027)

大多數(shù)學者認為BRAF基因可能是一種癌基因，參與腫瘤的發(fā)生發(fā)展。目前國內(nèi)外，BRAF蛋白在結(jié)直腸癌組織、惡性黑色素瘤及甲狀腺腫瘤中表達的研究較多，但還未見到在前列腺內(nèi)的表達的研究。本研究旨在探討B(tài)RAF在前列腺癌組織中表達及其與臨床病理因素的關(guān)系。

1 材料和方法

1.1 分 組

病例為2005～2009年大連醫(yī)科大學附屬第一醫(yī)院行經(jīng)直腸彩超檢查的患者，前列腺癌及增生患者均行經(jīng)直腸超聲引導下前列腺穿刺活檢確診。

前列腺癌組：74例，均為腺癌?；颊吣挲g34～92歲，平均年齡(58.00±13.51)歲。所有病例都行螺旋CT或核磁共振檢查及全身骨組織核素掃描，判斷周圍浸潤轉(zhuǎn)移情況，有無骨轉(zhuǎn)移。標本均按2002年WHO腫瘤國際組織學分類標準[1]分類：其中中高分化癌23例，低分化癌51例；按Whitmore-Jewett(ABCD)系統(tǒng)標準進行臨床分期[2]：其中A期+B期40例,C期+D期34例，本實驗將(A+B)期作為未浸潤轉(zhuǎn)移組，(C+D)期作為浸潤轉(zhuǎn)移組。

良性增生組：39例，患者年齡40～87歲，平均年齡(62.34±14.37)歲。

1.2 方 法

以上所有病例術(shù)前均未行任何內(nèi)分泌治療及放化療。將所收集穿刺活檢標本經(jīng)10%中性福爾馬林固定，用點陣法石蠟包埋，每個蠟塊內(nèi)含25～35條穿刺活檢組織。采取連續(xù)切片，片厚3 μm。石蠟切片置于電熱恒溫鼓風干燥箱中，62℃下3 h，放置待用。

免疫組化方法：BRAF單克隆抗體(濃度分別為1∶20,1∶1∶100，1∶500),二抗為羊抗鼠IgG(1∶120),以上抗體及SP試劑盒均購自福州邁新公司。具體按操作說明書進行,以0.01 mol/L、pH 7.4 PBS液代替一抗作為陰性對照。

1.3 BRAF免疫組化染色結(jié)果判斷

BRAF染色以細胞質(zhì)出現(xiàn)棕黃色顆粒為陽性。選取有代表性的腺上皮區(qū)域，在400倍高倍鏡下計數(shù)陽性細胞數(shù)，即分別對每張切片的陽性細胞數(shù)及陽性細胞著色程度進行分級記分,結(jié)果以兩項乘積表示。陽性細胞數(shù)：0分為無陽性細胞，1分為陽性細胞數(shù)<25%，2分為陽性細胞數(shù)25%～50%，3分為陽性細胞數(shù)>50%～75%，4分為陽性細胞數(shù)>75%。染色強度：0分為無染色，1分為淡棕黃色，2分為棕黃色，3分為深褐色。兩者相乘1～4分為弱陽性(+)，5～8分為中等陽性(++)，9～12分為強陽性(+++)。

1.4 統(tǒng)計學方法

所有數(shù)據(jù)均采用統(tǒng)計軟件 SPSS 10.0處理，計數(shù)資料采用χ2檢驗。P<0.05為差異有統(tǒng)計學意義。

2 結(jié) 果

2.1 前列腺癌與增生組織BRAF蛋白表達特點

前列腺癌與增生組織BRAF蛋白表達陽性率分別為64.86%，10.26%，兩者比較差異有顯著性意義，P<0.05。見表1、圖1、2。

表1 前列腺癌與增生組織BRAF蛋白表達Tab 1 The expression of BRAF in cases of prostate cancer and BPH

1)與增生組比較，P<0.05

圖1 前列腺癌BRAF蛋白陽性表達(SP ×100)Fig 1 The expression of BRAF in cases of prostate cancer(+) (SP ×100)

圖2 良性增生BRAF蛋白陽性表達(SP ×200)Fig 2 The expression of BRAF in cases of BPH(+) (SP ×200)

2.2 前列腺癌BRAF蛋白的表達與臨床病理因素的關(guān)系

如表2所示，中高分化前列腺癌與低分化前列腺癌Braf蛋白表達陽性率分別為43.48%、74.51%(P<0.05)。(A+B)期前列腺癌與(C+D)期前列腺癌Braf蛋白表達陽性率分別為42.50%、91.18%(P<0.05)。≤60歲前列腺癌病例與>60歲病例Braf蛋白表達陽性率差異無顯著性意義(P>0.05)。

表2 前列腺癌組織BRAF蛋白表達與臨床病理的關(guān)系

1)與低分化組比較，P<0.05；2)與(C+D)期比較，P<0.05

3 討 論

BRAF基因是1988年由Ikawa[3]等首先在人類尤文氏肉瘤中發(fā)現(xiàn)并克隆確認的，是一個能轉(zhuǎn)染NIH3T3細胞且有活性的DNA序列，因其與CRAF和ARAF具有相當高的同源性，故稱其為BRAF。英國腫瘤基因組計劃的科學家Davies等[4]對來自于530個不同腫瘤細胞株的基因組DNA進行篩查，結(jié)果證實有43株細胞發(fā)生了BRAF基因突變。BRAF突變后持續(xù)性激活MAPK通路,使前有絲分裂原有效分裂能力增強,導致細胞異常增殖和分化。調(diào)查顯示,大約有65%的結(jié)直腸癌、卵巢癌等惡性腫瘤與該家族中的BRAF突變體有關(guān)。研究表明，BRAF 基因突變在甲狀腺腫瘤發(fā)生發(fā)展中有其獨特而重要的作用[3-7]。

本研究發(fā)現(xiàn)，BRAF蛋白高表達在前列腺癌的發(fā)生中起到重要的作用。前列腺癌BRAF蛋白表達陽性率為64.86%，增生組陽性率為10.26%。前列腺癌組較增生組BRAF蛋白表達陽性率顯著增高，P<0.05。

Yuen ST、張艷霞等[8,9]已證實BRAF蛋白在高、中、低分化結(jié)直腸癌中的表達陽性率差異有顯著性意義，且BRAF在統(tǒng)計學上的表達模式符合“增生性息肉-鋸齒狀腺瘤-癌”遞增趨勢。Houben、朱琰琰等[10,11]的研究還發(fā)現(xiàn)，BRAF的突變狀態(tài)與惡性黑色素瘤的分期、預后有關(guān)，存在BRAF突變者預后不良的現(xiàn)象。

本研究結(jié)果顯示，中高分化病例BRAF蛋白表達陽性率為43.48%，低分化病例蛋白表達陽性率為74.51%。二者差異有顯著性意義，P<0.05。(A+B)期(無浸潤轉(zhuǎn)移)病例BRAF蛋白表達陽性率為42.50%，(C+D)期(有浸潤轉(zhuǎn)移)病例蛋白表達陽性率為91.18%。二者差異有顯著性意義，P<0.05。說明BRAF蛋白表達與前列腺癌的組織分化及臨床分期有密切關(guān)系。這與其在其他腫瘤內(nèi)的表達規(guī)律基本一致。本研究還發(fā)現(xiàn)，BRAF蛋白表達與前列腺癌患者年齡大小無關(guān)。

因此，BRAF蛋白的表達與前列腺癌的發(fā)生發(fā)展密切相關(guān)。檢測BRAF蛋白表達可能會比較好地協(xié)助前列腺癌診斷分型、判斷預后。

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