子癇前期患者胎盤組織中Ang-1的表達(dá)及意義

侯曉芬 張延麗

子癇前期患者胎盤組織中Ang-1的表達(dá)及意義

侯曉芬 張延麗

目的 探討血管生成素-1(Ang–1)在子癇前期患者胎盤組織中的表達(dá)及意義。方法采用免疫組織化學(xué)方法檢測(cè)30例正常妊娠婦女及60例子癇前期(輕度30例，重度30例)患者胎盤組織中Ang–1的表達(dá)。結(jié)果正常妊娠組、輕度、重度子癇前期組胎盤組織中Ang-1表達(dá)逐漸增強(qiáng)，且各組間差異具有顯著性(P＜0.05)。結(jié)論子癇前期患者胎盤中Ang–1表達(dá)水平的變化可能與子癇前期的發(fā)病及病情發(fā)展有關(guān)。

子癇前期;Ang–1;免疫組織化學(xué)方法

子癇前期(preeclampsism)是妊娠期特有的疾病，嚴(yán)重威脅母兒安全，是危害孕產(chǎn)婦健康和造成胎兒死亡的重要疾病之一。為此許多學(xué)者對(duì)其發(fā)病機(jī)制進(jìn)行了大量的研究，但具體發(fā)病機(jī)制至今仍未完全闡明。

Ang-1是一種重要的血管生成調(diào)節(jié)因子，它與其受體結(jié)合通過多種機(jī)制影響滋養(yǎng)層細(xì)胞浸潤(rùn)能力、影響胎盤發(fā)育，這可能是導(dǎo)致子癇前期、胎兒生長(zhǎng)受限等疾病的重要原因之一。本研究采用免疫組織化學(xué)方法檢測(cè)子癇前期患者及正常妊娠患者胎盤中Ang-1的表達(dá)，以探討其在子癇前期發(fā)病過程中可能的作用及其相互作用機(jī)制，為臨床尋找子癇前期病因提供理論依據(jù)。

1 資料與方法

1.1 實(shí)驗(yàn)對(duì)象 隨機(jī)收集我院2009年3月至2010年3月間在山西醫(yī)科大學(xué)第一臨床附屬醫(yī)院產(chǎn)科住院分娩的90例產(chǎn)婦的胎盤組織，其中子癇前期患者60例(輕度30例，重度30例)，正常孕婦30例 (正常妊娠組)。子癇前期的診斷標(biāo)準(zhǔn)參照樂杰主編的《婦產(chǎn)科學(xué)》第7版［1］。所有病例均為單胎初產(chǎn)婦，無原發(fā)性高血壓、糖尿病、心臟病和肝腎疾病史等其他妊娠合并癥及并發(fā)癥。兩組孕婦年齡、孕齡及孕次、分娩方式之間比較差異無顯著性(P＞0.05)(見表1)。

表1 兩組間一般臨床資料比較(±s)

表1 兩組間一般臨床資料比較(±s)

組別 例數(shù) 年齡(歲) 孕齡(天)正常妊娠組30 28.3±4.63 269.0±5.46輕度子癇前期組 30 28.6±3.41 264.4±5.69重度子癇前期組30 29.5±5.32 259.7±6.63

1.2 實(shí)驗(yàn)方法

1.2.1 標(biāo)本采集及處理 所有研究對(duì)象于胎盤娩出后，立即取胎盤母體面組織大小約1 cm×1 cm×1 cm，注意避開出血、梗死及鈣化區(qū)，生理鹽水漂洗3次后，置于10%中性福爾馬林溶液中固定24～48 h，并用石蠟包埋，制成5 μm左右切片，備用。

1.2.2 測(cè)定方法 采用免疫組織化學(xué)SABC法。特異性兔抗人Ang-1抗體工作濃度為1∶100(由武漢博士德生物工程有限公司提供)。實(shí)驗(yàn)步驟按試劑盒說明書嚴(yán)格進(jìn)行。

1.2.3 結(jié)果判定 以細(xì)胞膜或細(xì)胞漿出現(xiàn)明顯的棕黃色顆粒為陽性細(xì)胞，無著色或與背景顏色一致的為陰性細(xì)胞。由至少兩位經(jīng)驗(yàn)豐富的專業(yè)人員獨(dú)立閱片，將制好的切片置顯微鏡下觀察，每張切片在400倍高倍視野下隨機(jī)取5個(gè)視野，用病理圖像分析軟件進(jìn)行半定量分析，計(jì)算平均灰度值。

1.3 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法 采用SPSS 13.0統(tǒng)計(jì)軟件處理，所有數(shù)據(jù)以均值±標(biāo)準(zhǔn)差(±s)表示，各組間比較采用單因素方差分析，組間兩兩比較用LSD法，P＜0.05表明差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

胎盤組織中Ang-1表達(dá)強(qiáng)度的比較 免疫組化檢測(cè)發(fā)現(xiàn)Ang-1在孕婦胎盤絨毛間質(zhì)、滋養(yǎng)葉細(xì)胞和血管內(nèi)皮細(xì)胞中均有表達(dá)，主要集中在細(xì)胞膜及細(xì)胞漿中。用病理圖像分析軟件對(duì)Ang-1免疫組織化學(xué)染色切片進(jìn)行灰度測(cè)定(見表2)。實(shí)驗(yàn)結(jié)果發(fā)現(xiàn):正常妊娠組、輕度子癇前期組、重度子癇前期組胎盤組織中Ang-1表達(dá)逐漸增強(qiáng)，且各組間差異具有顯著性(P＜0.05)。

表2 各組孕婦胎盤組織Ang-1表達(dá)強(qiáng)度(平均灰度值)比較

3 討論

3.1 Ang-1的生物學(xué)功能 Ang-1是一類重要的血管生成調(diào)節(jié)因子，是血管生成素(Angiopoietin，Ang)家族中的成員。Ang家族現(xiàn)包括四個(gè)成員:Ang-1，Ang-2，Ang-3，Ang-4，均能識(shí)別內(nèi)皮細(xì)胞特異性酪氨酸激酶受體(Tie-2)，但效應(yīng)不同。Ang-1是Tie-2的激動(dòng)劑，與Tie-2結(jié)合啟動(dòng)受體磷酸化，在細(xì)胞粘附因子存在時(shí)可抑制內(nèi)皮細(xì)胞的凋亡［2，3］、抑制血管滲漏［4］、減少血管炎癥［5］從而維持血管的穩(wěn)定性［6］。

3.2 Ang-1與子癇前期 在正常妊娠中，隨著妊娠的進(jìn)展，滋養(yǎng)層細(xì)胞侵入螺旋動(dòng)脈，子宮胎盤血液循環(huán)阻力下降，血流灌注充分;而滋養(yǎng)細(xì)胞不能正常侵入子宮內(nèi)膜，浸潤(rùn)過淺、浸潤(rùn)性滋養(yǎng)細(xì)胞數(shù)量不足以及螺旋動(dòng)脈重鑄失敗等經(jīng)?？稍谧影B前期患者的胎盤中觀察到［7］。所以滋養(yǎng)細(xì)胞的分化、遷移、浸潤(rùn)過程對(duì)妊娠發(fā)生和維持極其重要。因此凡是影響滋養(yǎng)細(xì)胞正常浸潤(rùn)過程的因素都可能導(dǎo)致子癇前期的發(fā)生。

Nadar等［8］研究發(fā)現(xiàn)，子癇前期的妊娠婦女血清的Ang-1mRNA表達(dá)水平明顯增加。本實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明，輕度、重度子癇前期患者胎盤組織中Ang-1表達(dá)均明顯高于正常妊娠組，且重度子癇前期患者Ang-1表達(dá)水平顯著高于輕度患者，可推測(cè):Ang-1在滋養(yǎng)層細(xì)胞、血管內(nèi)皮細(xì)胞和絨毛間質(zhì)的表達(dá)明顯增加，可能增加胎盤、滋養(yǎng)細(xì)胞血管的穩(wěn)定性，使形成分支血管發(fā)生障礙，致子宮螺旋動(dòng)脈重建失敗，造成胎盤灌注不足，引起胎盤功能不良，從而導(dǎo)致子癇前期的一系列病理改變。對(duì)于子癇前期，Ang-1的表達(dá)目前國內(nèi)外尚無統(tǒng)一定論，仍需要進(jìn)一步的研究。

Ang-1不參與血管的起始，只參與血管的成熟。Ang-1維持血管穩(wěn)定的作用，可抑制胎盤螺旋小動(dòng)脈的正常產(chǎn)生，引起胎盤血液供應(yīng)障礙，使滋養(yǎng)細(xì)胞浸潤(rùn)過程減弱，從而導(dǎo)致子癇前期的發(fā)生?？傊?，Ang-1通過多種機(jī)制影響子宮-胎盤血管床的發(fā)育和重塑，導(dǎo)致胎盤缺血缺氧，胎盤發(fā)育不良，引起滋養(yǎng)細(xì)胞侵入不足，最終導(dǎo)致子癇前期的發(fā)生。

［1］ 樂杰．婦產(chǎn)科學(xué)．人民衛(wèi)生出版社，2008:92．

［2］ Kim I，Kim HG，et al．Angiopoietin-1 regulates endothelial cell survival through the phosphatidylinositol 3’-Kinase/Akt signal transduction pathway．Circ Res，2000，86(1):24-29.

［3］ Papapetropoulos A，F(xiàn)ulton D，Angiopoietin-1 inhibits endothelial cell apoptosis via the Akt/survivin pathway.J Biol Chem，2000，275 (13):9102-9105.

［4］ Gamble JR，Drew J，et al.Angiopoietin-1 is an antipermeability and anti-inflammatory agent in vitro and targets cell junctions.Circ Res，2000，87(7):603-607.

［5］ Kim I，Moon SO，et al.Angiopoietin-1 reduces VEGF-stimulated leukocyte adhesion to endothelial cells by reducing ICAM-1，VCAM-1，and E-selectin expression.Circ Res，2001，89(6): 477-479．

［6］ Shigetomo Fukuhara，Keisuke Sako，et al.Tie2 is tied at the cellcell contacts and to extracellular matrix by Angiopoietin-1．Exp Mol Med，2009，41(3):133-139.

［7］ Kadyrov M，Kindom JC，Huppertz B.Divergent trophoblast invasion and apoptosis in placental bed spiral arteries from pregnancies complicated by maternal anemia and early-onset preeclampsia/intrauterine growth restriction.Am J Obstet Gynecol，2006，194(2): 557-563.

［8］ Nadar SK，Karalis I，et al．Plasma markers of angiogenesis in pregnancy induced hypertension.Thromb Haemost，2005，94(5): 1071-1076.

Expression and significance of Ang-1 in placenta from patients with preeclampsia patients

HOU Xiaofen，ZHANG Yan-li．Gynecology and Obstetrics of first Clinical Medical College，Taiyuan 030001，China

Objective To study the expression and clinical significance of Ang-1 in placenta from patients with preeclampsia．Methods The expression of Ang-1 were detected in placental from 30 normal3pregnants women and 60 patients with preeclampsia(30 mild preeclampsia，30 severe preeclampsia)by immunohistochemistry.ResultsThe expressions of Ang-1 of placenta in normal pregnant，mind preeclampsia and severe preeclampsia groups were gradually increased，there were significant differences among them(P＜0.05).ConclusionThe changes of expressional levels of Ang-1 are related to the occurrence and development of preeclampsia.

Preeclampsia;Ang-1;Immunohistochemistry

030001太原，山西醫(yī)科大學(xué)在讀碩士(侯曉芬);山西醫(yī)科大學(xué)第一臨床醫(yī)學(xué)院婦產(chǎn)科(張延麗)