梯度離心法與標(biāo)準(zhǔn)上游法在宮腔內(nèi)人工授精(IUI)中應(yīng)用比較*

劉燦華 張 斕 陳 銘 王 琪

(吉安市中心人民醫(yī)院檢驗(yàn)科,江西 吉安 343000)

宮腔內(nèi)人工授精(intrauterine insemination, IUI)是將精液在體外進(jìn)行處理，使精子優(yōu)化、獲能，然后用導(dǎo)管將精子懸液注入宮腔內(nèi)以獲得妊娠助孕的目的。是目前臨床上常用的輔助生殖技術(shù)之一，適用于宮頸因素所致的不孕，不明原因性不孕或輕、中度子宮內(nèi)膜異位癥，免疫性不孕和男方精液異常，如少、弱精癥、精液液化不良、抗精子抗體陽(yáng)性等。精液體外處理的方法有很多種，目前尚未找到公認(rèn)的最佳方法。本研究對(duì)2006年1月至2009年12月在我院生殖醫(yī)學(xué)門診進(jìn)行IUI患者的臨床資料進(jìn)行回顧性對(duì)比、分析，根據(jù)不孕患者精液情況找到最適精液處理方法，提高IUI的臨床妊娠率。

1材料與方法

1.1臨床資料 選取在本院06年1月至09年12月72例夫精宮腔內(nèi)人工受精(IUI) 患者，共156個(gè)周期為研究對(duì)象，年齡25～42歲，平均(28.5±4.5)歲，原發(fā)性不孕42例，繼發(fā)性不孕30例，不孕時(shí)間2～10年。不孕原因：男性因素(少、弱精，心理因素，射精功能異常，液化異常，免疫性因素)50例，女性因素(輕、中度子宮內(nèi)膜異位癥，宮頸黏液分泌異常，免疫性因素)20例，不明原因性不孕2例。根據(jù)患者精液質(zhì)量情況，接受IUI時(shí)選擇的精液處理方法分成兩組。其中90個(gè)周期采用梯度離心法處理精液為一組， 66個(gè)周期采用標(biāo)準(zhǔn)上游法處理精液為另一組。

1.2設(shè)備與試劑 WLJY-9000偉力彩色精子分析儀、超凈工作臺(tái)(蘇州凈化)、水平離心機(jī)、二氧化碳培養(yǎng)箱、10%SSS、Isolate精子分離液等。

1.3處理方法

1.3.1精液的采集 禁欲3～5天，在IUI日手淫法留取整份精液在無(wú)毒性一次性取精杯中，放入37℃恒溫培養(yǎng)箱中等精液完全液化后處理。

1.3.2精液的處理

標(biāo)準(zhǔn)上游法：取試管數(shù)支，每管加入2.0 ml精子培養(yǎng)液。再分別將0.5ml液化精液慢慢加入試管底部，使其形成兩個(gè)界面。加蓋，45°傾斜，置于37℃、5%CO2孵箱中30～60分鐘。收集各管上清液，離心200 g×5分鐘，棄上清液，加2 ml培養(yǎng)液，打允后離心200 g×5分鐘。留沉淀物，加0.5ml培養(yǎng)液制成精子懸液，調(diào)整精子濃度10×10～30×106/ml備用。

Isolate密度梯度離心法：向錐底離心試管內(nèi)分別加入Lower phase和Upper phase各1 ml、精液2 ml，300 g×20分鐘，棄上清液，留沉淀物，加2 ml洗精液，打勻后，離心200 g×5分鐘，重復(fù)洗滌2次后，棄上清液。留沉淀物，加0.5 ml培養(yǎng)液制成精子懸液備用。

1.4受精方法 受精時(shí)取膀胱截石位，用生理鹽水擦洗外陰、陰道及宮頸，抬高臀部，用Tom,s管將處理好的精子懸液0.5 ml緩慢注入宮腔內(nèi)，導(dǎo)管應(yīng)插入宮頸內(nèi)5～6 cm，避免損傷和出血，患者原位仰臥休息30分鐘。分別在排卵前后各受精一次。

1.5黃體支持與妊娠 所有接受IUI婦女術(shù)后均接受黃體支持。術(shù)后14天抽血做HCG檢測(cè)，陽(yáng)性為生化妊娠，IUI后5周B超檢查發(fā)現(xiàn)孕囊和原始心管搏動(dòng)，確診為臨床妊娠。

1.6統(tǒng)計(jì)學(xué)方法

采用χ2檢驗(yàn)和t檢驗(yàn)

2結(jié) 果

兩組精液處理方法在處理前、后精子密度、活率、活力比較見表1，兩組妊娠率比較見表2。

表1 處理前、后精子密度與活率及活力(a+b)比較 周期

表2 兩種方法處理后妊娠率比較

注:經(jīng)χ2檢驗(yàn),P>0.05,與標(biāo)準(zhǔn)上游法比較,經(jīng)t檢驗(yàn),P<0.05

3 討 論

精液體外處理的目的就是要提高精子的密度和活力，適當(dāng)控制精子總數(shù)，減少和去除精漿內(nèi)的前列腺素、炎癥細(xì)胞、抗精子抗體等不良成分，促進(jìn)精子獲能，改善精子受精能力[3]。

隨著輔助生殖技術(shù)的迅速發(fā)展，精液體外處理的方法也越來(lái)越多，每一種方法都有它的優(yōu)缺點(diǎn)。標(biāo)準(zhǔn)上游法是利用精子具有主動(dòng)游過液體界面進(jìn)入不同培養(yǎng)液的能力，而達(dá)到自行與死精、凝集精子、畸形精子和細(xì)胞雜質(zhì)分離的目的。獲得的精子活力、活率較高，達(dá)90%以上。但卻存在精子回收率較低的缺點(diǎn),僅適用于精子活動(dòng)力、密度均正常的患者。而Isolate密度梯度離心法則是利用不同成熟階段的精子和各種細(xì)胞成分各自的密度差異，使之在不同濃度的溶液中，在離心力作用下停留在不同密度的界面上，達(dá)到較好的分離目的，處理后精子數(shù)回收較高[1]，處理的時(shí)間短，但由于離心時(shí)間長(zhǎng)，可能對(duì)精子造成物理?yè)p傷如：頂體的松動(dòng)或不完整等，處理后死精子相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)上游法多，回收的精子活動(dòng)率較標(biāo)準(zhǔn)上游發(fā)低，可能引起精子受精功能下降等。

人工授精妊娠成功的關(guān)鍵之一在于把握好受精時(shí)間，同時(shí)根據(jù)不孕患者精液情況，采用不同的處理方法優(yōu)化精液[2]，標(biāo)準(zhǔn)上游法和Isolate密度梯度離心法是本實(shí)驗(yàn)室常用的兩種方法，雖然兩種精液處理方法的臨床妊娠率是相似的，在今后的工作中，要根據(jù)不孕患者精液情況，采用相應(yīng)的處理方法，以提高臨床妊娠率，更好地為患者服務(wù)。

[1] 鄧曉惠. 生殖醫(yī)學(xué)技術(shù)及其彩色圖譜[M].濟(jì)南;山東科學(xué)技術(shù)出版社,2004.45.

[2] 曹金鳳.趙志明.左一鵬.宮腔內(nèi)人工授精278例[J].中國(guó)優(yōu)生與遺傳雜志,2004,12(2);63-64.

[3] 江峰，王益鑫，盛新福，等. 精液體外處理方法的選擇[J].中國(guó)男科學(xué)雜志，2000，14(2):134.