夏枯草采收時期對果穗與種子質(zhì)量影響的研究

江建銘,徐建中,任江劍

(浙江省中藥研究所,浙江杭州 310023)

夏枯草 (Prunella vulgarisL.)為唇形科夏枯草屬多年生草本植物,以干燥果穗入藥,其性寒、味苦辛,具有清肝明目、消腫散結(jié)等功效,主治頭痛眩暈、目赤腫痛、瘰疬、癭瘤、乳癰等癥[1],臨床應(yīng)用廣泛,已被我國 2005年版藥典收載。

中藥材適宜采收期的確定首先要考慮其有效成分含量高低,其次要兼顧產(chǎn)量因素,但對夏枯草等以有性繁殖器官作為藥材商品、生產(chǎn)上又以種子繁育的這類中藥材而言,確定適宜采收期還要考慮其對種子質(zhì)量的影響,以利提供優(yōu)質(zhì)良種和保障翌年生產(chǎn)的高產(chǎn)、穩(wěn)產(chǎn)。目前,對夏枯草適宜采收期的研究報道較少,羅目和[2]等開展了試驗,但采收期的確定以夏枯草成熟階段相隔相同的天數(shù) (10 d)為指標(biāo)。由于夏枯草果穗成熟進程受天氣影響較大,相同的時間在不同產(chǎn)地與年份之間果穗成熟進程完全不同,因此,以相隔天數(shù)為指標(biāo)對生產(chǎn)上的指導(dǎo)意義不大。本試驗以夏枯草果穗成熟由下而上逐漸變黃這一發(fā)育特性為依據(jù),以果穗發(fā)黃 (成熟)程度為指標(biāo),考查不同采收期對果穗熊果酸含量及種子質(zhì)量的影響,以確定最佳的采收期。

1 材料與方法

1.1 材料

試驗材料來自于種植條件相同的試驗基地。果穗按基部初見黃色、果穗發(fā)黃≤1/4、2/4、3/4,全黃及全黃后 7 d分別采摘,采后及時曬干、脫粒。將果穗與種子分別放置于不同的干燥器中備用,各 6份試驗樣品。試驗材料經(jīng)浙江省中藥研究所教授級高級工程師俞旭平鑒定為唇形科 (Labiatae)夏枯草屬(Prunella)植物夏枯草的干燥果穗和種子。

1.2 方法

1.2.1 采收期對果穗質(zhì)量的影響

本試驗以 2005版藥典 (一部)所列的夏枯草果穗質(zhì)量指標(biāo)成分熊果酸 (C30H48O3)為評價果穗質(zhì)量優(yōu)劣的考查對象[3]。熊果酸含量測定采用高效液相色譜儀法,高效液相色譜儀為安捷倫 1100,具體方法如下:

(1)色譜條件:色譜柱:迪馬公司 Diamonsil C18分析柱 (4.6 mm ×250 mm ×5μm);流動相:0.04 mol·L-1磷酸二氫鈉(用5%磷酸調(diào)節(jié)pH至2.80):乙腈 (體積比為 20∶80);流速:1.0 mL·min-1;檢測波長:215 nm;柱溫:35℃;進樣量:20μL。

(2)對照品標(biāo)準(zhǔn)溶液的制備:精密稱取熊果酸標(biāo)準(zhǔn)樣品 (購于中國藥品生物檢定所,批號為110742-200516)2.57 mg,置于 25 mL容量瓶中,甲醇溶解并稀釋至刻度,得含熊果酸 0.102 8 mg·mL-1的對照品標(biāo)準(zhǔn)溶液。

(3)標(biāo)準(zhǔn)曲線繪制:精密吸取熊果酸對照品溶液 2、5、10、15、20、25、30、40μL,按上述色譜條件測定峰面積,以峰面積為縱座標(biāo),熊果酸進樣量為橫座標(biāo),繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線,并計算回歸方程:Y=542.626 3X-7.214 3相關(guān)系數(shù) r=0.999 98,表明熊果酸在0.2μg～40μg范圍內(nèi)具有良好的線性關(guān)系。

(4)精密度試驗:精密吸取熊果酸對照品溶液,重復(fù)進樣 5次,每次 20μL,考察測定的精密度,熊果酸峰面積積分值分別為 1 096.6、1 092.8、1 089.9、1 107.5、1 100.1,平均值為 1 097.38,相對標(biāo)準(zhǔn)偏差為 0.62%,表明本方法精密度較高。

(5)穩(wěn)定性試驗:取同一標(biāo)準(zhǔn)品溶液,室溫下放置,分別在 0 h、24 h進樣 20μL測定,熊果酸峰面積積分平均值分別為 1 095.9、1 097.4,表明樣品溶液在室溫下比較穩(wěn)定。

(6)重復(fù)性試驗:取同一批號的夏枯草 6份,依上述條件測定含量,樣品熊果酸含量分別為2.519 7%、2.489 6%、2.704 7%、2.659 5%、2.667 8%、2.613 2%,相對標(biāo)準(zhǔn)偏差為 3.32%,表明本方法的重復(fù)性較好。

(7)加樣回收率試驗:取已知含量的夏枯草樣品,分別添加熊果酸對照品后,同上述條件做 5次平行試驗,測定結(jié)果詳見表1。

由表1可知熊果酸回收率 RSD為 2.14%,表明本方法回收性良好。

表1 加樣回收率試驗測定結(jié)果

(8)供試品溶液的制備:精密稱取干燥恒重的夏枯草樣品粉末(過二號篩)2 g,置索氏提取器中,加入乙醚 50 mL,浸泡過夜,加熱回流 6 h,蒸干溶劑,殘渣用石油醚 (60～90℃)浸泡 2次,每次15 mL,每次 2 min,傾出石油醚液,殘渣揮干殘留溶劑,用甲醇溶解并轉(zhuǎn)移至 10 mL容量瓶中,加甲醇至刻度。精密量取 1 mL,置 10 mL容量瓶中,用甲醇稀釋至刻度,搖勻,即得。

1.2.2 采收期對種子質(zhì)量的影響

本試驗主要以種子大小 (千粒重)和發(fā)芽率來評價種子質(zhì)量。

(1)千粒重測定:參照 2000《農(nóng)作物種子檢驗規(guī)程》實施指南[4]中類似植物千粒重檢驗方法。將經(jīng)充分混勻的試驗樣品種子分別隨機數(shù)取 100粒,8個重復(fù),分別稱重,經(jīng)標(biāo)準(zhǔn)差及變異系數(shù)檢驗后,折算成千粒重。

(2)發(fā)芽率測定:從收集的種子中,各處理隨機數(shù)取 100粒,均勻地放入已置雙層濾紙的培養(yǎng)皿中,加入適量的水分。將培養(yǎng)皿置于 GTOP-2688智能型光照培養(yǎng)箱,在 15℃,光強 1 000 lx,每天光照10 h下發(fā)芽,15 d后統(tǒng)計發(fā)芽率。每樣品 (處理)3次重復(fù)。

2 結(jié)果與分析

2.1 采收期對果穗質(zhì)量的影響

精密吸取各樣品溶液 20μL,在相同的實驗條件測得各試驗樣品的熊果酸含量介于 0.252 3%～0.403 7%之間 (詳見表2)。

從表2可清楚看出,不同的采收期之間,夏枯草果穗熊果酸含量存在明顯的變化,其含量隨果穗成熟度的增加而提高,至全黃時熊果酸含量達最高值0.403 7%;同時,可以發(fā)現(xiàn)前期增加較為緩慢,處理3(半黃)僅比處理 1(基部初見黃)提高 8.4%;當(dāng)果穗變黃程度大于一半后,果穗內(nèi)熊果酸積累明顯加速,處理 5(全黃)比處理 3(半黃)的熊果酸含量增加 47.6%。果穗全黃后如不及時采摘,熊果酸含量會呈現(xiàn)一個明顯的下降趨勢,全黃后 7 d(處理 6)果穗內(nèi)熊果酸的含量僅為全黃時 (處理 5)的 67.8%,表明夏枯草果穗的采收應(yīng)在果穗全黃后及時采摘,此時熊果酸含量最高,質(zhì)量最好。

表2 夏枯草果穗不同采收期熊果酸含量變化

2.2 采收期對種子質(zhì)量的影響

本試驗主要考查了夏枯草果穗不同采收期對種子大小 (千粒重)和發(fā)芽率的影響,各樣品測定結(jié)果詳見表3。從表3可知,夏枯草種子千粒重與發(fā)芽率勻隨果穗成熟度的增加呈明顯的上升趨勢,至果穗全黃 (處理 5)基本達最大值,千粒重比早收的 4個處理提高 4.6%～58.9%;發(fā)芽率提高 16.6%～59.6%,此后,種子千粒重和發(fā)芽率無明顯變化。發(fā)芽率差異顯著性測定也表明為,處理 5、6之間無明顯差異,與其它處理之間存在極顯著差異,表明夏枯草果穗全黃后采收,種子質(zhì)量最佳。

表3 夏枯草果穗不同采收期對種子千粒重與發(fā)芽率的影響

3 結(jié) 論

夏枯草為多年生草本植物,頂生假穗狀花序(果穗)具有由下而上依次開花、結(jié)果和變黃 (成熟)的生長發(fā)育特性。從本試驗果穗熊果酸含量、種子千粒重和發(fā)芽率隨果穗成熟度的增加而逐漸提高,至果穗完全變黃 (成熟)時達最大值的結(jié)果來看,與其果穗生長發(fā)育特性相一致,表明夏枯草的采收時期必須在果穗完全變黃 (成熟)后,同時,從果穗熊果酸含量積累動態(tài)變化規(guī)律來看,過遲采收 (全黃后 7 d)其含量會明顯下降,這與羅目和[2]報道的夏枯草果穗熊果酸含量前期增加、后期減少的結(jié)果一致。因此,夏枯草果穗采收應(yīng)在果穗全黃后及時采摘。

本試驗以果穗發(fā)黃程度為指標(biāo),直觀性較強,易掌握,對生產(chǎn)實踐具有較好的指導(dǎo)意義。

[1] 中國醫(yī)學(xué)科學(xué)院藥用植物資源開發(fā)研究所.中藥志第 5冊[M].北京:人民衛(wèi)生出版社,1994:289.

[2] 羅目和,周日寶,童巧珍,等.規(guī)范化栽培夏枯草果穗的最佳采收期研究[J].湖南中醫(yī)學(xué)院學(xué)報,2005,25(1):12.

[3] 國家藥典委員會.中華人民共和國藥典.2005版一部[S].北京:化學(xué)工業(yè)出版社,2005:197.

[4] 支巨振,鄧光聯(lián),顏啟傳,等.農(nóng)作物種子檢驗規(guī)程實施指南[M].北京:中國標(biāo)準(zhǔn)出版社,2000:126.