益氣養(yǎng)陰活血利水法對(duì)兔視網(wǎng)膜脫離后視網(wǎng)膜組織中IL-1β表達(dá)的影響

彭清華 ，劉 娉 ，2，彭 俊 ，姚小磊

（1.湖南中醫(yī)藥大學(xué)第一附屬醫(yī)院中醫(yī)眼科學(xué)重點(diǎn)學(xué)科，湖南 長(zhǎng)沙 410007；2.湖南旺旺醫(yī)院眼科，湖南 長(zhǎng)沙 421016；3.南華大學(xué)醫(yī)學(xué)院，湖南 衡陽(yáng) 421001）

益氣養(yǎng)陰活血利水法對(duì)兔視網(wǎng)膜脫離后視網(wǎng)膜組織中IL-1β表達(dá)的影響

彭清華1，劉 娉1，2，彭 俊3，姚小磊1

（1.湖南中醫(yī)藥大學(xué)第一附屬醫(yī)院中醫(yī)眼科學(xué)重點(diǎn)學(xué)科，湖南 長(zhǎng)沙 410007；2.湖南旺旺醫(yī)院眼科，湖南 長(zhǎng)沙 421016；3.南華大學(xué)醫(yī)學(xué)院，湖南 衡陽(yáng) 421001）

目的 研究益氣養(yǎng)陰活血利水之復(fù)明片對(duì)兔實(shí)驗(yàn)性視網(wǎng)膜脫離后視網(wǎng)膜組織中IL-1β表達(dá)的影響。方法 將72只兔隨機(jī)分為正常對(duì)照組（A組）、模型組（B組）、西藥組（C組）、復(fù)明片組（D組），每組18只。B、C、D組制作視網(wǎng)膜脫離模型。造模后第1天下午開(kāi)始給藥，A組與B組均予溫開(kāi)水灌胃，C組予西藥混合溶液灌胃，D組予復(fù)明片混懸液灌胃，5 mL/kg，1次/d。并于造模后7、14、21 d采用S-P免疫組化法檢測(cè)視網(wǎng)膜組織白介素-1β（Interleukin-1β,IL-1β）的表達(dá)。結(jié)果 IL-1β在模型組和西藥組的神經(jīng)上皮層陽(yáng)性表達(dá)，在復(fù)明片組的神經(jīng)上皮層弱陽(yáng)性表達(dá)，差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05，P＜0.01）。結(jié)論 益氣養(yǎng)陰活血利水之復(fù)明片能抑制視網(wǎng)膜組織中IL-1β的表達(dá)。

復(fù)明片；益氣養(yǎng)陰活血利水法；視網(wǎng)膜脫離模型；白介素-1β；兔；黃芪；生地；茯苓

視網(wǎng)膜脫離（retinal detachment,RD）是指視網(wǎng)膜色素上皮與神經(jīng)上皮之間的分離，是嚴(yán)重的致盲眼病，可導(dǎo)致眼球萎縮。在眾多致盲因素中占第5位，14歲以下兒童占第4位。隨著基礎(chǔ)研究和手術(shù)技巧的日臻完善，特別是玻璃體手術(shù)的開(kāi)展、激光在眼科的應(yīng)用和玻璃體后脫離研究的深入，RD術(shù)后的解剖復(fù)位率已明顯提高，復(fù)位率達(dá)90%以上，但術(shù)后視功能恢復(fù)仍不理想。前期研究發(fā)現(xiàn)，益氣養(yǎng)陰活血利水法能促進(jìn)視網(wǎng)膜脫離術(shù)后患者視網(wǎng)膜的復(fù)位，提高其術(shù)后視功能[1]。為了探討其作用機(jī)制，本實(shí)驗(yàn)觀察了益氣養(yǎng)陰活血利水之復(fù)明片對(duì)兔實(shí)驗(yàn)性視網(wǎng)膜脫離后視網(wǎng)膜組織中白介素-1β（Interleukin-1β,IL-1β）表達(dá)的影響，現(xiàn)將實(shí)驗(yàn)方法及結(jié)果報(bào)道如下。

1 材料與方法

1.1 材料

1.1.1 動(dòng)物 成年健康有色家兔72只，體質(zhì)量2.0～2.5 kg，雌雄各半，由湖南中醫(yī)藥大學(xué)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心提供。動(dòng)物合格證號(hào)：醫(yī)動(dòng)字第20-003號(hào)。隨機(jī)分為正常對(duì)照組（A 組）、模型組（B 組）、西藥對(duì)照組（C 組）、復(fù)明片組（D組），每組18只。

1.1.2 藥物 復(fù)明片：由黃芪、生地、茯苓、車(chē)前仁、地龍等益氣養(yǎng)陰活血利水中藥按現(xiàn)代制劑制備工藝制成，0.3 g/片，選用同一批號(hào)藥物，批號(hào)：040208。由湖南中醫(yī)藥大學(xué)第一附屬醫(yī)院藥劑科提供。使用時(shí)去掉糖衣，研成粉末，溫開(kāi)水混合，配制成濃度為10%的混懸液。三磷酸腺苷二鈉片（Adenosine Disodium Triphosphate Tablets,ATP）：20 mg/片，福建古田藥業(yè)有限公司生產(chǎn)，批號(hào)：050827-1；維生素B1（VitB1）：10 mg/片，湖北華中藥業(yè)有限公司生產(chǎn)，批號(hào)：20050801；維腦路通：60 mg/片，山西晉新藥業(yè)集團(tuán)有限公司生產(chǎn)，批號(hào)：050811。使用時(shí)研成粉末，溫開(kāi)水混合，配制成每升水含VitB1276 mg、ATP 1 102 mg、維腦路通734 mg的溶液。透明質(zhì)酸酶：上海第一生化藥研所生產(chǎn)，批號(hào)：20050901。

1.1.3 試劑 IL-1測(cè)試盒：武漢博士德生物工程有限公司生產(chǎn)；DAB顯色試劑盒：武漢博士德生物工程有限公司生產(chǎn)；S-P免疫組化染色超敏試劑盒：武漢博士德生物工程有限公司生產(chǎn)。

1.2 方法

1.2.1 兔眼視網(wǎng)膜脫離模型建立 B、C、D組制作視網(wǎng)膜脫離模型。模型的建立依照彭清華等提出的方法[2]，并加以改進(jìn)。術(shù)前3 d用0.25%氯霉素眼藥水和1%阿托品眼藥水交替滴眼，3次/d，手術(shù)當(dāng)日生理鹽水沖洗結(jié)膜囊，術(shù)前滴1%丁卡因眼藥水2～3次。造模時(shí)術(shù)眼（均取右眼）采用10%新福林和1%阿托品散瞳。3%戊巴比妥耳緣靜脈注射（1 mL/kg）麻醉后，將兔固定于手術(shù)臺(tái)上，慶大霉素+生理鹽水混合液沖洗結(jié)膜囊，常規(guī)消毒鋪巾、開(kāi)瞼。點(diǎn)丁卡因表面麻醉，下方筋膜下注入2%利多卡因0.2 mL形成泡狀隆起，沿角膜緣環(huán)行剪開(kāi)鼻側(cè)球結(jié)膜和筋膜，向后稍分離，暴露赤道部鞏膜，距角鞏緣后5 mm睫狀體平坦部用25GB-D針頭垂直眼球壁刺穿鞏膜，在眼底接觸鏡和顯微鏡直視下觀察到伸入玻璃體內(nèi)的針尖，將10 IU/mL透明質(zhì)酸酶溶液0.1 mL緩慢注入到玻璃體的中央偏后部，拔針后壓迫注射點(diǎn)3 min。15 min后再由原穿刺口將自制視網(wǎng)膜下腔注射針頭緩慢探進(jìn)，反復(fù)抽吸0.1 mL液化的玻璃體，在眼底接觸鏡和顯微鏡直視觀察下小心地把針尖引向后極部，避開(kāi)視網(wǎng)膜血管，在顳側(cè)距視乳頭1個(gè)視盤(pán)直徑（Papilla Disc,PD）放射狀視網(wǎng)膜處刺穿視網(wǎng)膜，進(jìn)入視網(wǎng)膜下腔，助手緩慢推動(dòng)注射器，注入液化的玻璃體液0.1 mL，可見(jiàn)視網(wǎng)膜被分離，脫離的視網(wǎng)膜呈大片灰白色隆起，范圍約1/2個(gè)PD大小，退出針頭，角膜緣處放出房水以降低眼內(nèi)壓。術(shù)后鋪平球結(jié)膜，結(jié)膜囊涂0.5%四環(huán)素眼膏，結(jié)膜下注射慶大霉素加地塞米松0.1 mL，肌內(nèi)注射慶大霉素0.8萬(wàn)u，以防感染，術(shù)后1周氯霉素眼藥水點(diǎn)眼，4次/d，并一直給1%阿托品眼液散瞳。

1.2.2 給藥方法 造模后第1天下午開(kāi)始給藥，A組（正常對(duì)照組）與B組（模型對(duì)照組）均予溫開(kāi)水灌胃，5 mL/kg，1 次/d；C 組（西藥對(duì)照組）予西藥（VitB1、ATP、維腦路通）混合溶液灌胃，5 mL/kg，1次/d；D組（復(fù)明片治療組）予復(fù)明片混懸液灌胃，5 mL/kg，1次/d。持續(xù)用藥21 d。

1.3 觀察指標(biāo)及檢測(cè)方法

實(shí)驗(yàn)開(kāi)始后于造模后的7、14、21 d，依實(shí)驗(yàn)安排相應(yīng)各小組取對(duì)應(yīng)兔6只眼，用3%戊巴比妥耳緣靜脈注射（1 mL/kg）麻醉兔，摘除眼球，生理鹽水沖洗干凈。在冰生理鹽水中，沿角鞏緣剪開(kāi)眼球達(dá)360°，棄角膜、晶體、玻璃體，保留視網(wǎng)膜連同脈絡(luò)膜鞏膜組織。取相應(yīng)各小組取對(duì)應(yīng)兔6只眼，將已經(jīng)4%多聚甲醛固定12 h的眼球壁修片，切取脫離部位視網(wǎng)膜（正常組切取相應(yīng)部位），再置于新的4%多聚甲醛固定液繼續(xù)固定，梯度酒精脫水，石蠟包埋，切片，1組切片經(jīng)常規(guī)HE染色，另3組切片采用S-P免疫組化法檢測(cè)視網(wǎng)膜組織白介素-1β（Interleukin-1β,IL-1β）的表達(dá)，DAB 顯色，蘇木素復(fù)染，陰性對(duì)照則省去滴加IL-1一抗的步驟。封片后鏡檢，顯微攝影。

視網(wǎng)膜組織中IL-1β測(cè)定采用深圳晶美生物技術(shù)有限公司提供的雙抗夾心法酶聯(lián)免疫吸附測(cè)定 (enzymelinked immunosor-bent assay，ELISA法)檢測(cè) IL-1β試劑盒檢測(cè)（具體操作嚴(yán)格按試劑盒說(shuō)明書(shū)進(jìn)行）。顯色后在450 nm處ELISA讀數(shù)儀測(cè)A值，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線，計(jì)算標(biāo)本中 IL-1β 濃度（pg/mL）。

1.4 統(tǒng)計(jì)學(xué)分析

采用SPSS for Windows 8.0統(tǒng)計(jì)軟件，行多元方差及相關(guān)分析。

2 結(jié)果

2.1 各組視網(wǎng)膜組織中IL-1表達(dá)情況

2.1.1 造模后7 d各組視網(wǎng)膜組織中IL-1表達(dá)情況 正常組：視網(wǎng)膜組織切片IL-1在神經(jīng)上皮層呈陰性表達(dá)；模型組：IL-1在神經(jīng)上皮層高表達(dá)，著染深，陽(yáng)性部位面積大；西藥組：IL-1在神經(jīng)上皮層高表達(dá)，陽(yáng)性部位面積較模型組小；復(fù)明片治療組：IL-1在神經(jīng)上皮層高表達(dá)，陽(yáng)性部位面積較對(duì)照組?。▓D1）。

圖1 各組兔視網(wǎng)膜組織中IL-1表達(dá)的HE 染色光鏡圖（×40）

2.1.2 造模后14 d各組視網(wǎng)膜組織中IL-1表達(dá)情況 正常組：視網(wǎng)膜組織切片IL-1在神經(jīng)上皮層呈陰性表達(dá)；模型組：IL-1在神經(jīng)上皮層強(qiáng)陽(yáng)性表達(dá)，陽(yáng)性部位面積較術(shù)后7 d時(shí)局限；西藥組：IL-1在神經(jīng)上皮層強(qiáng)陽(yáng)性表達(dá)，陽(yáng)性部位面積較模型組??；復(fù)明片治療組：IL-1在神經(jīng)上皮層陽(yáng)性表達(dá)，陽(yáng)性部位面積較對(duì)照組小，已復(fù)位部位低表達(dá)（圖2）。

圖2 各組兔視網(wǎng)膜組織中IL-1表達(dá)的HE 染色光鏡圖（×40）

2.1.3 造模后21 d各組視網(wǎng)膜組織中IL-1表達(dá)情況 正常組：視網(wǎng)膜組織切片IL-1在神經(jīng)上皮層呈陰性表達(dá)；模型組：IL-1在神經(jīng)上皮層陽(yáng)性表達(dá)，陽(yáng)性部位面積較術(shù)后14 d時(shí)局限，縮?。晃魉幗M：IL-1在神經(jīng)上皮層陽(yáng)性表達(dá)，陽(yáng)性部位面積較模型組小，已復(fù)位部位低表達(dá)；復(fù)明片組：IL-1在神經(jīng)上皮層弱陽(yáng)性表達(dá)，陽(yáng)性部位面積較對(duì)照組小，已復(fù)位部位低表達(dá)（圖 3）。

圖3 各組兔視網(wǎng)膜組織中IL-1表達(dá)的HE 染色光鏡圖（×40）

2.2 造模后各組視網(wǎng)膜組織中IL-1β定量檢測(cè)

造模后7 d，模型組、西藥組、復(fù)明片組視網(wǎng)膜組織中IL-1β濃度均明顯高于正常組，差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.01）；造模后14 d，模型組、西藥組、復(fù)明片組視網(wǎng)膜組織中IL-1β濃度較7 d時(shí)下降，但仍高于正常組，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.01）；造模后 21 d，模型組、西藥組、復(fù)明片組視網(wǎng)膜組織中IL-1β濃度較14 d時(shí)繼續(xù)下降，但仍高于正常組，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05或0.01）。模型組、西藥組、復(fù)明片組3組間相比，造模后7、14、21 d，差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05或0.01）。說(shuō)明復(fù)明片組能下調(diào)兔視網(wǎng)膜組織中IL-1β濃度，結(jié)果見(jiàn)表1。

表1 各組視網(wǎng)膜組織中IL-1β濃度比較（±s，pg/mL）

表1 各組視網(wǎng)膜組織中IL-1β濃度比較（±s，pg/mL）

注：與正常組比較△P＜0.05，△△P＜0.01；與復(fù)明片組比較 *P＜0.05，**P＜0.01。

分組 眼數(shù)（n） 7 d 14 d 21 d A 正常組 6 30.2±11.8 30.2±11.8 30.2±11.8 B 模型組 6 152.4±23.3△△** 121.5±20.2△△** 75.1±13.6△△**C 西藥組 6 115.7±17.6△△** 82.3±15.4△△** 52.4±14.1△△*D 復(fù)明片組 6 78.1±14.8△△ 55.8±12.3△△ 38.3±10.9△

3 討論

3.1 視網(wǎng)膜脫離動(dòng)物模型的評(píng)價(jià)

視網(wǎng)膜脫離是指視網(wǎng)膜神經(jīng)上皮層和RPE細(xì)胞層的分離，是視網(wǎng)膜和玻璃體的變性相互作用影響的結(jié)果，故視網(wǎng)膜裂孔與玻璃體液化、脫離和對(duì)視網(wǎng)膜的病理性粘連是RD的3個(gè)必備條件。玻璃體呈凝膠狀態(tài)占眼球3/4容積，主要由直徑約8～16 μm呈隨機(jī)交叉形松散網(wǎng)狀結(jié)構(gòu)的Ⅱ型膠原纖維作為支架和結(jié)合水分填充其中的透明質(zhì)酸（Hyaluronic Acid,HA）組成。HA是一種黏多糖物質(zhì)，能維持玻璃體的黏滯狀態(tài)，其水化作用和帶負(fù)電荷的特性使膠原纖維呈雙螺旋排列，使凝膠和液體聚合在一起。玻璃體視網(wǎng)膜界面（Vitreoretinal Interface,VRI）由玻璃體后皮質(zhì)（Posterior Vitreous Cortex,PVC）與視網(wǎng)膜內(nèi)界膜（Internal Limiting Membrane,ILM）組成。PVC厚約100 μm，主要由Ⅱ型膠原纖維構(gòu)成，視盤(pán)區(qū)無(wú)PVC，黃斑區(qū)PVC較細(xì)薄。ILM為視網(wǎng)膜Müller細(xì)胞的基底膜，厚約1～2 μm，主要由Ⅳ型膠原與糖蛋白構(gòu)成。正常玻璃體通過(guò)膠原纖維嵌入ILM，使兩者緊密結(jié)合。視網(wǎng)膜赤道部和后極部PVC膠原纖維與ILM平行，而在玻璃體基底部PVC膠原纖維垂直插入ILM，故玻璃體視網(wǎng)膜粘連最為緊密的部分在玻璃體基底部、視盤(pán)周?chē)?、大血管附近及黃斑部。VRI的黏附作用主要由糖蛋白包括纖維連接蛋白（Fibronection,FN）、層粘連蛋白（Laminin,LN）及其他糖耦合物介導(dǎo)。其中FN主要與HA和Ⅱ型膠原相關(guān)聯(lián)，LN則與Ⅳ型膠原相關(guān)。隨著生理或病理?xiàng)l件改變，如年齡增長(zhǎng)、高度近視、增生性糖尿病視網(wǎng)膜病變（proliferative diabetic retinopathy,PDR）、手術(shù)、創(chuàng)傷、玻璃體炎癥、年齡相關(guān)性黃斑變性（Age-related Macular Degeneration,AMD）等，可促使膠原纖維和HA變性，HA解析出其中的水分，即凝膠液化形成液化腔，進(jìn)而多個(gè)液化腔不斷融合，達(dá)到黃斑前玻璃體后界膜時(shí)，后界膜破裂，液化腔內(nèi)液體涌入視網(wǎng)膜玻璃體間隙使之分離，即產(chǎn)生玻璃體后脫離（Posterior Vitreous Detachment,PVD）。一般來(lái)講PVD的形成取決于下述3個(gè)過(guò)程：玻璃體液化、玻璃體凝縮和VRI粘連的減弱。玻璃體液化、脫離既減弱了對(duì)視網(wǎng)膜神經(jīng)上皮層貼附于色素上皮層的支撐力，又使液化了的玻璃體自裂孔灌注于神經(jīng)上皮層下，促進(jìn)RD的形成與維持[3]。如果能形成完全性PVD則源于玻璃體對(duì)視網(wǎng)膜的牽引減小，形成RD的機(jī)會(huì)則減小，而如前文中所述，VRI粘連最為緊密的部分在玻璃體基底部、視盤(pán)周?chē)?、大血管附近及黃斑部，一般這些部位的粘連松解并不完全，形成牽拉力則促進(jìn)RD的發(fā)生。

已經(jīng)有多種藥物和酶類(lèi)制劑被用于實(shí)驗(yàn)中以期能造成完全性PVD,其中包括膠原酶、硫酸軟骨素酶、纖溶酶和透明質(zhì)酸酶等，它們或因?yàn)樾Ч煌耆蛟斐梢暰W(wǎng)膜損害而尚未應(yīng)用于臨床[4-5]。孟自軍等[6]認(rèn)為基質(zhì)金屬蛋白酶-3（Matrix Metalloproteinase-3,MMP-3）能特異性水解FN、LN及蛋白聚糖，同時(shí)對(duì)Ⅱ、Ⅳ、Ⅸ型膠原有較弱的降解作用，并通過(guò)實(shí)驗(yàn)研究發(fā)現(xiàn)10 ng劑量能在短時(shí)間內(nèi)安全有效地造成PVD，且有較弱的促玻璃體液化作用。硫酸軟骨素（Chondroitin Sulfate）酶（CA）亦能在較短的時(shí)間內(nèi)液化玻璃體，并對(duì)VRI粘連有一定的破壞作用，誘導(dǎo)PVD的產(chǎn)生[7]。眼內(nèi)存在纖溶酶原時(shí)，注入組織型纖溶酶原激活劑（Tissue Plasminogen Activator,T-PA）可以激活眼內(nèi)的纖溶酶原轉(zhuǎn)化成纖溶酶以分解FN和LN，并激活膠原酶與FN的降解產(chǎn)物一起趨化多形核白細(xì)胞，使其釋放彈性蛋白酶，分解Ⅳ型膠原[8]；此外，t-PA還可水解細(xì)胞外基質(zhì)（Extra Cellular Matrix,ECM）以促成玻璃體液化[9]。豬眼注入t-PA50 μg，在破壞血-眼屏障后可誘導(dǎo)PVD的發(fā)生。玻璃體腔內(nèi)注入1 U纖溶酶后可降解FN、LN，且對(duì)視網(wǎng)膜結(jié)構(gòu)和功能沒(méi)有任何不良影響，第1天開(kāi)始即有PVD發(fā)生，第3天時(shí)效果更佳，并隨注入的增加，效果增強(qiáng)[10]。纖溶酶聯(lián)合透明質(zhì)酸酶或SF6則較單獨(dú)采用纖溶酶更能迅速有效的誘發(fā)完全性PVD，且對(duì)視網(wǎng)膜無(wú)明顯的毒性作用。分散酶亦能誘導(dǎo)出PVD，但0.025 U及以上劑量能導(dǎo)致晶狀體和視網(wǎng)膜損傷。透明質(zhì)酸酶聯(lián)合C2F6玻璃體腔注藥誘導(dǎo)完全性PVD的發(fā)生，亦無(wú)眼內(nèi)毒性。10 IU/0.1 mL和20 IU/0.1 mL的透明質(zhì)酸酶玻璃體腔注射后第5周亦可形成PVD，并且安全有效[11]。尿激酶1 000 U聯(lián)合透明質(zhì)酸酶20 U兔眼玻璃體腔內(nèi)注射亦能誘導(dǎo)完全性PVD，且無(wú)眼內(nèi)毒性[12]。Dispase是一種從多粘芽孢桿菌提取的中性蛋白酶，對(duì)于FN和IV型膠原有特異性溶解作用，從而松解VRI粘連安全、有效地誘導(dǎo)出PVD，但大劑量時(shí)有一定毒性作用[13]。

視網(wǎng)膜脫離動(dòng)物模型可以建立在猴、貓、兔、狗等動(dòng)物上，就是將RPE細(xì)胞層與神經(jīng)上皮層分離。其中Labrador Retrievers模型是一種軸性近視、白內(nèi)障、玻璃體異常和視網(wǎng)膜裂孔為特征的遺傳性疾病的狗，有人認(rèn)為其與人自發(fā)性的視網(wǎng)膜巨大裂孔相似。人為RD造模方法亦多樣,依注入視網(wǎng)膜下的物質(zhì)種類(lèi)不同有生理鹽水、血液、透明質(zhì)酸鈉、液化玻璃體等。70年代曾使用透明質(zhì)酸酶液化玻璃體后，反復(fù)抽吸接近視網(wǎng)膜的玻璃體造成裂孔和RD。牟國(guó)營(yíng)等[14]采用透明質(zhì)酸酶3 000 U注入兔眼視網(wǎng)膜表面，抽取局部玻璃體0.2 mL再緩慢注入，反復(fù)3～5次，最后抽取0.3 mL快速?zèng)_擊視網(wǎng)膜，借助高速液流沖破視網(wǎng)膜形成視網(wǎng)膜裂孔。孫曉東[15]則提出在兔眼視網(wǎng)膜下直接注射透明質(zhì)酸鈉的方法建立動(dòng)物模型。劉鐵城等[16]取貓眼行晶體囊外摘除、玻璃體切除術(shù)，3周后持尖端直徑約50～70 μm的玻璃微穿刺針，刺入神經(jīng)視網(wǎng)膜和RPE細(xì)胞層之間，將Healon緩慢注入到視網(wǎng)膜下腔，造成局部RD。張自峰等[17]通過(guò)剪除兔眼部分玻璃體，在顯微鏡和接觸鏡直視下將連有1 mL注射器的玻璃微管，自扁平部對(duì)兔視網(wǎng)膜下注血，造成出血性RD。王建洲等[18]則采用剪除部分玻璃體用間接檢眼鏡簡(jiǎn)捷方法，結(jié)合頂壓定位裂孔，將連有1 mL注射器的玻璃微管，自扁平部對(duì)兔視網(wǎng)膜下注生理鹽水0.5 mL，并盡量抽出裂孔附近的部分玻璃體，人為的造成玻璃體液化腔的方法造模。亦可以將這些方法分為內(nèi)路法和外路法，如彭清華等RD復(fù)位動(dòng)物模型的建立中所述。

本實(shí)驗(yàn)參照彭清華等的造模方法，并加以改進(jìn)，用透明質(zhì)酸酶液化玻璃并取少許注入視網(wǎng)膜下，并通過(guò)液化的玻璃體在不行晶狀體及玻璃體切除的情況下延長(zhǎng)RD時(shí)間以觀察RD后的增殖情況，同時(shí)玻璃體液化更接近臨床實(shí)際。

3.2 復(fù)明片對(duì)視網(wǎng)膜組織中白介素-1β（IL-1β）的影響

IL-1β是重要的免疫和炎性反應(yīng)調(diào)節(jié)物，也是炎性致病機(jī)制的決定因子，是最具多效性的細(xì)胞因子之一，且?guī)缀鯇?duì)所有的體內(nèi)細(xì)胞發(fā)生作用，其少量的受體與配基的結(jié)合足夠誘發(fā)一個(gè)完全的反應(yīng)[19]。馬志中等研究表明IL-1β表達(dá)的高峰出現(xiàn)在RD后第7天，然后維持在較低的表達(dá)狀態(tài)，IL-1β抗體可以阻止PCNA的表達(dá)，抑制RD后的增殖反應(yīng)[20]。本實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示：與模型組、西藥組對(duì)比，造模后7、14、21 d，復(fù)明片組IL-1β在神經(jīng)上皮層陽(yáng)性表達(dá)部位面積較??；視網(wǎng)膜組織中IL-1β濃度定量檢測(cè)亦顯示，造模后7、14、21 d，復(fù)明片組視網(wǎng)膜組織中IL-1β濃度均明顯低于模型組、西藥組，差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.01）。說(shuō)明益氣養(yǎng)陰活血利水之復(fù)明片組能下調(diào)視網(wǎng)膜脫離后視網(wǎng)膜組織中IL-1β濃度，抑制視網(wǎng)膜脫離后視網(wǎng)膜組織中IL-1β表達(dá)，進(jìn)而抑制細(xì)胞增殖，阻止視網(wǎng)膜脫離后PVR的形成和發(fā)展，促進(jìn)視功能的恢復(fù)。

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Effects of Yiqi Huoxue Yangyin Lishui therapy on expression of IL-1β in retinal tissue after retinal detachment in rabbits

PENG Qing-hua,LIU Ping,PENG Jun,YAO Xiao-lei
（Key Discipline of TCM Ophthalmology，F(xiàn)irst Affiliated Hospital,TCM University of Hunan，Changsha,Hunan 410007,China）

ObjectiveTo investigate the effects of Fuming tablets(FMT)with the functions of qi-benefitting,yin-nourishing,blood-invigorating and diuresis on the expression of IL-1β in the retinal tissue after detachment of the retina of rabbits.Methods72 rabbits were divided randomly into normal control group(group A),model group(group B),western medicine group(group C)and FMT group(group D),18 rabbits per group.In group B,C and D the rabbits were made the retinal detachment models and then given medicine after modeling 1 day.In group A and B,they were administrated with warm water,in group C with western medicine solution,and in group D with FMT suspension,5 mL/kg,once a day.Then the expression ofInterleuk in-1β（IL-1β）was detected with s-p method after modeling 7th day,14th day and 21st day.ResultsThere were the positive expressions of IL-1β in the neurosensory in model group and medicine control group and weak positive in FMT group.Conclusions FMT can decrease the expression of IL-1β in the retinal tissue.

Fuming tablets；Yiqi Huoxue Yangyin Lishui therapy；retinal detachment model；interleukin-1β（IL-1β）;rabbits;Radix astragal;Rhizome of rehmannia;Poria cocos

R285.5

A

10.3969/j.issn.1674－070X.2010.11.006.018.05

2010－08－01

湖南省自然科學(xué)基金資助項(xiàng)目（06JJ50056）；湖南省教育廳科研基金資助項(xiàng)目（10A094，98B078，06A052）；國(guó)家中醫(yī)藥管理局中醫(yī)眼科學(xué)重點(diǎn)學(xué)科建設(shè)項(xiàng)目；湖南省中醫(yī)五官科學(xué)重點(diǎn)學(xué)科建設(shè)項(xiàng)目。

彭清華（1964-），男，湖南寧鄉(xiāng)人，醫(yī)學(xué)博士，教授、主任醫(yī)師、博士生導(dǎo)師，主要從事中西醫(yī)結(jié)合防治眼底病、青光眼和眼表疾病的研究。E-mail：pqhz_520@163.com。

（本文編輯 彭芝配）