凹凸棒石對中藥水煎液中丹參酮Ⅰ、丹參酮ⅡA的吸附作用考察

李曉強，李 平，魏 琴，張德莉

（蘭州大學 第二醫(yī)院，甘肅 蘭州 730030）

丹參酮Ⅰ、丹參酮ⅡA是中藥丹參中的主要有效成分，為了最大限度去除在水煎提取過程中的大分子無效成分，保留有效成分，提高中藥制劑質(zhì)量，本文以丹參藥材、復方丹參滴丸水煎液中有效成分丹參酮Ⅰ、丹參酮ⅡA的含量和煎出總固體物量作為評價指標，采用不同比例的普通凹凸棒石和酸化凹凸棒石作為吸附澄清劑，分別對藥材丹參及復方丹參滴丸水煎提取液進行了吸附澄清處理，考察了普通凹凸棒石和酸化凹凸棒石吸附澄清效果。

1 材 料

Agilent 1100高效液相色譜儀（包括：G1312A二元泵、G1315B二極管陣列檢測器、G1316A色譜柱恒溫箱、G2170AA色譜工作站和7725進樣閥），美國安捷倫公司；Sartorius NE215S電子天平，德國賽多利斯儀器系統(tǒng)有限公司；丹參酮Ⅰ對照品、丹參酮ⅡA對照品，中國藥品生物制品檢定所；復方丹參滴丸水煎提取液，按照2005版中國藥典自制；處方中所用藥材均符合中國藥典2005年版一部標準；凹凸棒（120目），甘肅省地質(zhì)勘探局第三地質(zhì)礦產(chǎn)勘查院；水為純化水；其余試劑均為色譜純。

酸化凹凸棒：普通凹凸棒過7號篩，使用前加水離心處理3次，棄去上層懸浮物質(zhì)和下層沉淀雜質(zhì)，收集中間部分物質(zhì)，然后加37%鹽酸浸泡72 h，再用純化水洗至pH 6～7，于105℃干燥8 h，研細過7號篩，即為酸化凹凸棒。

2 方法與結(jié)果

2.1 丹參藥材水提取物的制備

稱取丹參20 g，分別加入10倍量與8倍量的水煎煮提取 2次，第 1次1.5 h、第 2次 1.0 h，濾過，合并濾液，搖勻。精密量取濾液 20 mL，共 10份，分別置于 50 mL燒杯中（剩余母液蒸干備用），按 0，0.5%，1.0%，1.5%，2.0%的濃度分別加入普通凹凸棒石和酸化凹凸棒石，以相同速度攪拌1 h，在4℃靜置48 h，觀察澄清度，抽濾。濾液減壓濃縮，蒸干，于60℃烘至恒重。按中國藥典2005年版附錄ⅩA浸出物測定法計算總固體物量，結(jié)果見表1。

2.2 復方丹參滴丸水提取物制備[1]

稱取丹參90 g，三七28.2 g。分別加入10倍量與8倍量的水進行煎煮提取2次，第1次1.5 h、第2次1.0h，濾過，合并濾液，搖勻。精密量取50 mL，共10份，分別置100 mL燒杯中，在相同攪拌速度下，分別加入普通凹凸棒和酸化凹凸棒，使其含量分別達到0，0.5%，1.0%，1.5%，2.0%。4 ℃靜置沉淀 48 h，觀察澄清度，抽濾。濾液減壓濃縮，蒸干，于60℃烘至恒重。按中國藥典2005年版附錄ⅩA浸出物測定法計算總固體物量，結(jié)果見表1。

表1 總固體物量測定結(jié)果（±s，n=3）Tab.1 The results of solid component（±s，n=3）

表1 總固體物量測定結(jié)果（±s，n=3）Tab.1 The results of solid component（±s，n=3）

與普通凹凸棒組比較：1P＜0.05；與同組0%酸化凹凸棒比較：2P＜0.051P ＜0.05 vs common attapulgite group；2P＜0.05 vs same 0%acidified attapulgite group

編號 凹凸棒含量/%丹參藥材/g普通凹凸棒 酸化凹凸棒復方丹參滴丸/g普通凹凸棒 酸化凹凸棒1 0 0.205 17±0.000 34 0.206 83±0.000 431 0.960 68±0.000 32 0.962 77±0.000 161 2 0.5 0.204 74±0.000 21 0.201 66±0.000 351，2 0.960 25±0.000 23 0.942 37±0.000 121，2 3 1.0 0.204 64±0.000 16 0.199 26±0.000 341，2 0.961 89±0.000 26 0.932 18±0.000 431，2 4 1.5 0.202 23±0.000 32 0.190 56±0.000 291，2 0.946 74±0.000 17 0.902 94±0.000 261，2 5 2.0 0.199 90±0.000 43 0.186 85±0.000 421，2 0.951 53±0.000 34 0.880 51±0.000 401，2

丹參藥材水煎液及復方丹參滴丸水煎液的酸化凹凸棒石組總固體物量明顯比其普通凹凸棒石組減少；不同比例普通凹凸棒石處理丹參藥材水煎液及復方丹參滴丸水煎液，對其浸出物總固體量無顯著性影響；用不同比例酸化凹凸棒石處理丹參藥材水煎液及復方丹參滴丸水煎液，對其浸出物總固體量有顯著性影響，隨著加入酸化凹凸棒石量的增加，浸出物總固體量相應減少。

2.3 含量測定

2.3.1 色譜條件[2-3]色譜柱：ODS-80 Ts（4.6 mm×150mm，5μ m）；流動相：甲醇-水（75∶25）；流速：0.8 mL/min ；檢測波長 ：270 nm ；柱溫 ：30 ℃；進樣量 ：20 μ L 。

2.3.2 溶液的制備

2.3.2.1 對照品溶液 精密稱取丹參酮Ⅰ對照品0.42 mg、丹參酮ⅡA對照品 0.22 mg，置同一 10 mL量瓶中，用流動相溶解并稀釋至刻度，搖勻，即得丹參酮Ⅰ（42 μ g/mL）、丹參酮 ⅡA（22 μ g/mL）對照品溶液。

2.3.2.2 丹參藥材供試品溶液 精密稱取2.1項下的10份供試品各約0.016 g，分別置于10mL量瓶中，加入流動相溶解，超聲處理30 min，放冷，用流動相稀釋至刻度，搖勻，用 0.22 μ m微孔濾膜濾過，取續(xù)濾液作為丹參藥材供試品溶液。

2.3.2.3 復方丹參滴丸供試品溶液 精密稱取2.2項下的10份供試品各約0.08 g，分別置于10 mL量瓶中，加入流動相溶解，超聲處理30 min，放冷，用流動相稀釋至刻度，搖勻，用 0.22 μ m微孔濾膜濾過，取續(xù)濾液作為復方丹參滴丸供試品溶液。

2.3.2.4 陰性樣品溶液 稱取三七藥材20 g，按復方丹參滴丸供試品溶液的制備方法依法制得復方丹參滴丸陰性樣品溶液。

2.3.3 專屬性試驗 精密量取對照品溶液、丹參藥材及復方丹參滴丸供試品溶液、陰性樣品溶液各20 μ L，進樣，記錄色譜圖，結(jié)果見圖1。由圖 1可知供試品色譜中，在與對照品色譜相應的位置上，有相同保留時間的色譜峰，而陰性樣品色譜在此保留時間無干擾。

2.3.4 線性范圍 精密量取對照品溶液0.1，0.2，0.3 ，0.4，0.5，0.6，0.8，1.0，1.2 mL 分別置于 5 mL量瓶中，用流動相稀釋至刻度，搖勻，即得每1 mL含丹參酮 Ⅰ0.84，1.68，2.52，3.36，4.20，5.04，6.72，8.40，10.08 μ g，丹參酮 ⅡA0.44，0.88，1.32，1.76，2.20，2.64，3.52，4.40，5.28 μ g 的系列混合溶液。按2.3.1項下條件測定峰面積，以對照品濃度X為橫坐標、峰面積Y為縱坐標，進行線性回歸，結(jié)果見表2。

圖1 高效液相色譜圖Fig.1 HPLC chromatograms

表2 線性關(guān)系考察結(jié)果Tab.2 The results of linear relation

2.3.5 穩(wěn)定性與精密度試驗 精密量取對照品溶液 20 μ L 分別于 0，2，4，6，8，10 h 進樣測定 ，結(jié)果丹參酮Ⅰ峰面積的RSD 為0.49%（n=6），丹參酮ⅡA峰面積的RSD為1.32%（n=6），表明對照品溶液在10 h內(nèi)穩(wěn)定性良好。取同一對照品溶液重復進樣6次，測其峰面積，結(jié)果丹參酮Ⅰ峰面積的 RSD為1.39%（n=6），丹參酮ⅡA峰面積的 RSD 為0.62%（n=6），表明本法精密度良好。

2.3.6 重復性試驗 取同一批供試品6份，按復方丹參滴丸供試品溶液制備方法制備，進樣測定，結(jié)果丹參酮Ⅰ峰面積的 RSD 為1.55%（n=6），丹參酮ⅡA峰面積的 RSD為1.59%（n=6）。

2.3.7 加樣回收率試驗 精密稱取已知含量的同一批復方丹參滴丸供試品0.1g至10 mL量瓶中，共6份，分別按高、中、低量加入丹參酮Ⅰ、丹參酮ⅡA的混合對照品溶液，充分混勻，加入流動相溶解，其余操作同復方丹參滴丸供試品溶液的制備方法，進樣測定，計算丹參酮Ⅰ、丹參酮ⅡA的加樣回收率，結(jié)果見表3。

表3 丹參酮Ⅰ和丹參酮ⅡA加樣回收率試驗結(jié)果Tab.3 The results of added recovery of TanshinoneⅠand TanshinoneⅡA

2.3.8 含量測定 精密量取丹參藥材供試品溶液及復方丹參滴丸供試品溶液各20 μ L，進樣測定，計算丹參酮Ⅰ、丹參酮ⅡA的含量。結(jié)果見表4～5。

對于丹參藥材水煎液和復方丹參滴丸水煎液，酸化凹凸棒石組和普通凹凸棒石組相比，其丹參酮Ⅰ含量無顯著性差異；用不同比例的普通凹凸棒石和酸化凹凸棒石處理丹參藥材水煎液和復方丹參滴丸水煎液，對丹參酮Ⅰ含量均有一定影響。

對于丹參藥材水煎液和復方丹參滴丸水煎液，酸化凹凸棒石組和普通凹凸棒石組相比，其丹參酮ⅡA含量無顯著性差異；用不同比例的普通凹凸棒石和酸化凹凸棒石處理丹參藥材水煎液和復方丹參滴丸水煎液，對丹參酮ⅡA含量均有一定影響。

3 討 論

中藥水提液中常含有淀粉、蛋白質(zhì)、黏液質(zhì)、色素、樹膠、果膠等雜質(zhì)，使制成的制劑服用量較大，并且影響液體制劑的澄清度[4-5]。因此，在中藥制劑的生產(chǎn)過程中，經(jīng)常需要對藥物的提取液進行精制。目前廣泛使用的精制方法是水提醇沉精制法，它可以有效地除去提取液中的雜質(zhì)。但水提醇沉精制法存在不少缺陷，如耗用大量乙醇、易燃、易爆等；且在去除雜質(zhì)的同時，可造成生物堿、苷類、有機酸等有效成分的不同程度的流失[6]。凹凸棒石作為一種天然的澄清劑，資源豐富，價格低廉，無毒無污染，沉淀效果肯定。若能將其用于中藥提取液的精制工藝中，可減少成本，縮短生產(chǎn)周期，且易于操作[7-9]。

表4 丹參酮Ⅰ的含量測定及澄清度結(jié)果（±s，n=3）Tab.4 The results of content of TanshinoneⅠ and clarification（±s，n=3）

表4 丹參酮Ⅰ的含量測定及澄清度結(jié)果（±s，n=3）Tab.4 The results of content of TanshinoneⅠ and clarification（±s，n=3）

-.溶液混濁；+.溶液較澄清；++.溶液澄清-.Solution not clear；+.Solution relatively clear；++.Solution clear

編號 凹凸棒含量/%丹參藥材/（μ g/g）普通凹凸棒 澄清度 酸化凹凸棒 澄清度復方丹參滴丸/（μ g/g）普通凹凸棒 澄清度 酸化凹凸棒 澄清度1 0.0 234.36±0.31 - 230.85±0.26 - 100.99±0.40 - 105.78±0.26 -2 0.5 230.59±0.38 - 228.05±0.48 - 97.08±1.02 - 97.73±0.76 -3 1.0 227.66±0.43 - 221.49±0.21 - 97.31±0.63 - 95.53±0.42 -4 1.5 229.90±0.56 + 220.91±0.42 + 96.59±0.53 + 96.98±0.58 +5 2.0 224.05±0.92 + 216.09±0.57 ++ 96.31±0.72 + 90.25±0.92 ++

表5 丹參酮ⅡA的含量測定及澄清度結(jié)果（±s，n=3）Tab.5 The results of content of Tanshinone ⅡAand clarification（±s，n=3）

表5 丹參酮ⅡA的含量測定及澄清度結(jié)果（±s，n=3）Tab.5 The results of content of Tanshinone ⅡAand clarification（±s，n=3）

-.溶液混濁；+.溶液較澄清；++.溶液澄清-.Solution not clear；+.Solution relatively clear；++.Solution clear

編號 凹凸棒含量/%丹參藥材/（μ g/g）普通凹凸棒 澄清度 酸化凹凸棒 澄清度復方丹參滴丸/（μ g/g）普通凹凸棒 澄清度 酸化凹凸棒 澄清度1 0.0 105.31±0.38 - 105.34±0.43 - 35.71±0.23 - 35.16±0.69 -2 0.5 104.32±0.51 - 102.04±0.25 - 35.54±0.78 - 34.73±0.37 -3 1.0 105.04±0.27 + 100.45±0.21 + 34.73±0.58 + 34.91±0.14 +4 1.5 103.38±0.61 + 99.21±0.53 + 34.23±0.11 + 33.98±0.63 +5 2.0 103.80±0.47 + 97.61±0.96 ++ 34.05±0.83 + 31.13±0.29 ++

由實驗結(jié)果可知，以水煎液總固體物的含量作為評價指標，當?shù)⑺幉乃逡杭昂蛷头降⒌瓮杷逡杭尤氩煌壤钠胀ò纪拱羰瘯r，得到的總固體物含量與自然靜置沉淀法處理得到的總固體物含量無明顯差別，與加入的普通凹凸棒石量也無明顯相關(guān)性，水煎液澄清度略有改善，表明其吸附力較低；但當加入不同比例的酸化凹凸棒石時，總固體物含量明顯減少，且與加入的酸化凹凸棒石量有明顯相關(guān)性，水煎液澄清度也明顯改善，提示對無效成分的吸附去除較為明顯。以丹參酮Ⅰ、丹參酮ⅡA的含量作為評價指標，當?shù)⑺幉乃逡杭皬头降⒌瓮杷逡杭尤氩煌壤钠胀ò纪拱羰c酸化凹凸棒石后，測得丹參酮Ⅰ、丹參酮ⅡA的含量略有減少，且酸化凹凸棒石組與普通凹凸棒石組相比無顯著性差異。因而，酸化凹凸棒石可用作含有丹參酮Ⅰ、丹參酮ⅡA的中藥在提取精制過程中的吸附澄清劑。

凹凸棒石是一種天然水合鎂鋁硅酸鹽類非金屬礦土，內(nèi)部多孔道，具有良好的吸附性能。凹凸棒石經(jīng)酸浸泡后得到酸化凹凸棒石，此時凹凸棒石內(nèi)部八面體結(jié)構(gòu)部分溶解，使得孔道數(shù)目增加，比表面積增大；同時凹凸棒石的孔道中常含有碳酸鹽等雜質(zhì)，酸化處理可除去此類雜質(zhì)，使孔道疏通，增大比表面積；還有凹凸棒石的陽離子可進行離子交換，酸化使半徑較小的H+置換出部分半徑較大的K+、Na+、Ca2+和Mg2+等離子，增大孔道容積，比表面積增大。以上三方面因素使得酸化凹凸棒石的比表面積比普通凹凸棒石的比表面積大的多，因而吸附性能得到提高，這也從本實驗結(jié)果中得以證實。

因而，通過研究對凹凸棒石進行一些表面形態(tài)和結(jié)構(gòu)修飾的改性處理，賦予其特定理化性能，使其具有選擇性的吸附功能，具備環(huán)境友好的實際應用條件，在中藥制劑生產(chǎn)中獲得對無效成分的更為高效去除和對有效成分提取精制效果，將是凹凸棒黏土石應用研究的重點所在[10]。

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