胃癌和癌旁組織血管擴(kuò)張刺激磷蛋白表達(dá)差異的研究

彭小春 張京偉 魏 蕾

(長江大學(xué)醫(yī)學(xué)院，湖北 荊州 434023)(武漢大學(xué)中南醫(yī)院腫瘤外科，湖北 武漢 430071)(武漢大學(xué)基礎(chǔ)醫(yī)學(xué)院病理生理學(xué)教研室，湖北 武漢 430071)

胃癌和癌旁組織血管擴(kuò)張刺激磷蛋白表達(dá)差異的研究

彭小春 張京偉 魏 蕾

(長江大學(xué)醫(yī)學(xué)院，湖北 荊州 434023)(武漢大學(xué)中南醫(yī)院腫瘤外科，湖北 武漢 430071)(武漢大學(xué)基礎(chǔ)醫(yī)學(xué)院病理生理學(xué)教研室，湖北 武漢 430071)

目的：觀察血管擴(kuò)張刺激磷蛋白(Vasodilator-stimulated Phosphoprotein，VASP)在胃癌組織和癌旁組織中表達(dá)的差異，探討其在胃癌形成和轉(zhuǎn)移中的作用。方法：收集胃癌組織42例和癌旁胃粘膜組織16例。癌組織按病理學(xué)和組織學(xué)分期分度。用免疫組化方法觀察其VASP表達(dá)和分布。結(jié)果：癌旁正常胃粘膜組織中，胃粘膜上皮細(xì)胞及腺上皮細(xì)胞未見VASP陽性表達(dá)，而巨噬細(xì)胞和淋巴細(xì)胞有很強(qiáng)的VASP陽性表達(dá)。VASP在癌組織(粘膜上皮細(xì)胞、腺上皮細(xì)胞、血管內(nèi)皮細(xì)胞、血管平滑肌細(xì)胞)有很強(qiáng)的表達(dá)，高于癌旁正常胃粘膜的表達(dá)；VASP表達(dá)在高、中、低分化腺癌中平均免疫印記指數(shù)分別為0.757、1.152、1.457，高分化腺癌組與中、低分化腺癌組間差別均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(Plt;0.05)；VASP表達(dá)在TNM Ⅰ、Ⅱ期組和TNM Ⅲ、Ⅳ期組中平均免疫印記指數(shù)分別為0.685和1.476，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義 (Plt;0.01)；VASP在無淋巴轉(zhuǎn)移和有淋巴轉(zhuǎn)移組中平均免疫印記指數(shù)為1.753、0.673，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(Plt;0.01)。結(jié)論：VASP在正常的胃組織和胃癌中分布和表達(dá)差異表明VASP參與了正常的胃粘膜上皮細(xì)胞向癌細(xì)胞分化的過程；VASP表達(dá)增加與其病理分級(jí)是平行的，這也說明VASP可能是調(diào)控胃癌侵襲特性的重要分子。

血管擴(kuò)張刺激磷蛋白；胃腫瘤；免疫組化

胃癌是消化道最常見的惡性腫瘤，來源于胃粘膜上皮，占胃惡性腫瘤的95%，是目前世界范圍內(nèi)因?yàn)槟[瘤導(dǎo)致死亡的主要原因之一[1，2]，其侵襲和轉(zhuǎn)移是影響患者預(yù)后的主要因素。臨床上約有60%的腫瘤病人雖然經(jīng)過有效的治療，但最終死于侵襲和轉(zhuǎn)移。眾多研究發(fā)現(xiàn)，胃癌的侵襲和轉(zhuǎn)移是一個(gè)多步驟、多階段的復(fù)雜過程,并涉及到多種因素，但腫瘤細(xì)胞的自身運(yùn)動(dòng)能力是腫瘤侵襲與轉(zhuǎn)移的關(guān)鍵環(huán)節(jié)。目前研究提示細(xì)胞骨架相關(guān)蛋白在調(diào)節(jié)細(xì)胞運(yùn)動(dòng)中發(fā)揮著極其重要的作用，如Arp2/3(actin related protein 2/3)， WASP(Wiskott-Aldrich syndrome protein)， Profilin等等。同時(shí)研究也發(fā)現(xiàn)這些蛋白在腫瘤組織中異常表達(dá)，如Arp2/3在結(jié)腸癌中的表達(dá)下調(diào)， WASP上調(diào)， Profilin在乳腺癌的表達(dá)下調(diào)，介導(dǎo)腫瘤細(xì)胞的細(xì)胞骨架重排，使得腫瘤細(xì)胞有著特殊的生物特性[3]。

血管擴(kuò)張刺激磷蛋白(Vasodilator-stimulated Phosphoprotein，VASP)是Ena/VASP(Drospophila Enabled)家族中的一種肌動(dòng)蛋白相關(guān)蛋白，它在調(diào)控細(xì)胞移動(dòng)方面起著重要作用[4]。VASP分子量為46KD，含Ena/VASP同源1(Ena/VASP homology 1，EVH1)區(qū)域、富含Proline區(qū)域、Ena/VASP同源2(Ena/VASP homology 2，EVH2)區(qū)域三個(gè)結(jié)構(gòu)部分，分別通過與Zyxin、Vinculin 、Profilin的結(jié)合，構(gòu)建了粘附斑和胞內(nèi)肌動(dòng)蛋白的物理連接，此外，EVH2區(qū)域還直接與肌動(dòng)蛋白相結(jié)合。這種特殊的空間位置提示VASP在與細(xì)胞骨架調(diào)節(jié)有關(guān)的各種細(xì)胞功能如細(xì)胞粘附、細(xì)胞移動(dòng)中發(fā)揮重要作用?；赩ASP調(diào)節(jié)細(xì)胞骨架的功能，以及VASP與Arp2/3、 WASP的密切關(guān)系，因此我們認(rèn)為VASP可能在調(diào)控胃癌侵襲與轉(zhuǎn)移中起著重要作用，目前僅有人做了VASP與肺癌的相關(guān)研究[5]。本實(shí)驗(yàn)首次觀察胃癌組織和癌旁組織以及不同分化層次癌組織中VASP表達(dá)的差異，探討VASP在胃癌發(fā)生、發(fā)展和浸潤轉(zhuǎn)移中的作用，為臨床治療胃癌提供更多實(shí)驗(yàn)依據(jù)。

1 材料與方法

1.1材料收集武漢大學(xué)附屬中南醫(yī)院2004年12月至2005年12月手術(shù)切除的胃癌標(biāo)本42例，臨床資料完整，術(shù)前均未行化療放療。胃癌42例，男30例，女12例，年齡32歲至83歲，平均(57.03±9.56)歲；組織類型均為腺癌，其中低分化腺癌23例，中分化腺癌9例，高分化腺癌10例；根據(jù)國際胃癌TNM分期標(biāo)準(zhǔn)，Ⅰ期、Ⅱ期胃腺癌16例，Ⅲ期、Ⅳ期胃腺癌26例。同時(shí)收集16例胃癌手術(shù)中切除的上下切緣作為正常胃粘膜對(duì)照。

1.2方法免疫組化檢測胃癌組織及癌旁組織中VASP表達(dá)情況。按免疫強(qiáng)度分成四類：0分為無IR，1分為低 IR(+)，2分為中等IR(++)，3分為強(qiáng) IR(+++)。按陽性染色細(xì)胞的比例分成4類：沒有腫瘤細(xì)胞表現(xiàn)IR記為0分，小于33% 的腫瘤細(xì)胞表現(xiàn)IR記為0.33，33%～的腫瘤細(xì)胞表現(xiàn)IR記為0.67，大于67%的腫瘤細(xì)胞表現(xiàn)IR記為1分。免疫印跡指數(shù)根據(jù)評(píng)估免疫反應(yīng)的強(qiáng)度(IR)積分以及陽性染色細(xì)胞的比例(PROP)綜合判定[6]。

2 結(jié) 果

2.1VASP在癌旁正常胃粘膜上皮組織中的表達(dá)情況胃粘膜上皮細(xì)胞和腺上皮細(xì)胞未見陽性表達(dá)(圖1a示)，但發(fā)現(xiàn)淋巴細(xì)胞和巨噬細(xì)胞有表達(dá)(圖1b示)，血管平滑肌細(xì)胞及內(nèi)皮細(xì)胞也有表達(dá)(圖1c示)。

2.2VASP在胃腺癌組織中的表達(dá)情況可見到陽性表達(dá)，且VASP的表達(dá)水平和標(biāo)本的組織分化程度、TNM分期以及淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移呈正相關(guān)(圖2、表1示)(圖1、2見第78頁彩色圖版)。

a、b、c分別為胃粘膜上皮細(xì)胞、淋巴細(xì)胞和血管平滑肌細(xì)胞圖1 正常胃粘膜組織VASP表達(dá)情況(HE，×200)

a、b、c分別為高、中和低分化胃癌組織圖2 胃癌組織VASP表達(dá)情況(HE，×200)

表1 VASP表達(dá)情況與患者臨床特征的關(guān)系

3 討 論

血管擴(kuò)張刺激磷蛋白是一個(gè)多功能膜表面蛋白，它廣泛分布于內(nèi)皮細(xì)胞、血小板、淋巴細(xì)胞、血管平滑肌細(xì)胞等，定位于細(xì)胞的膜高運(yùn)動(dòng)性區(qū)域、粘附斑、應(yīng)力纖維和leading edge處。它參與肌動(dòng)蛋白絲的形成，以及在整合素-ECM介導(dǎo)的細(xì)胞內(nèi)信號(hào)途徑中發(fā)揮著重要作用。VASP參與細(xì)胞的粘附和移動(dòng)。大量研究表明VASP蛋白在控制細(xì)胞移動(dòng)以及調(diào)控細(xì)胞內(nèi)肌動(dòng)蛋白動(dòng)力學(xué)發(fā)揮著普遍的作用。很多研究都表明，VASP在滋養(yǎng)層細(xì)胞侵襲、血管生成、細(xì)胞增殖以及成瘤化中起著重要作用[7]。

在本實(shí)驗(yàn)中，我們首次報(bào)道了VASP在胃組織中的空間分布和表達(dá)情況與其細(xì)胞類型不同有關(guān)。在正常胃粘膜組織中，在巨噬細(xì)胞和淋巴細(xì)胞中VASP的表達(dá)很強(qiáng)，這些細(xì)胞都是處于運(yùn)動(dòng)中的細(xì)胞，這也說明了VASP可能參與了這些細(xì)胞遷移的調(diào)控。而胃粘膜上皮細(xì)胞和腺上皮細(xì)胞都是弱至無表達(dá)，這些細(xì)胞被認(rèn)為是胃癌細(xì)胞的組織來源細(xì)胞，這些都是正常胃組織中的非遷移細(xì)胞。

我們的免疫組化結(jié)果顯示，VASP在胃腺癌組織比癌旁正常胃粘膜組織高表達(dá)，低分化腺癌中VASP表達(dá)高于高分化腺癌組(Plt;0.05)，我們認(rèn)為VASP可能在正常胃粘膜上皮細(xì)胞、胃腺細(xì)胞向腫瘤細(xì)胞轉(zhuǎn)化過程中發(fā)揮著重要作用。接著我們做了胃癌不同分期以及轉(zhuǎn)移情況的分析，結(jié)果顯示伴有淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移的胃癌組織中VASP表達(dá)顯著高于不伴有淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移組(Plt;0.01)，TNM Ⅲ、Ⅳ期胃癌組織中VASP表達(dá)顯著高于TNMⅠ、Ⅱ期組(Plt;0.01)。這些都說明了VASP蛋白可能通過調(diào)控腺瘤細(xì)胞和淋巴細(xì)胞的運(yùn)動(dòng)參與了組織侵襲轉(zhuǎn)移。這也和已有報(bào)道VASP和肺癌的研究結(jié)論是一致的[5]。有報(bào)道指出抑制VASP的功能或者上調(diào)VASP的表達(dá)在野生型的NIH 3T3細(xì)胞都能導(dǎo)致其向腫瘤轉(zhuǎn)化，這都說明了正常細(xì)胞的生長都需要VASP維持在一定范圍內(nèi)的，這也表明了VASP在成瘤過程中和/或者腫瘤的進(jìn)展中發(fā)揮著重要作用[8]。

綜上所述，我們通過研究首次報(bào)道了VASP在胃癌和癌旁組織中分布和表達(dá)的差異。胃癌中VASP的表達(dá)與標(biāo)本的組織分化、TNM分期以及淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移呈正相關(guān)，這說明了VASP可能參與了胃腺癌侵襲特性的調(diào)控，其機(jī)制可能是通過調(diào)控腫瘤細(xì)胞內(nèi)F肌動(dòng)蛋白形成，粘附斑以及細(xì)胞的遷移來促進(jìn)腫瘤細(xì)胞的遷移。另外，我們推測VASP可能參與正常胃粘膜細(xì)胞向胃癌細(xì)胞的轉(zhuǎn)化。VASP可能是胃癌的一個(gè)重要調(diào)控蛋白和腫瘤進(jìn)展的啟動(dòng)因子，可能是治療胃癌或者阻止其惡性進(jìn)展的一個(gè)重要靶分子。隨著微觀領(lǐng)域技術(shù)的發(fā)展，分析各種腫瘤模型的基因表達(dá)，可能為治療腫瘤和鑒定特異的細(xì)胞骨架靶分子提供廣闊的前景。

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[編輯] 一 凡

R730.21

A

1673-1409(2009)02-R020-03

10.3969/j.issn.1673-1409(R).2009.02.006

2009-01-05

長江大學(xué)人才引進(jìn)啟動(dòng)基金項(xiàng)目

彭小春(1981-)，男，湖北公安人,碩士，從事細(xì)胞骨架蛋白與腫瘤的研究工作。