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    RNA干涉技術(shù)及其在水產(chǎn)科學(xué)中的應(yīng)用

    2009-11-29 01:26:36華中農(nóng)業(yè)大學(xué)水產(chǎn)學(xué)院湖北武漢430070
    關(guān)鍵詞:斑馬魚對(duì)蝦水產(chǎn)

    李 兵 (華中農(nóng)業(yè)大學(xué)水產(chǎn)學(xué)院,湖北 武漢 430070)

    曾令兵 (中國水產(chǎn)科學(xué)研究院長江水產(chǎn)研究所,湖北 荊州 434000)

    RNA干涉技術(shù)及其在水產(chǎn)科學(xué)中的應(yīng)用

    李 兵 (華中農(nóng)業(yè)大學(xué)水產(chǎn)學(xué)院,湖北 武漢 430070)

    曾令兵 (中國水產(chǎn)科學(xué)研究院長江水產(chǎn)研究所,湖北 荊州 434000)

    介紹了RNA干涉的作用機(jī)制和特點(diǎn),從抑制水生動(dòng)物病毒、研究水生動(dòng)物基因功能等方面綜述了RNA干涉技術(shù)近年在水產(chǎn)科學(xué)領(lǐng)域中的應(yīng)用。

    RNA干涉;基因沉默;水產(chǎn)科學(xué);應(yīng)用

    RNA干涉(RNA interference,RNAi)是指由外源或內(nèi)源性的小干涉RNA雙鏈分子(Small interferring RNA,siRNA)導(dǎo)入細(xì)胞時(shí),引起同源的mRNA發(fā)生降解而導(dǎo)致基因表達(dá)沉默的現(xiàn)象,又稱為轉(zhuǎn)錄后基因沉默(post transcriptional gene-silencing,PTGS)[1,2]。

    自從1998年Fire等提出RNA干涉以來,人們對(duì)它的機(jī)制以及功能的研究取得了突飛猛進(jìn)的發(fā)展。RNA干涉技術(shù)具有高度特異性、高效性等特點(diǎn),為人們研究未知功能的基因提供了新的遺傳學(xué)手段,還可以作為一種潛在的抵抗病毒感染的途徑。近年來科學(xué)家利用RNA干涉技術(shù)在研究水產(chǎn)病原生物控制、魚類基因結(jié)構(gòu)與功能等方面開展卓有成效的研究工作,取得了顯著進(jìn)展。

    1 RNA干涉技術(shù)

    1.1 RNAi的發(fā)展過程

    1998年,Fire等[3]將經(jīng)純化得到的反義RNA或正義RNA注入線蟲,基因抑制效應(yīng)微弱;而將正、反義鏈構(gòu)成的雙鏈RNA注入線蟲,結(jié)果誘發(fā)了比單獨(dú)注射正義鏈或反義鏈都要強(qiáng)得多的基因沉默。由此他們提出,小的雙鏈RNA分子能引起生物體內(nèi)同源mRNA的降解,導(dǎo)致相應(yīng)的基因表達(dá)沉默,并稱這種現(xiàn)象為RNA干涉。

    Wianny[4]發(fā)現(xiàn) RNA干涉也存在于小鼠中。Clemens等[5]發(fā)現(xiàn)RNA干涉在體外培養(yǎng)的果蠅細(xì)胞系中也能實(shí)現(xiàn)。Brummelkamp等[6]利用載體表達(dá)的小發(fā)卡狀RNA(small hairpin RNA,shRNA)在培養(yǎng)的人源、猴源和鼠源等哺乳動(dòng)物細(xì)胞的RNAi實(shí)驗(yàn)中取得了成功。Tuschl等[7]發(fā)現(xiàn)小的RNA干涉分子(small interferring RNA,siRNA)能在人胚胎腎293細(xì)胞和Hela細(xì)胞內(nèi)有效地抑制目的基因的表達(dá)。McCaffrey等[8]通過載體表達(dá)的shRNA在小鼠中成功抑制了HBV復(fù)制。Song等[9]針對(duì)小鼠Fas mRNA設(shè)計(jì)了siRNA,成功地保護(hù)了小鼠的肝臟。Anderson等[10]、Nishitsuji等[11]、Li等[12]、Tat等[13]分別利用RNA干涉原理有效地抑制了HIV-1的復(fù)制,為HIV-1的治療提供了可能的途徑。

    1.2 RNAi的作用機(jī)制

    RNAi的發(fā)生過程大致可以分為3個(gè)階段,分別是起始階段、效應(yīng)階段和擴(kuò)增階段。在起始階段,外源導(dǎo)入或病毒感染等方式引入的dsRNA被核酸內(nèi)切酶RNaseIII家族的Dicer所識(shí)別并均勻地切割成21~23 nt大小的siRNA。內(nèi)源microRNA原始轉(zhuǎn)錄產(chǎn)物(pri-microRNA)在核酸內(nèi)切酶Drosha的作用下形成microRNA前體(pre-microRNA),然后被Dicer識(shí)別并結(jié)合,加工成類似siRNA的成熟microRNA[14]。在效應(yīng)階段,siRNA與蛋白復(fù)合物結(jié)合后形成RNA誘導(dǎo)沉默復(fù)合物(RNA-induced silencing complex,RISC),RISC中的解旋酶利用ATP解開siRNA雙鏈,反義鏈與Argonaute蛋白形成活化的RISC,活化的RISC與互補(bǔ)的靶mRNA結(jié)合,在酶的催化作用下,將其切割、降解[15]。在線蟲和植物中存在這種siRNA的擴(kuò)增機(jī)制。在這個(gè)階段,siRNA與mRNA靶向性結(jié)合,并作為引物,在RNA依賴的RNA聚合酶(RdRp)作用下再次形成dsRNA,dsRNA又被Dicer切割成siRNA,新形成的siRNA又可以進(jìn)入下一輪循環(huán)而達(dá)到擴(kuò)增目的[16]。

    1.3 RNAi的特點(diǎn)

    RNAi具有以下幾個(gè)主要的特點(diǎn):(1)高度特異性。RNAi作用只降解與其序列同源的靶mRNA分子。(2)高效性。由于RNAi過程中存在信號(hào)分子擴(kuò)增機(jī)制,極少量的dsRNA就可以引起靶mRNA分子的降解[16]。(3)作用迅速。dsRNA導(dǎo)入細(xì)胞后可迅速引起與其同源的mRNA的降解。(4)能抑制靜息期的病毒。RNAi的作用不依賴于病毒的復(fù)制,利用慢病毒載體表達(dá)的RNAi可以抑制處在靜息期的病毒的基因表達(dá)。(5)能同時(shí)抑制多個(gè)基因。針對(duì)一個(gè)基因家族的保守序列設(shè)計(jì)siRNA能同時(shí)抑制該基因家族里的多個(gè)基因的表達(dá)。(6)操作簡便。相對(duì)基因敲除技術(shù)而言,RNAi的操作更為簡便,更易于控制。

    1.4 siRNA的制備

    制備siRNA較為常用的方法有化學(xué)合成法、體外轉(zhuǎn)錄法、長片斷dsRNAs經(jīng)Rnase Ⅲ類降解體外制備siRNA法、通過siRNA表達(dá)載體或者病毒載體制備siRNA以及通過PCR法制備的siRNA表達(dá)框架等。各方法的優(yōu)缺點(diǎn)見表1。

    表1 siRNA制備方法的比較Table 1 Comparison on methods of siRNA preparation

    1.5 RNAi技術(shù)的應(yīng)用

    RNAi具有廣泛的用途,例如用于基因功能解析、生物遺傳育種、腫瘤與傳染性疾病治療、新型藥物篩選、細(xì)胞信號(hào)傳導(dǎo)途徑、生長與發(fā)育機(jī)理等方面的研究。外源導(dǎo)入siRNA使生物體內(nèi)同源的基因沉默而表現(xiàn)為相應(yīng)的功能缺失的表型,就可以確定該基因的功能。在基因治療研究中,選擇病原生物、腫瘤細(xì)胞或遺傳性、代謝性疾病特有的基因靶序列,設(shè)計(jì)siRNA并導(dǎo)入目標(biāo)生物體內(nèi),從而引發(fā)RNA干涉,抑制靶基因的表達(dá),達(dá)到基因治療的目的。Gitlin等[24]發(fā)現(xiàn),用siRNA預(yù)處理的人或鼠細(xì)胞能夠抵抗脊髓灰質(zhì)炎病毒感染,已感染脊髓灰質(zhì)炎病毒細(xì)胞中導(dǎo)入siRNA有利于病毒的清除。RNAi可以作為尋找新的基因治療藥物靶標(biāo)的工具,高通量地對(duì)藥物靶基因作功能和效果分析。美國Genetica公司已將RNAi技術(shù)作為高通量藥物靶標(biāo)識(shí)別和確認(rèn)的工具[25]。由于RNAi能高效地阻斷目的基因的表達(dá),因此RNAi技術(shù)可以作為研究信號(hào)傳導(dǎo)通路的良好工具。Deng等[26]通過RNAi技術(shù)證實(shí)Mirk激酶在骨骼肌細(xì)胞分化過程中受Rho家族成員調(diào)控,聯(lián)合應(yīng)用傳統(tǒng)突變?nèi)笔Ъ夹g(shù)和RNAi技術(shù)可以很容易地確定復(fù)雜信號(hào)傳導(dǎo)通路中不同基因的上下游關(guān)系。

    2 RNAi在抑制水產(chǎn)動(dòng)物病毒復(fù)制方面的應(yīng)用

    隨著水產(chǎn)養(yǎng)殖業(yè)的迅速發(fā)展,養(yǎng)殖環(huán)境的不斷惡化,水產(chǎn)動(dòng)物病害愈加頻繁的發(fā)生。大規(guī)模疾病的暴發(fā)不僅造成了巨大的經(jīng)濟(jì)損失,由此滋生的濫用藥物問題給食品安全帶來了巨大的隱患,嚴(yán)重阻礙了水產(chǎn)養(yǎng)殖業(yè)的進(jìn)一步發(fā)展。因此,有效控制水產(chǎn)動(dòng)物病害的發(fā)生成為當(dāng)務(wù)之急。但是,目前對(duì)水產(chǎn)動(dòng)物疾病,尤其是病毒性疾病缺乏有效地防治方法,常規(guī)的藥物防治不能有效控制疾病的發(fā)生,而且容易引起藥物殘留等問題。而小的RNA干涉分子能特異性地抑制同源基因的表達(dá),利用RNAi干涉技術(shù),通過外源導(dǎo)入siRNA可以在水產(chǎn)動(dòng)物體內(nèi)有效地降解病毒的RNA,達(dá)到防治病毒性疾病的目的。

    2.1 抑制真鯛虹彩病毒

    真鯛虹彩病毒能感染真鯛等海水養(yǎng)殖魚類,造成較大的經(jīng)濟(jì)損失。目前對(duì)真鯛虹彩病毒還沒有很好的抑制方法,因此很有必要研究一種新的途徑來抑制真鯛虹彩病毒的復(fù)制。真鯛虹彩病毒是一種雙鏈DNA病毒,病毒基因組編碼一個(gè)主衣殼蛋白(major capsid protein,MCP)基因和92個(gè)推定的開放讀碼框架。Lua等[27]針對(duì)真鯛虹彩病毒(Red seabream iridovirus,RSIV)的主衣殼蛋白基因設(shè)計(jì)siRNA(siR-MCP),用不同濃度的siR-MCP(30、60 和120 nmol/L)和MCP表達(dá)質(zhì)粒共轉(zhuǎn)染比目魚胚胎細(xì)胞(Hirame Natural Embryo,HINAE)2 d后,經(jīng)過RT-PCR的檢測(cè)發(fā)現(xiàn),120 nmol/L的siR-MCP能有效地抑制MCP基因的瞬時(shí)表達(dá)(表達(dá)量減少了79.55%)。用120 nmol/L的siR-MCP轉(zhuǎn)染HINAE細(xì)胞6 h后,用RSIV感染HINAE細(xì)胞,繼續(xù)培養(yǎng)72 h、84 h、96 h后,經(jīng)過RT-PCR檢測(cè)發(fā)現(xiàn),RSIV的復(fù)制分別減少了13.04%、55.16%、97.14%。研究表明,通過siR-MCP抑制MCP基因的表達(dá)可以有效地抑制RSIV的復(fù)制。用siR-MCP轉(zhuǎn)染HINAE細(xì)胞,接毒72 h、96 h、120 h后對(duì)細(xì)胞培養(yǎng)液的上清進(jìn)行滴度測(cè)定,發(fā)現(xiàn)病毒的數(shù)量與對(duì)照組相比有所下降,表明siR-MCP有抗病毒的特性。由此提示RNA干涉技術(shù)可為水產(chǎn)動(dòng)物病毒性疾病的防治提供了一種新的途徑。

    2.2 抑制對(duì)蝦白斑綜合癥病毒

    對(duì)蝦白斑綜合癥病毒(white spot syndrome virus,WSSV)是一種雙鏈環(huán)狀DNA病毒,是造成世界范圍內(nèi)大面積暴發(fā)對(duì)蝦病毒性疾病的主要病原。病毒感染蝦后3~7 d內(nèi)死亡率高達(dá)100%,對(duì)對(duì)蝦養(yǎng)殖業(yè)造成了嚴(yán)重的危害。WSSV的基因組大小約為300 kb,由6個(gè)主蛋白和大約34個(gè)輔助蛋白組成。Westenberg等[28]針對(duì)對(duì)蝦白斑綜合癥病毒包膜蛋白vp28和DNA綁定蛋白vp15設(shè)計(jì)了siRNA并注射到對(duì)蝦體內(nèi),24 h后感染 WSSV病毒。發(fā)現(xiàn)siRNA能降低有效地抑制目的基因的表達(dá),降低對(duì)蝦的死亡率。Wu等[29]針對(duì)凡納濱對(duì)蝦白斑綜合癥病毒5個(gè)基因位點(diǎn)DNA 聚合酶(dnapol),核苷酸還原酶小亞基(rr2),胸苷激酶-胸苷酸激酶(tk-tmk),核衣殼蛋白vp24以及包膜蛋白vp28設(shè)計(jì)了siRNA,將siRNA和WSSV注射到凡納濱對(duì)蝦第三腹節(jié)和第四腹節(jié)之間的肌肉組織,暫養(yǎng)6 d后,成活率分別為50%、50%、66%、33% 和33%,而對(duì)照組成活率為0%。說明siRNA對(duì)白斑綜合癥病毒的復(fù)制有一定的抑制作用,展示RNA干涉技術(shù)在防治病毒性疾病、尤其是目前尚無有效對(duì)策進(jìn)行控制的病毒性疾病的廣闊應(yīng)用前景。

    2.3 抑制蛙病毒

    虎紋蛙虹彩病毒(Iridovirus-tiger frog virus,TFV)屬于虹彩病毒科、蛙病毒屬?;⒓y蛙虹彩病毒主要感染虎紋蛙幼體和幼蛙,導(dǎo)致其大量死亡,造成重大的經(jīng)濟(jì)損失。虎紋蛙虹彩病毒免疫原性很低,疫苗接種的效果一般都不理想。RNA干涉作用具有高效降解同源mRNA的特點(diǎn),解決了這一難題。Xie等[30]針對(duì)虎紋蛙虹彩病毒主衣殼蛋白基因設(shè)計(jì)的siRNA對(duì)病毒的復(fù)制有強(qiáng)烈的抑制作用。siRNA能導(dǎo)致TFV感染的細(xì)胞出現(xiàn)CPE的時(shí)間推遲。病毒感染后的細(xì)胞培養(yǎng)液中病毒的滴度和病毒粒子的含量均有下降。提示RNA干涉技術(shù)可以用于抑制虎紋蛙虹彩病毒的復(fù)制。他們還通過體外轉(zhuǎn)錄siRNA以及質(zhì)粒轉(zhuǎn)導(dǎo)shRNA在肥頭鯉肌肉細(xì)胞(FHM)中有效地抑制了報(bào)告基因lacZ的表達(dá),而且發(fā)現(xiàn)siRNA更為有效。

    2.4 抑制草魚呼腸孤病毒

    草魚呼腸孤病毒(Grass carp reovirus,GCRV)主要感染當(dāng)年草魚種,在水溫25~30 ℃最為流行,死亡率高。草魚呼腸孤病毒為雙鏈RNA病毒,其基因組由11個(gè)片段組成。陳蕓[31]以草魚呼腸孤病毒外殼蛋白基因VP7為靶基因,構(gòu)建了shRNA表達(dá)載體。轉(zhuǎn)染草魚腎細(xì)胞(CIK)后,用GCRV感染CIK細(xì)胞。結(jié)果顯示,shRNA表達(dá)載體在細(xì)胞水平上對(duì)GCRV具有較強(qiáng)的病毒抑制作用,抑制率達(dá)82%。他們采用顯微注射將shRNA表達(dá)載體導(dǎo)入稀有鮈鯽體內(nèi)。結(jié)果表明,針對(duì)GCRV的VP7基因設(shè)計(jì)的shRNA表達(dá)載體有效地抑制了GCRV在稀有鮈鯽體內(nèi)的復(fù)制。

    3 RNAi在水產(chǎn)動(dòng)物基因功能研究方面的應(yīng)用

    Li等[32]發(fā)現(xiàn)特異性的siRNA能有效地抑制斑馬魚胚胎中外源的綠色熒光蛋白的瞬時(shí)表達(dá)。針對(duì)Zf-T基因設(shè)計(jì)的siRNA通過顯微注射到斑馬魚胚胎中,導(dǎo)致脊索發(fā)育畸形,尾部嚴(yán)重萎縮。 針對(duì)Pax6.1基因設(shè)計(jì)的siRNA導(dǎo)致斑馬魚胚胎眼和前腦發(fā)育不良。同時(shí)注射2種siRNA導(dǎo)致胚胎缺少脊索、眼以及部分腦組織。因此可以推測(cè)Zf-T基因與脊索的發(fā)育密切相關(guān),Pax6.1基因在眼和腦組織的發(fā)育過程中起到了重要的作用。Dodd等[17]首次研究了siRNA對(duì)斑馬魚肌營養(yǎng)不良蛋白基因(dmdgene)的作用效果,應(yīng)用化學(xué)合成的siRNA注射到斑馬魚胚胎中,成功抑制了dmd基因的表達(dá)。Liu等[18]發(fā)現(xiàn)運(yùn)用核酶消化長片段dsRNA得到的siRNA能夠引起非特異性的基因表達(dá)抑制,而運(yùn)用SP6 RNA聚合酶進(jìn)行體外合成得到的siRNA能夠特異性的沉默靶基因的表達(dá),說明體外轉(zhuǎn)錄的siRNA可以在斑馬魚中用來特異性地下調(diào)目的基因表達(dá)。這提示RNA干涉技術(shù)在斑馬魚基因功能研究中有著廣泛的應(yīng)用前景。

    Boonanuntanasarn等[33]發(fā)現(xiàn)序列特異性的siRNA能有效地抑制虹鱒胚胎中綠色熒光蛋白基因的瞬時(shí)表達(dá),有4個(gè)堿基錯(cuò)配的siRNA沒有抑制效果。這說明siRNA的抑制作用具有高度特異性。針對(duì)酪氨酸酶A基因設(shè)計(jì)的siRNA,有效地抑制了酪氨酸酶A基因的表達(dá),而且siRNA的抑制作用具有劑量依賴性。Robalino等[34]針對(duì)凡納濱對(duì)蝦的血藍(lán)蛋白基因設(shè)計(jì)的dsRNA注射到對(duì)蝦尾部肌肉,經(jīng)過檢測(cè)發(fā)現(xiàn),dsRNA在肝胰腺中有效地抑制了血藍(lán)蛋白mRNA的表達(dá)。說明dsRNA可以在對(duì)蝦不同的組織間進(jìn)行傳遞;對(duì)蝦體內(nèi)存在著完整的RNAi機(jī)制,因此RNA干涉技術(shù)可以用于研究對(duì)蝦的基因功能。

    Jannel等[35]通過體外轉(zhuǎn)錄法合成了針對(duì)羅非魚肌生成抑制素myostatin基因設(shè)計(jì)的siRNA,通過顯微注射到斑馬魚的晶胚中。在顯微注射30 d、60 d和75 d后對(duì)所有魚體進(jìn)行稱重,每組分別取20個(gè)個(gè)體進(jìn)行肌肉的組織學(xué)分析。結(jié)果表明,注射了siRNA的斑馬魚與對(duì)照組相比,體重增長達(dá)到45%,肌纖維含量平均增長了48.7%。說明siRNA有效抑制了myostatin基因的表達(dá),也提示RNA干涉技術(shù)可以用于培育個(gè)體大、肌纖維含量高的優(yōu)良品種。

    Zenke等[36]利用紅鰭東方鲀的U6啟動(dòng)子成功的在藍(lán)色大太陽魚細(xì)胞系中轉(zhuǎn)錄了shRNA,并證實(shí)了在藍(lán)色大太陽魚細(xì)胞系、石鱸鰭條細(xì)胞系以及大鱗大麻哈魚胚胎細(xì)胞系中紅鰭東方鲀的U6啟動(dòng)子比鼠的U6啟動(dòng)子能更有效地表達(dá)shRNA。Voelker等[37]利用RNAi技術(shù)抑制斑馬魚胚胎細(xì)胞色素cyp1a基因和血紅素氧合酶1基因(hmox1)的表達(dá),并將胚胎用3,4-氯苯胺(3,4-dichloroaniline)處理。結(jié)果胚胎發(fā)育紊亂的幾率有所提高;而注射cyp1a和hmox1的mRNA減少了胚胎發(fā)育紊亂發(fā)生的幾率。2種處理揭示了cyp1a和hmox1基因表達(dá)的蛋白對(duì)暴露于3,4-氯苯胺中的斑馬魚胚胎具有保護(hù)作用。進(jìn)一步展示RNA干涉技術(shù)在基因功能研究方面的應(yīng)用前景。

    Su等[38]通過shRNA抑制斑馬魚綠色熒光蛋白基因和無尾基因的實(shí)驗(yàn)發(fā)現(xiàn),相對(duì)于單獨(dú)使用CMV啟動(dòng)子或者U6啟動(dòng)子而言,將CMV增強(qiáng)子或者整個(gè)CMV啟動(dòng)子定位于U6啟動(dòng)子的上游可以顯著地增強(qiáng)shRNA對(duì)目的基因的抑制效果。Wang等[39]通過T7質(zhì)粒系統(tǒng)體內(nèi)轉(zhuǎn)錄小發(fā)夾RNA,有效地抑制了斑馬魚胚胎中綠色熒光蛋白基因和無尾(no tail)基因的表達(dá)。提示T7質(zhì)粒系統(tǒng)體內(nèi)轉(zhuǎn)錄小發(fā)夾RNA可應(yīng)用于斑馬魚胚胎的基因功能研究。Schyth等[40]針對(duì)1種魚類棒狀病毒的糖蛋白基因設(shè)計(jì)了3種不同的siRNA,經(jīng)病毒感染的細(xì)胞轉(zhuǎn)染siRNA,結(jié)果顯示3種siRNA均能有效地抑制病毒的增殖,而含1~4個(gè)堿基錯(cuò)配的siRNA,有2/3能對(duì)病毒起到抑制作用,說明siRNA的作用具有序列特異性。Hwang等[41]發(fā)現(xiàn)傳染性胰腺壞死癥病毒(infectious pancreatic necrosis virus,IPNV)能誘導(dǎo)大麻哈魚細(xì)胞產(chǎn)生一種新型的膜聯(lián)蛋白1(annexin1)。他們針對(duì)膜聯(lián)蛋白1設(shè)計(jì)了siRNA,有效地抑制了膜聯(lián)蛋白1的mRNA的表達(dá),經(jīng)IPNV感染的細(xì)胞的凋亡現(xiàn)象顯著增加,細(xì)胞外的病毒減少至25%。揭示大麻哈魚膜聯(lián)蛋白1的抗細(xì)胞凋亡作用對(duì)IPNV在細(xì)胞中的增殖十分重要。

    4 問題與展望

    RNAi具有高效性、特異性等諸多特點(diǎn),在抑制特定基因的表達(dá)方面具有很大的優(yōu)越性。RNAi技術(shù)可以廣泛應(yīng)用于水產(chǎn)動(dòng)物基因結(jié)構(gòu)與功能分析、細(xì)胞信號(hào)傳導(dǎo)途徑以及病原生物抑制與疫病控制等方面。由于化學(xué)合成siRNA的成本較高,且直接應(yīng)用化學(xué)合成的siRNA其作用時(shí)效比較短,只適用于在細(xì)胞培養(yǎng)系統(tǒng)中用于篩選或鑒定有效siRNA結(jié)構(gòu)。利用質(zhì)粒轉(zhuǎn)錄或載體表達(dá)技術(shù)在魚類細(xì)胞或魚體內(nèi)持續(xù)穩(wěn)定高效表達(dá)siRNA結(jié)構(gòu),對(duì)于RNAi技術(shù)在魚類傳染性疾病的基因治療、水產(chǎn)動(dòng)物轉(zhuǎn)基因新品種培育、遺傳性狀連鎖基因定位、動(dòng)物發(fā)育生物學(xué)等領(lǐng)域的應(yīng)用有重要意義,是今后的研究于在水產(chǎn)科學(xué)中應(yīng)用的發(fā)展方向。相信隨著研究的不斷深入,RNAi技術(shù)一定會(huì)在水產(chǎn)科學(xué)領(lǐng)域得到更加廣泛的應(yīng)用和取得更大的成果。

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    Q789

    A

    1673-1409(2009)02-S042-06

    10.3969/j.issn.1673-1409(S).2009.02.013

    2008-11-11

    李 兵(1983-),男,湖北麻城人,碩士研究生,主要從事水產(chǎn)養(yǎng)殖病害研究.

    曾令兵,E-mail:zenglingbing@gmail.com.

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