應(yīng)用植物酯酶測定農(nóng)藥殘留研究進(jìn)展

韓 波，姚安慶，王 勇，李俊凱

(長江大學(xué)農(nóng)學(xué)院，湖北 荊州 434025)

應(yīng)用植物酯酶測定農(nóng)藥殘留研究進(jìn)展

韓 波，姚安慶，王 勇，李俊凱

(長江大學(xué)農(nóng)學(xué)院，湖北 荊州 434025)

植物酯酶主要用于有機(jī)磷和氨基甲酸酯類農(nóng)藥殘留的檢測。對有機(jī)磷、氨基甲酸酯類農(nóng)藥的植物酯酶檢測原理、應(yīng)用條件、固定化研究現(xiàn)狀和檢測方法作一概述，以展望其廣闊的市場遠(yuǎn)景。

植物酯酶；農(nóng)藥殘留；有機(jī)磷；氨基甲酸酯

農(nóng)藥的不合理使用，導(dǎo)致農(nóng)藥在環(huán)境以及食物中的殘留量嚴(yán)重超標(biāo)，由此引起的農(nóng)藥中毒現(xiàn)象和農(nóng)產(chǎn)品貿(mào)易中引發(fā)的爭端時(shí)有發(fā)生，因此發(fā)展可靠、靈敏、快速、實(shí)用的農(nóng)藥殘留快速檢測分析技術(shù)無疑是監(jiān)測和控制殘留、保證農(nóng)產(chǎn)品安全和避免國際貿(mào)易爭端的重要前提[1]。傳統(tǒng)的農(nóng)藥殘留檢測方法存在選擇性差、靈敏度低等缺陷；近年來發(fā)展較快的儀器分析方法具有靈敏度極高、選擇性好、分析迅速、適于微量、超痕量組分的測定等特點(diǎn)，能有效準(zhǔn)確地測定樣品中農(nóng)藥殘留含量，但往往需要昂貴的儀器和專業(yè)的操作人員，費(fèi)時(shí)費(fèi)力，且不適合現(xiàn)場實(shí)時(shí)檢測[2]；而快速的基于酶抑制原理的檢測技術(shù)[3]勢將成為食品生產(chǎn)或產(chǎn)品銷售時(shí)農(nóng)藥殘留檢測及控制的重點(diǎn)研究對象。

目前在農(nóng)藥殘留檢測過程中所用酯酶包括來自動(dòng)物體內(nèi)的如從果蠅或電鰻中[4]提取的乙酰膽堿酯酶、馬血清中得到的丁酰膽堿酯酶以及從小麥、水稻、玉米、毛豆、黃豆、蠶豆、小白菜[5～7]等植物中提取的植物酯酶；但膽堿脂酶來源于動(dòng)物體[8]，價(jià)格貴且保存較為困難；而植物酯酶來源廣、成本低、易于保存[9]；因此近年來有研究用植物水解酶替代乙酰膽堿酯酶的分析方法[10,11]，結(jié)果發(fā)現(xiàn)在酶活性和抑制程度上有些植物酶與動(dòng)物酶相比并不遜色[12,13]，且其測定農(nóng)藥殘留的最低檢出限遠(yuǎn)低于國家規(guī)定的最大允許殘留量(MRL)[14,15],因此用植物酶進(jìn)行抑制反應(yīng)的檢測完全可行。

1 植物酯酶檢測農(nóng)藥殘留的原理

植物酯酶抑制法是通過酶與食品中含有的農(nóng)藥反應(yīng)后，底物與顯色劑反應(yīng)的比色原理測定食品中農(nóng)藥殘留量。這種方法具有靈敏度高、結(jié)果可靠、測量時(shí)間短、且檢測體系容易實(shí)現(xiàn)等特點(diǎn)。基于其比色原理，有可能實(shí)現(xiàn)的測定方法有固藍(lán)B鹽法、靛酚乙酯法等。

1.1 植物酯酶固藍(lán)B鹽法檢測的原理

固藍(lán)B鹽法的依據(jù)是農(nóng)藥能抑制植物酶的活性，而酶被抑制的程度可以用比色法來測定。當(dāng)酶與試樣進(jìn)行反應(yīng)時(shí)，如果試樣中沒有農(nóng)藥殘留或者殘留量極小，酶的活性不被抑制，基質(zhì)可以水解，水解產(chǎn)物通過顯色劑顯色；反之，如果農(nóng)藥殘留量較高，酶的活性就會(huì)被農(nóng)藥所抑制，水解產(chǎn)物減少或者沒有產(chǎn)物生成，不能顯色或顯色較淺。該方法的顯色反應(yīng)原理如下[16]：

植物酯酶可以使乙酸-α-萘酯酶水解為萘酚和乙酸，萘酚與顯色劑固藍(lán)B鹽作用形成紫紅色偶氮化合物，從而完成顯色反應(yīng)。酶被抑制的程度不同，紫紅色偶氮化合物的產(chǎn)量不同，溶液顏色的深淺也不同。依據(jù)該原理可以衡量出植物酯酶的比活力，比較受農(nóng)藥抑制時(shí)的酶活性和未受農(nóng)藥抑制時(shí)的酶活性，可以求出農(nóng)藥的抑制率。與乙酰膽堿酯酶相似，可以通過農(nóng)藥殘留量與酶活性抑制率之間的關(guān)系，測定抑制率的大小來顯示農(nóng)藥殘留的毒性程度。

1.2 植物酯酶2,6-二氯靛酚乙酯法檢測的原理

在pH 7.0～8.0的溶液中，碘化硫代乙酰膽堿被植物酯酶水解，生成硫代膽堿。硫代膽堿具有還原性，能使藍(lán)色的2,6-二氯靛酚乙酯褪色，褪色程度與酯酶活性正相關(guān)，可在600 nm附近比色測定，酶活性越高時(shí)，光密度越低。當(dāng)樣品提取液中有一定量的有機(jī)磷農(nóng)藥或氨基甲酸酯類農(nóng)藥存在時(shí)，酶活性受到抑制，光密度則較高，光密度與農(nóng)藥殘留量呈正相關(guān)。據(jù)此可以判斷樣品中有機(jī)磷農(nóng)藥或氨基甲酸酯類農(nóng)藥的殘留情況。反應(yīng)方程式如下：

采用植物酯酶法測定殘留農(nóng)藥時(shí)，根據(jù)農(nóng)藥殘留量與光密度之間的關(guān)系，通過光密度的變化來顯示農(nóng)藥殘留的毒性等級。

2 植物酯酶反應(yīng)條件的研究

由于植物酯酶是一種生理活性物質(zhì)，在使用過程中經(jīng)常會(huì)受到試驗(yàn)條件及方法的限制而不能夠充分發(fā)揮其對農(nóng)藥的顯著抑制效果，因此有學(xué)者對酯酶在試驗(yàn)時(shí)所涉及到的反應(yīng)pH、溫度、濃度等方面進(jìn)行研究。

徐斐等[17]利用酶法分析中的酶抑制原理，在不同pH條件下對可被有機(jī)磷農(nóng)藥抑制的不同來源的植物酯酶進(jìn)行了篩選。以總酯酶活力和對敵敵畏的靈敏度為指標(biāo)，確定從豫麥39中提取的植物酯酶為最佳的農(nóng)藥檢測用酶，其最佳檢測pH為6.5。

周艷明[18]等從蕎麥面粉中提取得到植物酯酶，經(jīng)硫酸銨分級沉淀、Q-Sepharose Fast Flow離子交換柱層析后酶活性可提純16.814倍。純化后酶液經(jīng)Sephadex G-200層析和HPLC分析證明為單一物質(zhì)。酶作用的最適溫度為45 ℃，最適pH為6.5，在 40 ℃以下、pH 6.5～8.0之間酶的活性較穩(wěn)定。

黃保宏[19]采用比色法對不同溫度下植物酯酶活性進(jìn)行研究，結(jié)果表明：不同溫度對植物酯酶活力的影響較為顯著(Plt;0.05)。小麥內(nèi)鄉(xiāng)188幼苗內(nèi)植物酯酶是偏熱性酶，隨反應(yīng)溫度的變化而呈偏正態(tài)分布，45 ℃時(shí)光密度值△D達(dá)最大值，以后酯酶活性則呈下降趨勢。故以45 ℃時(shí)植物酯酶活力最佳，且為植物酯酶測定有機(jī)磷農(nóng)藥殘留的最佳溫度。

肖建軍等[20～22]以樂果為抑制劑對各種小麥酯酶進(jìn)行了篩選，結(jié)果表明，不同品種小麥酯酶對樂果的敏感度不同；針對這種情況，作者選出酯酶對有機(jī)磷抑制敏感的小麥品種，確定酶適宜的催化條件，以便于對農(nóng)藥的準(zhǔn)確測定，并且進(jìn)一步研究了酶濃度與溫度對檢測靈敏度的影響。

在農(nóng)藥殘留檢測的過程中，采用農(nóng)藥為抑制劑時(shí)，為了提高分析結(jié)果的靈敏度，酶的濃度應(yīng)較低。采用植物酯酶利用分光光度法檢測農(nóng)藥含量，在進(jìn)行微量分析時(shí)，酶的濃度存在一個(gè)最適濃度，用此濃度的酶進(jìn)行分析，分辨率較高，靈敏度也較高。酶的濃度高于或低于此濃度，分辨率都會(huì)下降。酶活性受溫度的影響較大，不同的植物酯酶都有一個(gè)最適溫度。低于此溫度時(shí)，酶促反應(yīng)速度隨溫度的增加而提高；高于該溫度時(shí)，反應(yīng)速度隨溫度的增加而降低。肖建軍等[23]為研究小麥酯酶作為檢測農(nóng)藥殘留量生物傳感器的生物敏感元件的可行性，研究了小麥酯酶在室溫20 ℃和4 ℃保存時(shí)、在經(jīng)歷低溫后及在液氮中保存后酶活性的變化情況。研究顯示，小麥酯酶在室溫和4 ℃保存時(shí)，其活性衰退較快，有必要對其進(jìn)行低溫保存。在液氮中停留20 min或保存34 h后，小麥酶活性仍能維持很高；在液氮中保存8 d，活性仍有97.5%。

3 植物酯酶固定化的研究

所謂固定化酶(Immobilized Enzyme)是通過物理的或化學(xué)的方法，將酶分子束縛在載體上，使其既保持酶的天然活性，又便于與反應(yīng)液分離，可以重復(fù)使用，它是酶制劑中的一種新劑型。酶的固定方式有吸附法、包埋法、結(jié)合法、交聯(lián)法、熱處理法等。由于固定化酶的研究已取得大量的成果，發(fā)揮著巨大作用，因此受到人們極大的關(guān)注。

許學(xué)勤[24]以大孔徑強(qiáng)堿性陰離子交換樹脂作為固定化載體，采用離子結(jié)合法，在室溫及酶液對載體比例為4 mL∶l g的條件下，對酶固定化的環(huán)境pH、緩沖液濃度及固定化特性進(jìn)行了研究。得到的固定化酶對10-7mol/L水平下的敵敵畏仍有明顯的抑制響應(yīng)，這一效果明顯優(yōu)于游離酶的抑制響應(yīng)。

許學(xué)勤[25]研究了離子交換法得到的固定化小麥酯酶和固定化雞肝酯酶的主要性質(zhì)與相應(yīng)的游離態(tài)酶的性質(zhì)。結(jié)果表明，固定化小麥酯酶的最適pH在5.5附近，比游離小麥酯酶的最適pH增加了0.8個(gè)pH單位；固定化雞肝酯酶的最適pH在8.0附近，比游離雞肝酯酶的最適pH增加0.5個(gè)pH單位；固定化小麥酯酶的最適溫度與游離酶的相當(dāng)，但酶活力溫度曲線的峰形變?。还潭ɑu肝酯酶的最適溫度比游離雞肝酯酶下降了5 ℃，酶活力溫度曲線的峰形也略變陡峭。這2種固定化酯酶對有機(jī)磷類農(nóng)藥(敵敵畏)抑制的響應(yīng)明顯高于游離酶對農(nóng)藥抑制的響應(yīng)。

許娟[26]采用硝酸纖維素膜(NC)和植物酯酶研究了農(nóng)藥殘留快速檢測固定化酶片。通過對酶用量、戊二醛濃度、牛血清白蛋白濃度、固定化pH和溫度的參數(shù)優(yōu)化，建立了NC膜固定化植物酯酶的方法，即：20 μL游離酶，0.05%戊二醛2 μL，0.5%牛血清白蛋白15 μL，pH7.0緩沖液體系，4 ℃下固定8 h。對游離酶和固定化酶的特性進(jìn)行了比較，發(fā)現(xiàn)固定化植物酯酶對底物的最適反應(yīng)溫度為35 ℃，比游離酶提高了5 ℃；最適pH為8.0，比游離酶提高了0.5個(gè)pH單位。游離酶和固定化酶對4種農(nóng)藥(敵敵畏、滅多威、氧樂果、久效磷)的敏感性進(jìn)行比較，發(fā)現(xiàn)固定化酶對4種農(nóng)藥敏感性都較游離酶有所提高，固定化酶更適合于農(nóng)藥的快速檢測。

馬文石[27]等以聚乙烯醇(PVA)與四乙氧基硅烷(TEOS)為原料，通過原位溶膠-凝膠法制備了PVA/SiO2有機(jī)無機(jī)雜化溶膠，并將顯色劑和植物酯酶分散于溶膠中干燥成膜，得到一類多孔性和親水親丙酮性可調(diào)的雜化膜。用掃描電鏡(SEM)和衰減全反射紅外光譜(ATR)對膜的斷面形貌和表面化學(xué)基團(tuán)進(jìn)行了觀察和表征；研究膜的親水親丙酮、耐水耐丙酮性能以及顯色與響應(yīng)性能。結(jié)果表明：膜的多孔性、親水親丙酮性能可通過膜中植物酯酶、顯色劑的含量來調(diào)控；在乙酸-α-萘酯溶液中，該膜在可見光520 nm處出現(xiàn)一個(gè)新的吸收峰，且當(dāng)測試液中乙酸-α-萘酯的質(zhì)量百分?jǐn)?shù)為20%時(shí)，膜的響應(yīng)時(shí)間為12 min、透光率為1.72%。

固定化酶與水溶性酶(游離態(tài))相比：酶的使用效率提高；酶的反應(yīng)過程可以嚴(yán)格控制；但固定化酶的活力有所損失，同時(shí)也增加了固定化的成本；與完整細(xì)胞比較，不適用于多酶系的測定，特別是需要輔因子的反應(yīng)，同時(shí)對胞內(nèi)酶需經(jīng)分離純化后，才能進(jìn)行固定。

4 檢測方法

目前用酶抑制法測定農(nóng)藥殘留時(shí)，根據(jù)所選用酶的種類不同，可以采用不同的底物進(jìn)行反應(yīng)，對分解產(chǎn)物測定常用的方法有光度法和生物傳感器法等。

4.1 酶抑制光度法

酶的存在的狀態(tài)可以分為游離態(tài)的酶和固定化酶，應(yīng)用光度法分析時(shí)多采用酶溶液(游離態(tài))，目前應(yīng)用這種方法檢測有機(jī)磷及氨基甲酸酯類農(nóng)藥較多，作者們探討了酶抑制法的檢測范圍，論證了在檢測時(shí)加入表面活性劑的顯著效果。

陳帆[28]將植物酯酶水解2,6-二氯靛酚乙酯產(chǎn)生的光密度的變化這一特性應(yīng)用于毒死蜱的檢測。通過正交實(shí)驗(yàn)，找出了最優(yōu)的反應(yīng)條件。應(yīng)用此法可半定量檢測出在0.05～0.09 mg/L濃度范圍內(nèi)的毒死蜱。

鐘樹明等[29,30]應(yīng)用植物酯酶抑制技術(shù)測定有機(jī)磷農(nóng)藥時(shí)，用植物酯酶水解橙色的2,6-二氯靛酚乙酯，用光度法在605 nm處測定分解的靛酚(藍(lán)色)光密度，測定有機(jī)磷的含量。2,6-二氯靛酚乙酯既是底物又具有顯色劑的功能，相對于乙酸-1-萘酯為底物，固藍(lán)B鹽為顯色劑的反應(yīng)體系，該方法既簡便又準(zhǔn)確。常用的幾種有機(jī)磷及氨基甲酸酯類農(nóng)藥的測定限在0.001 5～0.330 0 mg/L范圍內(nèi)。

趙永福[31]等在所測試的5種表面活性劑(OP、CTMAB、CPC、SLS及SDS)中,陰離子表面活性劑、十二烷基硫酸鈉(SDS)對被植物酯酶催化的顯色反應(yīng)呈現(xiàn)顯著的增加靈敏度和穩(wěn)定性的作用，同時(shí)還使顯色劑的保存時(shí)間得以延長。

董超[32]采用植物酯酶抑制法進(jìn)行有機(jī)磷農(nóng)藥的測定，實(shí)驗(yàn)過程中作者在傳統(tǒng)酶法測定農(nóng)藥殘留用的乙酸萘酯和固藍(lán)B鹽組成的液體顯色劑的基礎(chǔ)上按一定的比例與添加劑混合處理，配制成固體顯色劑，從而把顯色劑的有效使用期限延長到了3個(gè)月。

王繼軍[33]等選用聚苯乙烯微孔反應(yīng)板作為酶的載體，將自制的植物酯酶固定在載體上的微孔內(nèi)壁表面，制成農(nóng)藥快速檢測板。采用酶抑制顯色方法，檢測有機(jī)磷和氨基甲酸酯類農(nóng)藥，其檢測靈敏度在0.01～0.1 mg/kg范圍。該農(nóng)藥快速檢測板為現(xiàn)場檢測這兩類農(nóng)藥提供了簡便而快捷的方法。

宋茹等[34]在以黃瓜、小白菜為主要試驗(yàn)材料，利用有機(jī)磷、氨基甲酸酯類農(nóng)藥能夠抑制乙酰膽堿酯酶活性的毒理機(jī)制，研制了一種簡易快速，可定性及半定量測定蔬菜中常用的有機(jī)磷、氨基甲酸酯類農(nóng)藥殘留的酶片快速檢測法測定了敵敵畏、辛硫磷、甲基對硫磷的檢出限為0.5 mg/kg、甲胺磷的0.01 mg/kg、克百威為0.84 mg/kg、滅多威為0.89 mg/kg。

于基成[35]等根據(jù)酶抑制法的原理，采用含1% BSA-GA(1∶1)0.1 mol/L pH 6.2的磷酸緩沖液將酶粗提液稀釋1倍于37 ℃下固定24 h, 建立了以聚苯乙烯反應(yīng)板為反應(yīng)載體的農(nóng)藥(有機(jī)磷)快速檢測方法，其最小檢出量為0.245 μg(遠(yuǎn)低于有機(jī)磷農(nóng)藥韓國殘留限量的標(biāo)準(zhǔn))。

韓承輝等[10,36,37]研制了一種酶片，在適宜的溫度與酸度條件下，用酶片與底物液2,6-二氯靛酚乙酯反應(yīng)，根據(jù)反應(yīng)前后顏色的變化判斷農(nóng)藥的殘留量，對常用幾種有機(jī)磷農(nóng)藥其檢測限在0.06～10.0 mg/kg范圍。這種酶片具有價(jià)格低、易獲取、穩(wěn)定性好等特點(diǎn)，適用于田間、農(nóng)貿(mào)市場和家庭在無儀器設(shè)備條件下檢測有機(jī)磷農(nóng)藥的危險(xiǎn)水平。研究表明，固定化酶不僅穩(wěn)定性比游離態(tài)酶提高，而且檢測的靈敏度也有所提高。

總之，光度法中存在的問題是: 植物酯酶在使用中干擾較多，專一性較差，檢測所需的分光光度計(jì)與恒溫箱不易攜帶，并且綠色植物的提取液對測定有干擾。

4.2 生物傳感器檢測法

生物傳感器法是獨(dú)立于酶抑制光度法的一種檢測方法，它通常是指由一種生物敏感部件—傳感器對特定種類化學(xué)物質(zhì)或生物活性物質(zhì)具有選擇性和反應(yīng)的分析裝置。傳感器的生物敏感層與復(fù)雜樣品中特定的目標(biāo)分析物之間(酶與底物、抗體與抗原、外源凝集素與糖、核酸與互補(bǔ)片段之間)的識別反應(yīng)會(huì)產(chǎn)生一些物理化學(xué)信號(如光熱、聲音、顏色、電化學(xué))的變化, 這些變化通過不同原理的轉(zhuǎn)換器(如光敏管壓電裝置、光極光敏電阻、離子選擇性電極等)轉(zhuǎn)換成第二信號(通常為電信號) , 經(jīng)放大后顯示或記錄, 按生物功能區(qū)分生物傳感器包括酶傳感器、組織傳感器和微生物傳感器。

欒崇林等[38]采用研究溶膠凝膠法包埋植物酯酶的方法，制備有機(jī)磷傳感膜，將該傳感膜與光纖等器件耦合成有機(jī)磷光纖生物傳感器，用于檢測7種有機(jī)磷農(nóng)藥觀察發(fā)現(xiàn)，有機(jī)磷農(nóng)藥濃度在0.010～10.000 μg/mL濃度范圍內(nèi)，抑制率與農(nóng)藥濃度的對數(shù)值呈良好線性關(guān)系，樣品加標(biāo)回收率在90.8%～96.3%，測定值的相對標(biāo)準(zhǔn)偏差小于5%。

馬文石等[39]采用聚乙烯醇(PVA)與四乙氧基硅烷(TEOS)通過原位溶膠-凝膠法制備了PVA/SiO2有機(jī)/無機(jī)雜化溶膠，并將顯色劑和植物酯酶分散于溶膠中，干燥成膜，得到一類透明度高、親水-親丙酮性可調(diào)、貯存性好的傳感膜。該傳感膜在乙酸-α-萘酯溶液中，于可見光520 nm處出現(xiàn)一個(gè)新的吸收峰。傳感膜在制備后的12 d內(nèi)活性明顯下降，之后基本保持穩(wěn)定，并且冷藏活性下降率要比室溫保存小很多。但不論是冷藏還是在室溫下保存，被固定在雜化膜中的酶的活性穩(wěn)定性都比在溶液狀態(tài)下明顯提高。

綜上所述，固定化酶主要有以下特性發(fā)生變化：(1)穩(wěn)定性。固定化酶的穩(wěn)定性一般比游離酶的穩(wěn)定性好，主要表現(xiàn)在對熱、蛋白酶、各種變性劑的耐受性增強(qiáng)，使用和保存的穩(wěn)定性提高；(2)最適溫度。固定化酶的最適作用溫度一般與游離酶差不多，活化能也變化不大。但也有些固定化酶的最適溫度與游離酶比較有明顯的差別。例如，氨基酸?；缸钸m溫度一般在60 ℃左右，用DEAE-纖維素固定化后，其最適溫度高達(dá)72 ℃；(3)最適pH。酶固定化后，其最適pH往往會(huì)發(fā)生變化，這一點(diǎn)在使用時(shí)應(yīng)引起注意。影響固定化酶最適pH因素主要有2個(gè)：一個(gè)是載體的帶電性質(zhì)；另一個(gè)是酶催化反應(yīng)的產(chǎn)物性質(zhì)；載體的帶電性質(zhì)對固定化酶的最適pH也有明顯的影響。一般說來，帶負(fù)電的載體制備固定化酶，其最適pH比游離酶高；而帶正電的載體制備的固定化酶其最適pH比游離酶低；而用電中性的載體制備的固定化酶，其最適pH一般不改變。酶催化反應(yīng)的產(chǎn)物性質(zhì)對固定化酶的最適pH也有一定的影響。一般來說，產(chǎn)物為酸性時(shí)固定化酶的最適pH比游離酶高一些；產(chǎn)物為堿性時(shí)，固定化酶的最適pH比游離酶低一些，產(chǎn)物為中性時(shí)，最適pH一般不改變。(4)底物特異性。固定化酶的底物特異性與游離酶比較有所不同。比如對一些可作用于大分子底物，也可作用于小分子底物的酶而言，經(jīng)固定化后，由于受到載體空間位阻作用的影響，大分子底物難于接近酶分子，而使其催化反應(yīng)速度大大降低，而小分子底物的反應(yīng)速度則不受影響。

5 討論與展望

植物酯酶作為農(nóng)藥殘留檢測用3種主要酶生物識別元件之一，來源廣泛，取材方便，價(jià)格便宜，具有廣闊的開發(fā)應(yīng)用前景，然而其作為一種生物活性物質(zhì)，植物酯酶極易失活或變性，同時(shí)不同植物酯酶對不同農(nóng)藥品種的抑制強(qiáng)度不同；現(xiàn)將應(yīng)用植物酯酶存在的問題及后面可能的研究重點(diǎn)總結(jié)如下：

(1)目前對酶的研究大多集中在對酯酶的應(yīng)用溫度、pH、濃度及保存等方面的探索，但植物體屬于一個(gè)龐大復(fù)雜的體系，是否需要對酶的提取和凈化工藝的研究有所倚重，盡可能避免雜質(zhì)在分析過程中帶來的干擾效應(yīng)，影響檢測的靈敏度。

(2)酶的檢測方法主要集中在物理和化學(xué)方面，其中物理方面是傳統(tǒng)的比色法既分光光度法，用此方法檢測農(nóng)藥殘留時(shí)，一般酶提取液來自植物體，但所制酶液保存期短，而且底物和顯色劑分別為乙酸萘酯和固藍(lán)B鹽溶液，兩者混合成的顯色基質(zhì)溶液不穩(wěn)定，需現(xiàn)用現(xiàn)配[40]；同時(shí)由于基質(zhì)效應(yīng)的存在，它一般在很大程度上影響分析，還有在此分析過程中酶的使用壽命的問題；經(jīng)過眾多學(xué)者的研究，人們發(fā)現(xiàn)如果把酶固定(化學(xué)檢測方法)在試紙上或其它化學(xué)物質(zhì)上，酶的活性比以前提高了，使用活力由過去游離態(tài)的現(xiàn)配現(xiàn)用到現(xiàn)在的固定態(tài)保存3個(gè)月甚至更長的時(shí)間，隨著研究的深入，研究者發(fā)現(xiàn)酶經(jīng)固定后，其結(jié)構(gòu)和性質(zhì)會(huì)發(fā)生相應(yīng)的變化，然而如何克服該種現(xiàn)象的發(fā)生還值得深思。

(3)植物酯酶憑借其在自然界的眾多優(yōu)勢，正逐漸被人們所接納，然而如何研制出更穩(wěn)定的、有效期更長的、對不同品種農(nóng)藥檢測更新穎的方法，是迫待解決的問題。

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2009-02-14

韓 波(1984-),男,湖北十堰人,碩士研究生,主要從事農(nóng)藥殘留與分析研究.

姚安慶，E-mail: yaq990@126. com.

10.3969/j.issn.1673-1409(S).2009.03.019

X839.2

A

1673-1409(2009)03-S060-06