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    IL-6和MMP-9在大鼠急性壞死性胰腺炎發(fā)病過程中的作用

    2009-11-27 01:46:10趙蕊陳少夫
    中華胰腺病雜志 2009年6期
    關(guān)鍵詞:制模蛋白酶免疫組化

    趙蕊 陳少夫

    IL-6和MMP-9在大鼠急性壞死性胰腺炎發(fā)病過程中的作用

    趙蕊 陳少夫

    近年來,有關(guān)細(xì)胞因子及基質(zhì)金屬蛋白酶類在重癥急性胰腺炎(SAP)發(fā)病中的作用已受到重視。目前認(rèn)為,單核巨

    噬細(xì)胞系統(tǒng)異常激活并產(chǎn)生過多的細(xì)胞因子是SAP時局部和全身并發(fā)癥的主要機(jī)制。本文觀察白介素-6(IL-6)和基質(zhì)金屬蛋白酶-9(MMP-9)在急性壞死性胰腺炎(ANP)發(fā)病機(jī)制中的作用及兩者的相關(guān)性,為SAP發(fā)病機(jī)制的研究提供更為可靠的理論依據(jù)。

    一、材料與方法

    1.模型制備及標(biāo)本采集:雄性Wistar大鼠60只,體重170~190 g,由中國醫(yī)科大學(xué)實驗動物中心提供。隨機(jī)分為對照組和制模后1、2、3、4、5 d組,每組10只。術(shù)前12 h禁食,不禁水。采用逆行膽胰管注入4.5%牛磺膽酸鈉1 ml/kg體重方法制備ANP模型。對照組注射等量生理鹽水。制模后1、2、3、4、5 d分別斷頭處死大鼠,切取胰腺,10%中性福爾馬林溶液固定,石蠟包埋、切片,HE染色,行常規(guī)病理檢查。

    2.IL-6和MMP-9免疫組化染色:胰腺包埋組織連續(xù)切片后進(jìn)行免疫組化染色。IL-6免疫組化試劑盒購于武漢博士德公司,MMP-9免疫組化試劑盒購于北京中山公司。具體步驟按試劑盒說明書操作。40倍鏡下,每張切片選取四周及中央5個區(qū)域內(nèi)陽性反應(yīng)最多的視野,測陽性反應(yīng)面積比(陽性面積/胰腺組織面積×100%),取均值。

    二、結(jié)果

    1.胰腺組織病理改變:對照組胰腺結(jié)構(gòu)正常,無出血和壞死。ANP組胰腺組織間質(zhì)腫脹,彌漫性出血及片狀壞死,腺泡細(xì)胞和脂肪壞死,且可見大量炎癥細(xì)胞浸潤。

    2.IL-6和MMP-9蛋白表達(dá)變化:細(xì)胞質(zhì)棕黃染色或伴有細(xì)胞核棕黃色顆粒為陽性。對照組IL-6無表達(dá),制模后IL-6主要表達(dá)于胰腺腺泡胞質(zhì)內(nèi)及細(xì)胞外基質(zhì),制模后第3天達(dá)最高峰。對照組MMP-9為低表達(dá),制模后MMP-9主要表達(dá)于胰腺腺泡胞質(zhì)內(nèi)及細(xì)胞外基質(zhì),制模后第4天達(dá)最高峰(Plt;0.05,表1,圖1)。

    3.IL-6與MMP-9表達(dá)的相關(guān)性:IL-6與MMP-9的相關(guān)系數(shù)r=0.317,P=0.025,兩者呈正相關(guān)。

    表1 各組IL-6和MMP-9蛋白表達(dá)

    注:與對照組比較,aPlt;0.05;與其他各組比較,bPlt;0.05

    圖1制模后第3天IL-6(A)與MMP-9(B)表達(dá)(免疫組化 ×400)

    討論研究證明,炎癥等疾病的發(fā)生及其病變過程與IL-6的異常表達(dá)有著密切相關(guān)[1]。IL-6可作用于多種靶細(xì)胞,能激化炎性細(xì)胞對炎性介質(zhì)的效應(yīng)[2]。IL-6在AP發(fā)病及發(fā)展過程中發(fā)揮重要作用。SAP患者中IL-6水平明顯增高[3]。本結(jié)果顯示,制模后IL-6表達(dá)升高,第3天達(dá)最高峰,以后有所下降,這與Mckay等[2]、Chen等[4]報道的結(jié)果相一致,說明IL-6在SAP發(fā)展中起重要作用。以IL-6為主的大量炎性細(xì)胞因子可致SAP向多器官功能衰竭(MSOF)發(fā)展[5],甚至可作為AP患者并發(fā)呼吸衰竭的指標(biāo)[6],預(yù)測SAP的嚴(yán)重程度[7]。

    MMP-9是金屬蛋白酶家族中分子質(zhì)量最大的酶,以酶原形式存在,又稱為明膠酶B。MMP-9由中性粒細(xì)胞、單核細(xì)胞、血管內(nèi)皮細(xì)胞等多種細(xì)胞分泌?;罨腗MP-9具有基質(zhì)金屬蛋白酶的一些共同特點[8]:(1)能裂解一種或多種細(xì)胞外基質(zhì);(2)可被金屬蛋白酶組織抑制劑(TiMPs)及耦合劑所抑制。正常情況下,MMP-9的活性被控制在較低水平,主要參與機(jī)體生理活動的需要。但在炎癥、組織重塑等各種病理生理過程中高度表達(dá),陳平等[9]認(rèn)為,MMP-9在SAP中與病情的嚴(yán)重程度有明顯相關(guān)性。Lohr等[10]報道,SAP病程中伴有細(xì)胞間基質(zhì)的分解,并與病情的嚴(yán)重性相關(guān),間接證明MMP-9在SAP疾病的發(fā)生發(fā)展中起重要作用。本結(jié)果顯示,MMP-9在制模后平穩(wěn)升高,第4天達(dá)最高峰,與上述結(jié)果基本一致。

    本結(jié)果還顯示,IL-6與MMP-9存在正相關(guān)性。這與IL-6延遲中性粒細(xì)胞(PMN)凋亡,保持大量PMN的存活,而PMN在前炎癥因子的刺激下,大量釋放MMP-9有關(guān)。因此在SAP發(fā)病過程中檢測IL-6與MMP-9,有利于判斷疾病的嚴(yán)重程度。

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    2009-02-13)

    (本文編輯:呂芳萍)

    10.3760/cma.j.issn.1674-1935.2009.06.021

    110006 沈陽,沈陽市第六人民醫(yī)院(趙蕊);中國醫(yī)科大學(xué)附屬盛京醫(yī)院消化內(nèi)科(陳少夫)

    陳少夫,Email:csf196211@yahoo.com.cn

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